日本三重大学日前发表公报称，发现一种称为“MXD3”的基因与肥胖有关。研究小组认为，如果开发出遏制这种基因作用的药物，就有望缓解代谢综合征。
研究小组利用小型热带鱼——斑马鱼进行了实验。研究人员给斑马鱼喂食过量的食物，约8周后取出内脏脂肪组织进行研究，结果发现有91个基因的功能变得活跃起来，其中有9个基因，包括“MXD3”基因迄今尚未被报告过与肥胖有关。
研究小组通过基因技术，分别培育出能遏制这9个基因的9种斑马鱼，然后与未进行基因改造的斑马鱼进行比较。结果发现，同样投放过量食物，能遏制“MXD3”基因功能的斑马鱼在9周后的体重比后者要轻约五分之一，同时内脏脂肪的增加也不到后者一半，脂肪细胞体积也较小。
之 前有研究显示，斑马鱼在许多方面与人相似。它是一种脊椎动物（vertebrates），其体内超过80％的基因与人类相似。三重大学研究生院医学系教授 田中利男指出：“开发出相关药物还需要5至10年，但可以先开发出通过调查血液中的‘MXD3’基因来测量内脏脂肪含量的技术。”
RCA(E1A)基因(腺病毒E1A基因)拷贝数检测试剂盒 RCA(E1A) Copynumber Detection Kit
RCA (E1A)基因拷贝数检测试剂盒可用于定量分析检测各种使用腺病毒载体相关的细胞治疗产品和基因治疗产品中可能发生的复制型腺病毒(Replication-competent Adenoviruses, RCA)的潜在风险；还可用于定量分析检测生物制品中宿主细胞，如HEK293和HEK293T细胞来源的风险基因E1A残留DNA的含量。
本试剂盒针对腺病毒上E1A基因序列设计特异性引物，采用探针法荧光定量PCR原理，快速特异的检测复制型腺病毒RCA风险情况以及宿主细胞来源的E1A残留DNA，其定量限可低至4.1 copies/μL水平，且配套有RCA (E1A) DNA Control（DNA定量参考品）。该试剂可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
41321ES50 |
41321ES60 |
|
41321-A |
RCA (E1A) qPCR Mix |
0.75 mL |
1.5 mL |
|
41321-B |
RCA (E1A)Primer&Probe Mix |
200 μL |
400 μL |
|
41321-C |
DNA Dilution Buffer |
1.8 mL×2管 |
1.8 mL×4管 |
|
41321-D |
RCA (E1A) DNA Control (1.64×107 copies/μL) |
25 μL |
50 μL |
|
41321-E |
IC* |
50 μL |
100 μL |
*IC：Internal control，内部对照
储存条件
1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。其中，41321-A和41321-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共5个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 使用本试剂前请仔细阅读说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
4. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5；
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用说明
1. RCA (E1A) DNA Control定量参考品的稀释和标准曲线的制备
用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer（DNA稀释液）将RCA (E1A) DNA Control定量参考品进行梯度稀释*，稀释浓度依次为1.64×106 copies/μL、1.64×105 copies/μL、1.64×104 copies/μL、1.64×103 copies/μL、1.64×102 copies/μL、1.64×101 copies/μL。具体操作如下：
1）将试剂盒中的RCA (E1A) DNA Control定量参考品和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2）取6支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5。
3）在标记为Std0的1.5 mL离心管中加入90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL RCA DNA Control定量参考品，Std0即稀释为1.64×106 copies/μL的浓度，振荡混匀后低速离心10 sec，该浓度可分装置于-25~-15℃短期保存（不超过3个月）**，使用时避免反复冻融。
4）在Std1、Std2、Std3、Std4、Std5离心管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer***，再进行梯度稀释****，具体稀释方法如下：
|
稀释管 |
稀释比例 |
终浓度 |
|
Std1 |
10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×105 copies/μL |
|
Std2 |
10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×104 copies/μL |
|
Std3 |
10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×103 copies/μL |
|
Std4 |
10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×102 copies/μL |
|
Std5 |
10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×101 copies/μL |
表1 标准品梯度稀释
*每个浓度做3个复孔，该试剂可测试1.64×105 copies/μL~1.64×101 copies/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
**为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-25~-15℃。
***已融化未使用的DNA稀释液可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-25~-15℃。
****为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约15 sec。
2.待测样本TS的制备
根据实验设置待测样本TS，具体操作如下：
取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为TS，进行样本前处理，制备待测样本TS纯化液。
3. 样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的RCA (E1A) DNA标准品浓度，以制备加1.64×104copies RCA (E1A) DNA量的ERC为例*，具体操作如下：
1）取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std3，混匀，标记为ERC。
2）加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
*一般建议样本加标量设置在样本中目的基因RCA (E1A)实际含量的0.8~1.5倍，如果样品中目的基因含量低于定量限，加标量应设置到定量限之内，以保证检测结果的可靠性。
4. 阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1）取100 μL样本基质溶液（或DNA稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2）阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
5. 无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1）无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
2）每管或孔中NTC样本为20 μL Mix混合液即15 μL RCA (E1A) qPCR Mix + 4 μL RCA Primer&Probe Mix + 1 μL IC，再加10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
6. 反应体系
|
组分 |
体积(μL) |
|
RCA (E1A) qPCR Mix* |
15 |
|
RCA (E1A) Primer&Probe Mix |
4 |
|
IC |
1 |
|
DNA Template** |
10 |
|
总体积*** |
30 |
表2 标准品反应体系
*根据反应孔数计算本次所需Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
**反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如10 μL的1.64×103 copies/μL标准品后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
***加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下表为参考