巨噬细胞去除实验–专业

巨噬细胞去除实验

  去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬 clodronate Liposome, 在溶酶体的作用下,clodronate 可释放出来,当其达到一定浓度时,可引起巨噬细胞的凋亡, 从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome 可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞,如肺、 膝关节、肿瘤局部和脑等;也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞,如肝脏 和脾脏中的巨噬细胞。
1. 脂质体的准备 可以自己制备或者购买商品话的脂质体 荷兰clodronaiposomes和美国Formumax Scientific公司都可以提供现成的商品化的高质量clodronate Liposome 具体信息如下
 
 
货号 品名 包装 价格 品牌   
F70101C-N Clodronate Liposomes 不含对照 去除率85% 2ml 2985 FormuMax   
F70101C-N Clodronate Liposomes 不含对照 去除率85% 10ml 10485 FormuMax   
F70101-N Control Liposomes 对照 2ml 1485 FormuMax   
F70101-N Control Liposomes 对照 10ml 5235 FormuMax   
F70101C-NC Control Liposomes 含对照 去除率85% 2ml 3585 FormuMax   
F70101C-NC Control Liposomes 含对照 去除率85% 10ml 12585 FormuMax   
F70101C-A Clodronate Liposomes 不含对照 去除率95% 2ml 4485 FormuMax   
F70101C-A Clodronate Liposomes 不含对照 去除率95% 10ml 15735 FormuMax   
F70101C-AC Clodronate Liposomes 含对照 去除率95% 2ml 5235 FormuMax   
F70101C-AC Clodronate Liposomes 含对照 去除率95% 10ml 15735 FormuMax   
Clodronate  Clodronate Liposomes and PBS Liposomes per 10ml 10ml 4500 clodronaiposomes 

2. 脂质体的体内注射 隔日尾静脉注射 200ul clodronate liposome,根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化 或流式检测巨噬细胞的去除效率。
尾静脉注射方法: 尾静脉注射方法:
 1. 将小鼠放在倒扣的饭盒内,从孔口拉出尾巴,小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉,2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面,3 条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉;
2. 将纱布浸泡于约 70 度的温水中,拿出后包裹尾巴,以达到使尾部血管扩张及软化表皮 角质的目的;
3. 行尾部静脉注射时,以左手拇指和食指前后摁住鼠尾,留出约 2cm 一段,使皮肤紧张, 静脉更为充盈,右手持 1ml 针头注射器,使针头与静脉平行(小于 30°角),从尾巴的下 1/4 处进针,开始注入药物时应缓慢,仔细观察,如果无阻力,无白色皮丘出现,说明 已刺入血管,可注入药物。
4. 有的实验需连日反复尾静脉注射给药,注射部位应尽可能从尾端开始,按次序向尾根部 移动,更换血管位置注射给药。拔出针头后,用棉球按住注射部位轻压 1-2min,止血。

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Encapsula NanoSciences——纳米脂质体专家

 Clodrosome®,Encapsome®®和Fluoroliposome是Encapsula NanoSciences 公司的注册商标。公司已经连续8年为世界上数以百计的大专院校、科研院所、政府实验室和生物制药公司提供巨噬细胞消耗用品和定制配方。

 

 

Encapsula NanoSciences是一个专业专注于提供研究、开发、制造纳米颗粒的具有知识产权的公司。,纳米粒子又被称为脂质体,被客户用在学术和工业这两个领域。Encapsula经常为海外或美国的一些公共或私人投资的实验室提供一些实验室制备liposomally-encapsulated化合物的定制,如clodronate脂质体(Clodrosome),封装的抗肿瘤药物脂质体和遗传脂质体材料。

 

Encapsula正广泛的被一些重点大学的合成化学家和肿瘤生物学家用于对生物脂质体运载系统的学术研究中。

 

产品信息如下:

Encapsula NanoSciences是一家专注于以纳米脂质体产品研发和生产的高科技公司,产品广泛应用于政府机构、制药企业、生物技术公司、医疗器械、食品安全等领域的科学研究和工业应用。Encapsula在纳米脂质体领域已有着数十年的苦心钻研,公司的科学家们有着丰富的脂质体产品研究和应用经验,通过合理设计脂质体组成的磷脂成分,可实现(1)特定条件下给药:即在特定温度时或特定pH时,或到达特定的组织或细胞类型时(通过识别、结合组织或细胞表面标志物或抗体,如抗肿瘤药物的靶向给药),同样也可回避某些特定的组织或细胞,其微细结构可实现鼻腔给药和吸入式肺部给药;(2)使难溶于水的药物均匀分布于水环境中,同样可使难溶于水的脂肪样成分如维生素、抗生素、抗氧化剂、香料成分等均匀分布在食物中;(3)与细胞膜高度相似的结构可用于细胞转染、药物的细胞膜穿透等研究;(4)保护内容物不被胃肠道消化酶、酸腐蚀;(5)延长维生素和抗氧化剂的保质期;(6)通过表面包被特定分子以增强药物的肠道吸收率;(7)通过携带荧光染料等识别颗粒实现药物或蛋白示踪。

 

普通脂质体产品系列

    普通脂质体未包被药物,表面也未经特殊分子处理,可作为人工细胞膜模型或空白对照,用于研究细胞膜蛋白。Encapsula NanoSciences在该系列产品中包括两种主要的脂质体类型:单层脂质体及多层脂质体。单层脂质体为一层单一成分的磷脂,体内包含水溶性缓冲液。多层脂质体类似于洋葱模型,即有多个单层脂质体形成的一个同心圆结构,每层之间可被水溶性缓冲液隔离,另外,多个同心圆形的脂质体还可以共同组成一个非同心圆的复杂多层脂质体,外包一个单层磷脂分子层,已实现更多特定功能。

 

磁性材料包被的脂质体产品系列

    包被磁性材料的脂质体可用于医疗检验和治疗。如包被磁性材料的脂质体可在磁力作用下输送至体内需要的部位(如肿瘤),局部释放其内含的活性药物成分,而包被可吸收X射线材料的脂质体可用于肿瘤化疗,在磁共振等影像检验时可增加成像质量。目前Encapsula NanoSciences提供的磁性材料包被脂质体产品系列主要包括:金属膜脂质体Me-DTPA-DMPE /Me -DTPA(衬于脂质体内外)、金属核心脂质体(MexOy/DTPA-Gd, -Fe, cis-Pt)、金属外壳脂质体(Fe-chelate, or Gd-chelate (DTPA-lipid))

 

包被药物的脂质体产品系列

该系列产品为包被特定药物的脂质体,Encapsula NanoSciences丰富的产品线含有上千种药物包被的脂质体,包括:

(1)氯磷酸二钠(DMDP)包被的脂质体:用于治疗血钙增多、恶性肿瘤骨转移(可减少疼痛、减轻骨折风险、阻止进一步肿瘤骨转移)、清除动物模型体内特定组织或器官的巨噬细胞。

   (2)包被抗生素的脂质体:可增强抗生素的活性,增强体液中储存周期,减少副作用。目前Encapsula NanoSciences可提供上百种抗生素包被的脂质体,如

阿霉素,丁胺卡那霉素,两性霉素B,氨苄西林,阿奇霉素,杆菌肽,青霉素,博莱霉素,卷曲霉素,羧苄青霉素,头孢他定,头孢三嗪,头孢氨苄,氯霉素,环丙沙星,克拉霉素,克林霉素,氯法齐明,环丝氨酸,红霉素,地贝卡星,阿霉素,多西环素,恩诺沙星,红霉素,乙胺丁醇,ethionamide药物,庆大霉素,异烟肼,卡那霉素,美罗培南,新霉素,奈替米星,苯唑西林,巴龙霉素,青霉素G,哌拉西林,多粘菌素B,利福布汀,利福平,西索米星,司帕沙星,链霉素,替考拉宁,妥布霉素,万古霉素和紫霉素等。

(3)抗肿瘤药物包被的脂质体:Encapsula NanoSciences可提供上百种抗肿瘤活性的药物包被的脂质体。

(4)抗氧化试剂包被的脂质体:可用于自由基生物学和医学研究。其中包被的抗氧化剂包括:脂溶性化学抗氧化剂如泛醌(例如辅酶Q10),类视色素,类胡萝卜素,脂溶性类黄酮(如槲皮素,橙皮素,柚皮素),他莫昔芬,维生素E(生育酚和生育三烯酚),合成脂溶性抗氧化剂如BHT, TBHQ和普罗布考等;水溶性化学抗氧化剂如尿酸盐,谷胱甘肽,N-乙酰半胱氨酸(NAC),亲半胱氨酸,硫辛酸,二氢硫辛酸,水溶性类黄酮(例如,碧容健)和抗坏血酸(维生素C);以及酶促抗氧化剂如超氧化物歧化酶。

 

究表明包被在脂质体内的消炎药具有更小的副作用。

(6)包被ATP的脂质体:作为细胞zui重要的能量形式,ATP在心肌梗死和脑梗死中起着至关重要的作用,在缺血短时间内组织内ATP即急剧下降,导致细胞死亡。为缺血区域细胞提供额外的ATP有着重要的医疗价值,然而游离ATP难以穿越细胞膜,而且在血液中迅速降解,因此难以直接应用于临床。脂质体的包被可增加ATP稳定性,并且可通过质膜融合的形式进入细胞,是一种潜在的ATP治疗缺血方案。

(7)血红蛋白包被的脂质体(人工血液):人工血液具有重要的正常血液不具备的优势:无血型限制,无细菌病毒风险、可大量生产。此外还可通过在人工血液脂质体上掺入修饰的分子增加人工血液的功能。

(8)维生素包被的脂质体:包括Vitamins A/ E / C。

    此外,Encapsula NanoSciences还提供多种形式的药物包被脂质体服务。

Start resolving the effects of macrophages on your experimental models now…

 

1. Plan your experiments including controls evaluating the effects of “empty” liposomes.

 

This website contains references to the 1,000+ publications which have utilized liposomal clodronate. The database has these references sorted by dosing method, amount dosed and study system (animal species, cell type, etc.) while the various routes of administration are described in detail and the associated publications briefly reviewed. Additional information on the use of fluorescent liposomes, mannosylated liposomes, and related topics may be found under the Other Info tab. Our comprehensive collection and review of published clodronate liposome work will assist you in designing your macrophage depletion studies as well as determining which Clodrosome products best suit your experimental requirements.

 

Regardless of your experimental design, you will need to include control groups to evaluate the effect of liposomes without encapsulated clodronate (“empty” liposomes) in your model. The presence of particles, such as liposomes, can alter immune/inflammatory responses both in vivo and in vitro.

 

We can also provide custom clodronate liposome formulations should you determine that your application calls for a liposomal clodronate formulation not currently listed in our product line.

 

2. Calculate the total volume required of both liposomal clodronate and control liposomes.

 

The database will allow you to review the liposomal clodronate doses that others have used for studies in a variety of species and experimental conditions.

 

Each reagent vial contains 5 ml of a liposome suspension. Clodronate-containing liposome suspensions have a clodronate concentration of 5 mg/ml while the control liposome suspensions (no encapsulated clodronate) have the same lipid concentration as the clodronate liposomes. Therefore each vial of clodronate liposomes contains a total of 25 mg of encapsulated clodronate and the control liposomes should be dosed at the same volume as the clodronate liposomes. The Macrophage Depletion Kits each contain one vial of a clodronate liposome suspension and one vial of a control liposome suspension.

 

If those who will be working directly with the Clodrosome products are not experienced in handling and dosing liposomes, you may want to order extra reagents and animals. Clodrosome products are slightly viscous, so laboratory personnel may need to familiarize themselves with handling and dosing the products before starting your study. See the Package Insert for more details.

 

3. Select your Clodrosome products.

 

Products may be ordered as individual reagents (i.e. Clodrosome, Encapsome, Fluoroliposome) or as Macrophage Depletion Kits which contain clodronate liposomes and matched control liposomes.

 

Answering the following 2 questions will l you which products to order for your experiments:

 

Do you need mannosylated liposomes?

Yes

 

No

 

4. Order your Clodrosome products.

 

Up to 25 ml of any product may be ordered from the Products page using a credit card for payment. If you need more than 25 ml of any reagent, you may request a quotation for pricing of larger volumes. See Ordering Info for payment by PO. We recommend that you schedule the delivery of your order so that you can begin dosing within a day or two of receiving your liposomes (have the animals in-house and pre-treated, if necessary, and/or cells isolated, plated, confluent, etc.).

 

部分产品报价

 

品牌 品名 货号 规格 RMB报价
Encapsula NanoSciences Standard macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Encapsome®) SKU # 8901-2ml 2ml 3,400
Encapsula NanoSciences Standard macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Encapsome®) SKU # 8901-5ml 5ml 6,800
Encapsula NanoSciences Standard macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Encapsome®) SKU # 8901-10ml 10ml 11,900
Encapsula NanoSciences Standard macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Encapsome®) SKU # 8901-15ml 15ml 17,000
Encapsula NanoSciences Standard macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Encapsome®) SKU # 8901-20ml 20ml 22,950
Encapsula NanoSciences Standard macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Encapsome®) SKU # 8901-25ml 25ml 28,050
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8902-2ml 2ml 4,080
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8902-5ml 5ml 8,075
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8902-10ml 10ml 14,365
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8902-15ml 15ml 20,145
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8902-20ml 20ml 26,350
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8902-25ml 25ml 32,300
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8905-2ml 2ml 4,080
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8905-5ml 5ml 8,075
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8905-10ml 10ml 14,365
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8905-15ml 15ml 20,145
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8905-20ml 20ml 26,350
Encapsula NanoSciences Fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of Clodrosome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8905-25ml 25ml 32,300
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8906-2ml 2ml 4,760
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8906-5ml 5ml 9,350
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8906-10ml 10ml 16,830
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8906-15ml 15ml 23,630
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8906-20ml 20ml 31,790
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8906-25ml 25ml 38,675
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8907-2ml 2ml 4,760
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8907-5ml 5ml 9,350
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8907-10ml 10ml 16,830
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8907-15ml 15ml 23,630
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8907-20ml 20ml 31,790
Encapsula NanoSciences Full macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of Clodrosome®, one vial of Encapsome® and one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8907-25ml 25ml 38,675
Encapsula NanoSciences Three color Fluoroliposome® kit(One vial of Fluoroliposome®-DiI, one vial of Fluoroliposome®-DiO, one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8908-2ml 2ml 5,100
Encapsula NanoSciences Three color Fluoroliposome® kit(One vial of Fluoroliposome®-DiI, one vial of Fluoroliposome®-DiO, one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8908-5ml 5ml 9,860
Encapsula NanoSciences Three color Fluoroliposome® kit(One vial of Fluoroliposome®-DiI, one vial of Fluoroliposome®-DiO, one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8908-10ml 10ml 18,360
Encapsula NanoSciences Three color Fluoroliposome® kit(One vial of Fluoroliposome®-DiI, one vial of Fluoroliposome®-DiO, one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8908-15ml 15ml 24,990
Encapsula NanoSciences Three color Fluoroliposome® kit(One vial of Fluoroliposome®-DiI, one vial of Fluoroliposome®-DiO, one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8908-20ml 20ml 33,320
Encapsula NanoSciences Three color Fluoroliposome® kit(One vial of Fluoroliposome®-DiI, one vial of Fluoroliposome®-DiO, one vial of Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8908-25ml 25ml 40,120
Encapsula NanoSciences Clodrosome® SKU # 8909-2ml 2ml 2,533
Encapsula NanoSciences Clodrosome® SKU # 8909-5ml 5ml 5,083
Encapsula NanoSciences Clodrosome® SKU # 8909-10ml 10ml 8,483
Encapsula NanoSciences Clodrosome® SKU # 8909-15ml 15ml 11,883
Encapsula NanoSciences Clodrosome® SKU # 8909-20ml 20ml 15,283
Encapsula NanoSciences Clodrosome® SKU # 8909-25ml 25ml 18,683
Encapsula NanoSciences Encapsome® SKU # 8910-2ml 2ml 1,275
Encapsula NanoSciences Encapsome® SKU # 8910-5ml 5ml 2,465
Encapsula NanoSciences Encapsome® SKU # 8910-10ml 10ml 4,675
Encapsula NanoSciences Encapsome® SKU # 8910-15ml 15ml 6,375
Encapsula NanoSciences Encapsome® SKU # 8910-20ml 20ml 8,500
Encapsula NanoSciences Encapsome® SKU # 8910-25ml 25ml 11,050
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiI SKU # 8911-2ml 2ml 1,870
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiI SKU # 8911-5ml 5ml 3,655
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiI SKU # 8911-10ml 10ml 6,783
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiI SKU # 8911-15ml 15ml 9,265
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiI SKU # 8911-20ml 20ml 12,325
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiI SKU # 8911-25ml 25ml 14,875
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiO SKU # 8912-2ml 2ml 1,870
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiO SKU # 8912-5ml 5ml 3,655
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiO SKU # 8912-10ml 10ml 6,783
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiO SKU # 8912-15ml 15ml 9,265
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiO SKU # 8912-20ml 20ml 12,325
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiO SKU # 8912-25ml 25ml 14,875
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiD SKU # 8913-2ml 2ml 1,870
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiD SKU # 8913-5ml 5ml 3,655
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiD SKU # 8913-10ml 10ml 6,783
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiD SKU # 8913-15ml 15ml 9,265
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiD SKU # 8913-20ml 20ml 12,325
Encapsula NanoSciences Fluoroliposome®-DiD SKU # 8913-25ml 25ml 14,875
Encapsula NanoSciences Mannosylated macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Encapsome®) SKU # 8914-2ml 2ml 5,440
Encapsula NanoSciences Mannosylated macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Encapsome®) SKU # 8914-5ml 5ml 10,880
Encapsula NanoSciences Mannosylated macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Encapsome®) SKU # 8914-10ml 10ml 19,040
Encapsula NanoSciences Mannosylated macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Encapsome®) SKU # 8914-15ml 15ml 27,200
Encapsula NanoSciences Mannosylated macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Encapsome®) SKU # 8914-20ml 20ml 36,720
Encapsula NanoSciences Mannosylated macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Encapsome®) SKU # 8914-25ml 25ml 44,880
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8915-2ml 2ml 6,545
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8915-5ml 5ml 12,920
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8915-10ml 10ml 22,950
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8915-15ml 15ml 32,300
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8915-20ml 20ml 42,160
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiI macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8915-25ml 25ml 51,680
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8916-2ml 2ml 6,545
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8916-5ml 5ml 12,920
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8916-10ml 10ml 22,950
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8916-15ml 15ml 32,300
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8916-20ml 20ml 42,160
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiO macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8916-25ml 25ml 51,680
Encapsula NanoSciences Mannosylated fluorescent-DiD macrophage depletion kit(composed of one vial of m-Clodrosome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8917-2ml 2ml 6,545
Encapsula NanoSciences   SKU # 8917-5ml 5ml 12,920
Encapsula NanoSciences   SKU # 8917-10ml 10ml 22,950
Encapsula NanoSciences   SKU # 8917-15ml 15ml 32,300
Encapsula NanoSciences   SKU # 8917-20ml 20ml 42,160
Encapsula NanoSciences   SKU # 8917-25ml 25ml 51,680
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiI)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8918-2ml 2ml 7,650
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiI)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8918-5ml 5ml 14,960
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiI)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8918-10ml 10ml 27,030
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiI)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8918-15ml 15ml 37,740
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiI)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8918-20ml 20ml 51,000
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiI)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiI) SKU # 8918-25ml 25ml 62,050
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8919-2ml 2ml 7,650
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8919-5ml 5ml 14,960
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8919-10ml 10ml 27,030
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Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiO)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiO) SKU # 8919-20ml 20ml 51,000
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Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8920-2ml 2ml 7,650
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8920-5ml 5ml 14,960
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8920-10ml 10ml 27,030
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8920-15ml 15ml 37,740
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8920-20ml 20ml 51,000
Encapsula NanoSciences Full mannosylated macrophage depletion kit (w/Fluoroliposome®-DiD)(composed of one vial of m-Clodrosome®, one vial of m-Encapsome® and one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8920-25ml 25ml 62,050
Encapsula NanoSciences Three color mannosylated Fluoroliposome kit(One vial of m-Fluoroliposome®-DiI, one vial of m-Fluoroliposome®-DiO, one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8921-2ml 2ml 8,160
Encapsula NanoSciences Three color mannosylated Fluoroliposome kit(One vial of m-Fluoroliposome®-DiI, one vial of m-Fluoroliposome®-DiO, one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8921-5ml 5ml 15,810
Encapsula NanoSciences Three color mannosylated Fluoroliposome kit(One vial of m-Fluoroliposome®-DiI, one vial of m-Fluoroliposome®-DiO, one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8921-10ml 10ml 29,410
Encapsula NanoSciences Three color mannosylated Fluoroliposome kit(One vial of m-Fluoroliposome®-DiI, one vial of m-Fluoroliposome®-DiO, one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8921-15ml 15ml 39,950
Encapsula NanoSciences Three color mannosylated Fluoroliposome kit(One vial of m-Fluoroliposome®-DiI, one vial of m-Fluoroliposome®-DiO, one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8921-20ml 20ml 53,380
Encapsula NanoSciences Three color mannosylated Fluoroliposome kit(One vial of m-Fluoroliposome®-DiI, one vial of m-Fluoroliposome®-DiO, one vial of m-Fluoroliposome®-DiD) SKU # 8921-25ml 25ml 64,260
Encapsula NanoSciences m-Clodrosome® SKU # 8922-2ml 2ml 4,080
Encapsula NanoSciences m-Clodrosome® SKU # 8922-5ml 5ml 8,160
Encapsula NanoSciences m-Clodrosome® SKU # 8922-10ml 10ml 13,600
Encapsula NanoSciences m-Clodrosome® SKU # 8922-15ml 15ml 19,040
Encapsula NanoSciences m-Clodrosome® SKU # 8922-20ml 20ml 24,480
Encapsula NanoSciences m-Clodrosome® SKU # 8922-25ml 25ml 29,920
Encapsula NanoSciences m-Encapsome® SKU # 8923-2ml 2ml 2,040
Encapsula NanoSciences m-Encapsome® SKU # 8923-5ml 5ml 3,995
Encapsula NanoSciences m-Encapsome® SKU # 8923-10ml 10ml 7,480
Encapsula NanoSciences m-Encapsome® SKU # 8923-15ml 15ml 10,200
Encapsula NanoSciences m-Encapsome® SKU # 8923-20ml 20ml 13,600
Encapsula NanoSciences m-Encapsome® SKU # 8923-25ml 25ml 17,680
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiI SKU # 8924-2ml 2ml 3,060
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiI SKU # 8924-5ml 5ml 5,865
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiI SKU # 8924-10ml 10ml 10,880
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiI SKU # 8924-15ml 15ml 14,875
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiI SKU # 8924-20ml 20ml 19,720
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiI SKU # 8924-25ml 25ml 23,800
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiO SKU # 8925-2ml 2ml 3,060
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiO SKU # 8925-5ml 5ml 5,865
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiO SKU # 8925-10ml 10ml 10,880
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiO SKU # 8925-15ml 15ml 14,875
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiO SKU # 8925-20ml 20ml 19,720
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiO SKU # 8925-25ml 25ml 23,800
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiD SKU # 8926-2ml 2ml 3,060
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiD SKU # 8926-5ml 5ml 5,865
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiD SKU # 8926-10ml 10ml 10,880
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiD SKU # 8926-15ml 15ml 14,875
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiD SKU # 8926-20ml 20ml 19,720
Encapsula NanoSciences m-Fluoroliposome®-DiD SKU # 8926-25ml 25ml 23,800

 

上海金畔生物科技有限公司

巨噬细胞去除实验

 去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬clodronate Liposome,在溶酶体的作用下,clodronate可释放出来,当其达到一定浓度时,可引起巨噬细胞的凋亡,从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞,如肺、膝关节、肿瘤局部和脑等;也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞,如肝脏和脾脏中的巨噬细胞。

 

1.       脂质体的准备

美国的FormuMax Scientific可以提供多种clodronate Liposome 具体产品可以上http://www.liposomeexpert.com查询,他们中国代理商是上海金畔生物科技有限公司

www.jinpanbio.com  021-50837765

 

2.       脂质体的体内注射

隔日尾静脉注射200ul clodronate liposome,根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化或流式检测巨噬细胞的去除效率。

 

尾静脉注射方法:

1.       将小鼠放在倒扣的饭盒内,从孔口拉出尾巴,小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉,2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面,3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉;

2.       将纱布浸泡于约70度的温水中,拿出后包裹尾巴,以达到使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的;

3.       行尾部静脉注射时,以左手拇指和食指前后摁住鼠尾,留出约2cm一段,使皮肤紧张,静脉更为充盈,右手持1ml针头注射器,使针头与静脉平行小于30°,从尾巴的下1/4处进针,开始注入药物时应缓慢,仔细观察,如果无阻力,无白色皮丘出现,说明已刺入血管,可注入药物。

有的实验需连日反复尾静脉注射给药,注射部位应尽可能从尾端开始,按次序向尾根部移动,更换血管位置注射给药。拔出针头后,用棉球按住注射部位轻压1-2min,止血。

Real-time PCR实验注意事项

 

 

Real-time PCR实验注意事项
实验中的一些好习惯
加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均
移液枪用完之后要归到zui大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性
一定要记着关水浴箱,切记切记
多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这几乎是zui快提高的捷径了
所有的试剂都自己配,出了问题才好找原因
防止RNA酶污染的措施
1.   所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。
2.   塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用)。
3.   有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室温10min,然后用0.1% DEPC水冲洗,晾干。
4.   配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC,在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂,应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制,然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
5.   操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。
6.   设置RNA操作实验室,所有器械等应为。
二、常用的RNA酶抑制剂

1.  焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不*的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。
2.  异硫氰酸胍:目前被认为是zui有效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用。
3.  氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,它和RNA酶结合形成过渡态类物质,几乎能*抑制RNA酶的活性。
4.  RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂,可以和多种RNA酶结合,使其失活。
5.  其它:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。
因为DEPc不加选择的修饰蛋白质和RNA,因此在分离和纯化RNA过程中不能使用,而且它与一些缓冲液(例如Tri)不能相容
在所有RNA实验中,zui关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。
RNA酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。
研究人员造成的污染 RNA酶zui主要的潜在污染源是研究人员的手。因此进行RNA实验时应勤换手套。
DEPC能与胺和巯基反应,因而 含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理
(一)动植物总RNA提取-Trizol法
  Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA*蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑点分析,斑点杂交, Poly(A)+分离,体外翻译,RNase封阻分析和分子克隆。
  1、将组织在液N中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。
  2、研磨液室温放置5分钟,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒。
  3、取上层水相于一新的离心管,按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇,室温放置10分钟,12000g离心10分钟。
  4、弃去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,涡旋混匀,4
℃下7500g离心5分钟。
  5、小心弃去上清液,然后室温或真空干燥5-10分钟,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中,必要时可55
℃-60℃水溶 10分钟。RNA可进行mRNA分离,或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。
  [注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套,并尽可能在低温下操作。
另外,提取上清这步一定要小心,靠近沉淀的部分一定要舍得不要,要不然会有蛋白质污染,影响比值
  2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年。
总mRNA的提取(自己的经验)
一、  关于Trizol Reagent需要的试剂
1.  Chloroform:氯仿 (分析纯)
2.  Isoproplyl alcohol:异丙醇(分析纯)
3.  75% Ethanol(in DEPC-treated water):75%乙醇。要求用分析纯无水乙醇并用0.01%的DEPC处理过的无Rnase的水稀释。
4.  RNase-free water:无Rnase的水。方法是:将DEPC按0.01%(V/V)加在d H2O中500ml(50ul),在37过夜,并高压灭菌即得(150℃ 3小时)
5.  一次性塑料手套
6.  注意:DEPC有致癌之嫌
二、  关于Trizol Reagent的使用过程:
1.  Homogenization(匀浆)
a.  Tissues:组织
每100mg组织匀浆加1mlTrizol试剂,样品体积不能超过Trizol试剂的10%
b.  Cells Grown in monolayer(单层细胞接毒后出现病变的)
针对JEV细胞总RNA的抽提法:
BHK21细胞长成单层后,接毒0.5-1ml(采用大瓶),37吸附1h,倒掉,加维持液(含2%的血清和HEPE8的MEM)约5ml,维持天。出 现75%-100%的病变时,以PBS(预冷)冲洗细胞两次,直接在细胞瓶中加入Trizol试剂1ml/10cm2,吹吸几次,以裂解细胞(细胞瓶有两 种常用规格:大的约45cm2,小的约30cm2,故所用Trizol试剂分别约为4.5ml和3ml。Trizol试剂的加入是依细胞瓶而定,以盖满瓶 底为度,而不是依据细胞的数量,否则可导致DNA的污染)具体方法如下:(样品一定要新鲜)
(1)  组织接入预冷的EP管中,加入Trizol试剂1ml/10cm2(量一定要加足,否则易污染),混匀,吹吸几次,以破裂细胞,置室温5min,以使核蛋白复合物*分离。
(2)  加氯仿0.2ml(每1ml Trizol试剂加入氯仿0.2ml),盖好,剧烈震荡15s,置室温2-3分钟。
(3)  4离心,10000g×15min,离心后,混合物将分离为底层为浅红的、中层为酚-氯仿相、上层为无色的水相。RNA包含在水相中,水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60%
(4)  仔细吸取上层水相,移至另一EP管中。
(5)  加0.5ml异丙醇,以沉淀RNA(每1ml Trizol试剂加入0.5ml异丙醇),置室温10min
(6)  4离心,10000g×10min。RNA沉淀为一层如凝胶样透明的小块附在管底和管壁。
(7)   弃上清液,加入预冷的75%乙醇1ml(每1ml Trizol试剂加入75%乙醇至少1ml),震荡,充分洗涤沉淀,4离心,5500g×5min。弃上清液,空气干燥(或真空干燥)后,沉淀重悬于无 Rnase dH2O中,吹吸几次,55℃-60作用10分钟以溶解RNA,-70保存备用。
(8)  抽提出的细胞总RNA干燥后加水50ul,取10ul加无Rnase水990ul,稀释100倍成1ml。于0.5cm厚的石英比色杯中,以无Rnase水为对照,在721型紫外分光光度计下检测,结果应为:A260/280 ratio<1.6
(9)  分离组织10mg(纯组织)加800ul Trizol试剂。
(10)  扩增产物的鉴定:。
DEPC处理方法如下
1. DEPC处理
1)DEPC水:100ml超纯水加入0.2ml DEPC,充分混匀,高压灭菌。
2)Tip头(枪头)、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材(包括1ml、200μl、20μl Tip头;EP管和PCR反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超纯水加入1ml DEPC)37浸泡过夜,高压灭菌。
2. 提取RNA,用DEPC水溶解
3. RT
我是用PCR仪来控制温度和时间的,所以RT是在PCR反应管中作的。
4. 操作过程中要戴一次性手套,并经常换手套。
把要直接接触样品的东西都用DEPC水处理一下,枪头盒插好枪头后,加入1-2ml的0.1%DEPC水,在灭菌就行了;现在有进口的RNASE FREE的枪头买,直接用不用处理的
如何消除污染
机器运行完后,取出PCR产物时不能随便丢弃,应该用塑料手套或其他打结包好后丢入垃圾桶。
(1)       试剂:mixer尽量分装,不要原瓶多次取用。
2)加样:原则是DNAzui后加,其他试剂按照体积大小从大往小的加。如果是同种引物和探针有多管的话只是DNA不同,那么采取的方法是算出总体积后加在一个管子里面,混合均匀之后再分装到各个管子里去,这样可以有效地避免误差及污染。
另外,普通实验室容易污染,且污染程度很高,与跑电泳还有质粒制备提取都在同一个房间里有比较大的关系,zui容易造成高浓度污染的就是产物的开盖和质粒的稀释。
目 前,国内外各个公司提供的诊断试剂盒大多采用了UNG来防污染。Uracil-DNA N-glycosylase(UNG)尿嘧啶DNA糖基酶,来源于大肠杆菌重组克隆表达。
RNA定量
RNA也至少要用电泳,一方面定量,另一方面可以看看完整性。至于用分光光度计比较 不同标本之间就更不准了。
RNA的贮藏,zui主要的是温度,-20不够,-80,液氮zui保险
mRNA是不能代替蛋白水平的分析的,因为还有翻译效率和RNA降解速度 的影响
RT-PCR有两种做法
条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行
一定要做内参的,每一次,我想。不作内参的结果是不可信的
电泳可以不一起跑,没有关系,计算的是相对表达程度,半定量和定量RT-PCR做的都是基因相对表达 量,不是表达量
mRNA的分离与纯化中
步骤(4)中将RNA溶液置65℃中温育然后冷却至室温再上样的目的有两个,一个是破坏RNA的二级结构,尤其是mRNA Poly(A+)尾处的二级结构,使Poly(A+)尾充分暴露,从而提高Poly(A+)RNA的回收率;另一个目的是能解离mRNA与rRNA的结 合,否则会导致rRNA的污染。所以此步骤不能省略。
下面,我们介绍一个可以确认RNA溶液中有没有残留的RNA酶的方法。
3)保温试验
方法很简单的,按照样品浓度,从RNA溶液中吸取两份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的离心管中,并且用pH7.0的Tris缓冲液补充到10 ul的总体积,然后密闭管盖。把其中一份放入70
℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。
时间到了之后,取出两份样本进行电泳。电泳完成后,比较两者的电泳条带。如果两者的条带一致或者无明显差别(当然,它们的条带也要符合方法2中的条件), 则说明RNA溶液中没有残留的RNA酶污染,RNA的质量很好。相反的,如果70
℃保温的样本有明显的降解,则说明RNA溶液中有RNA酶污染。
PCR污染与对策
)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中zui主要zui常见的污染问题,所以,扩增区的仪器什么如枪头等要注意。
还有一种容易忽视,zui可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
1标本处理区,包括扩增摸板的制备;
2. PCR扩增区,包括反应液的配制和PCR扩增;
3. 产物分析区,凝胶电泳分析,产物拍照及重组克隆的制备。
各工作区要有一定的隔离,操作器材,要有一定的方向性。如:标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。
切记:产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的度
反应液污染
可采用下列方法之一处理:
1. DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30 min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列;
(三)尿嘧啶糖苷酶(UNG)法
由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好,而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右,因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。
1、提取mRNA时所用的EP管、玻璃等器皿全部都要用0.1%DEPC水浸泡。然后烘干,高压灭菌,再烘干。
2
、用DEPC水洗过后当然不能用双蒸水洗了。那你用DEPC处理还有什么意义呢?还要用双蒸水洗吗?
3
、玻璃器皿干烤:180度,8小时或更长时间;小器皿也可以用少许氯仿处理一下。另外,铁制品、研砵等也可倒上酒精直接烧。

 

Northern Blotting实验

021-50837765
有什么是定量PCR不能告诉你,而Northern Blot能告诉你的?-转录产物的长度和产物是否是单纯。
Northern Blotting一直以来研究基因表达的常用方法,用来检查转录产物是否单纯。Ambion提供的Northern Blotting试剂消除了Blotting试验中大多数常见的烦恼:低转膜效率,低信号值,高背景等,这些都已成为过去的记忆。
归功于标记技术的进展,现在放射标记法 已经不再是Northern实验的*选择。请参考选用invitrogen的非放射标记试剂盒产品,以及传统方法标记产品。
技巧 提示
标记探针合成实验在探针产物的率和放射标记率之间平衡:越多放射标记核苷酸比例,合成产物的率就会越低。如果你需要帮助估计合成探针的特异性活性,Ambiion可以帮助你:
用于RNA探针
http://www.ambion.com/techlib/tips/specific_activity_calculator.html
用于DNA探针
http://www.ambion.com/techlib/tips/DNA_specific_activity_calculator.html
4小时内完成核酸转膜
NorthernMax Kit
NorthernMax Kit包括电泳缓冲液,洗涤缓冲液,转膜缓冲液,ULTRAhyb Ultrasensitive杂交缓冲液,即可用DNA探针有可用于RNA探针对照模板,对照RNA,RNaseZap和其他组分。
另有含乙二醛的的试剂盒版本,以用于不想使用甲醛的客户。
AM1940 NorthernMax kit               1000CM2
其他Northern需要的组分
探针合成、分子标记和转印膜
 
 
 
转印膜
 
 
 
AM10100
BrightStar-Plus Positively Charged Nylon Membrane  
5片膜
放射性标记探针合成试剂
 
 
AM1312
MAXlscript T7 Kit+ for labeling RNA probes
30反应
AM1455
DECAprimeTMII Kit for labeling DNA probes
30反应
AM10070
NucAway Spin Columns removes unincorporated nucleotides
30反应
非放射法标记探针合成试剂盒
 
 
AM1480
BrightStar Bsoralen-Biotion Nonisotopic Labeling Kit for non-isotopic labeling with longwave UV
20反应
AM12750
Protable UV Light for use with AM1480
1套
AM1930
BrightStar BioDetect Kit for nin-isotopic detection
1000cm2 of膜面积

Xpressbio 实验动物疫病监测

 

Xpressbio(EBI–Express Biotech International)公司致力于分子生物学,细胞生物学以及免疫学产品的市场研究,特色产品动物诊断检测(Lab Animal Monitoring)试剂盒非常齐全,如MHV、TMEV、PVM、仙台病毒及MAd等。 XpressBio生产的实验动物疫病监测产品丰富全面,可以针对多种实验动物,进行多种病原体微生物的检测诊断。XpressBio提供ELISA与PCR两种类型产品,每一类型产品均提供合适的对照控制品,以及详尽、实用的说明书,因此实验结果准确,可操作性强。

 

XpressBio——实验动物疫病监测

美国XpressBio公司(即EBI – Express Biotech International)致力于分子生物学、细胞生物学以及免疫学产品的研究与开发。其产品种类多、质量优、服务好;尤其是其生产的动物诊断监测产品非常齐全。

 

  XpressBio生产的实验动物疫病监测产品丰富全面,可以针对多种实验动物,进行多种病原体微生物的检测诊断。XpressBio提供ELISA与PCR两种类型产品,每一类型产品均提供合适的对照控制品,以及详尽、实用的说明书,因此实验结果准确,可操作性强。

■ 实验动物种类

小鼠Mouse

豚鼠Guinea pig

兔Rabbit

猫Feline

大鼠Rat

仓鼠Hamster

犬Canine

猴Simian

■ 病原体微生物种类

病毒

支原体

衣原体

细菌

寄生虫

■ 产品类型

ELISA产品

PCR产品

ELISA Kit

Antigen

PCR Kit

ELISA Kit Component

ELISA Kit(Vaccine Research)

PCR Positive Control

Simian ELISA Reagent

ELISA Kit(Mouse Mite Infestation)

 

  XpressBio提供的实验动物疫病监测ELISA产品,通过检测实验动物血清中是否存在相应抗体,从而确认实验动物是否患病。ELISA 试剂盒包括以下组分:ELISA 板条,样品稀释液,过氧化物酶偶联物,ABTS 过氧化物酶底物,终止液,浓缩洗液 (20×),阳性对照血清,阴性对照血清。ELISA 板条为预包被微孔板;除浓缩洗液(20×) 以外,试剂盒其它组分都是即用型;阳性对照血清与阴性对照保证了实验结果的准确性。

  根据用户需求,XpressBio也为用户提供ELISA组分和抗原,客户可以灵活选择。

  另外,针对特定的研究对象和研究领域,XpressBio特别研发生产了非人灵长类相关系列产品Simian ELISA Reagent;用于疫苗研究的系列产品ELISA Kit(Vaccine Research);以及用于螨类感染检测的系列产品ELISA Kit(Mouse Mite Infestation)。

  对于PCR产品,XpressBio主要提供了两个系列:PCR 试剂盒和PCR 阳性对照,其采用琼脂糖PCR技术,灵敏度高,特异性强,使用方便。PCR 试剂盒是专门针对肝螺杆菌开发的产品,包括以下组分:10× PCR 缓冲液,50 mM MgSO4,10 mM dNTPs,10 μM Forward PCR Primer,10 μM Reverse PCR Primer,蒸馏水,螺杆菌阳性对照DNA。而PCR阳性对照为广大用户提供大量准确适用的阳性对照品,是用户进行PCR检测时所必须的材料。

 

Mouse

Rat

Guinea pig

Hamster

Rabbit

Canine

Feline

Simian

Adenovirus腺病毒

 

 

 

 

 

CMV巨细胞病毒

 

 

 

 

 

Ectromelia缺肢畸形病毒

 

 

 

 

 

 

 

EDIM乳鼠流行性腹泻

 

 

 

 

 

 

 

Hanta汉坦病毒

 

 

 

 

 

 

Hepatitis肝炎病毒

 

 

 

 

 

 

K Virus K病毒

 

 

 

 

 

 

 

KRV大鼠病毒

 

 

 

 

 

 

 

LCMV

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒

 

 

 

 

Minute Virus微小病毒

 

 

 

 

 

 

Parainfluenza Virus

副流感病毒

 

 

 

 

 

Parvovirus细小病毒

 

 

 

 

 

 

Pneumonia Virus肺炎病毒

 

 

 

Polyoma Virus多瘤病毒

 

 

 

 

 

 

 

Pox痘病毒

 

 

 

 

 

 

 

RCV/SDAV

大鼠涎泪腺炎病毒

 

 

 

 

 

 

 

Reovirus呼肠弧病毒

 

 

 

 

Rotavirus轮状病毒

 

 

 

 

 

 

 

Sendai Virus仙台病毒

 

 

 

SV5猴副流感病毒

 

 

 

 

 

TMEV脑脊髓炎病毒

 

 

 

 

 

 

Toolans H-1

 

 

 

 

 

 

 

Mycoplasma Pulmonis

肺支原体

 

 

 

 

Mycoplasma Arthritidis

关节炎支原体

 

 

 

 

 

 

Chlamydia衣原体

 

 

 

 

 

 

Bordetella hinzii博代氏杆菌

 

 

 

 

 

 

 

CARB纤毛相关呼吸道杆菌

 

 

 

 

Helicobacter螺旋菌

 

 

 

 

 

 

Pasteurella巴斯德菌

 

 

 

 

 

 

Clostridium piliformis

梭状芽孢杆菌

(Tyzzer’s Disease)

 

 

 

E. Cun孢子虫

 

 

 

Pneumocystis Carinii

卡氏肺孢子虫

 

 

 

 

 

 

Toxoplasma弓形虫

 

 

 

 

 

 

Herpes Virus疱疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

Herpes-1疱疹-1

 

 

 

 

 

 

 

Herpes-2疱疹-2

 

 

 

 

 

 

 

Distemper犬瘟热病毒

 

 

 

 

 

 

 

Coronavirus冠状病毒

 

 

 

 

 

 

Calicivirus杆状病毒

 

 

 

 

 

 

 

Rhinotracheitis

鼻气管炎病毒

 

 

 

 

 

 

 

B-VirusB-病毒

 

 

 

 

 

 

 

Varicella Zoster

水痘带状疱疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

STLV淋巴白血病病毒

 

 

 

 

 

 

 

Foamy Virus泡沫病毒

 

 

 

 

 

 

 

SIV猴免疫缺陷病毒

 

 

 

 

 

 

 

SRV猴逆转录病毒

 

 

 

 

 

 

 

Measles麻疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

Rubella风疹病毒

 

 

 

 

 

 

 

Mumps流行性腮腺炎

 

 

 

 

 

 

 

Rabies狂犬病毒

 

 

 

 

 

 

 

Tuberculosis肺结核

 

 

 

 

 

 

 

Malaria疟疾

 

 

 

 

 

 

 

Diptheria白喉

 

 

 

 

 

 

Tetanus破伤风

 

 

 

 

 

 

Pertussis百日咳

 

 

 

 

 

 

Haemophilus influenzae

流感嗜血杆菌B

 

 

 

 

 

 

HBsAg

 

 

 

 

 

 

Anthrax炭疽

 

 

 

 

 

 

IgE

 (Mite Infestation螨虫感染)

 

 

 

 

 

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多个品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

4:富有竞争力的价格优势,绝大部分价格有优势。

5:多年积累良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等药企。

6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发,欢迎合作。

 

PEI与23966-1实验结果反馈

 

BioHuB PEI与23966-1实验结果反馈表

单位

上海**制药技术有限公司

实验组名称

分子部门

实验室研究方向

 

试用人

 

 

转染细胞种类

293T

现用转染试剂品牌

polyethylenimine,linear

 

转染选用质粒

 

NC

 

现用转染试剂价格

 

 

转染后观察时间

24h、48h

现用转染试剂规格及

平均可用时长

mw25,000

 

相同转染条件下, BioHuB PEI与现用转染试剂效果对比

 

BioHuB PEI转染效率:

现用polysciences转染试剂转染效率:

试用结果图片展示:单转质粒

单转质粒

包装

包装

具体试用效果及建议:

单转质粒BioHuB PEI转染效率比现用23966-1的好

包装BioHuB PEI转染效率和现用差不多,相比细胞状态稍微差点,毒性相对25000大点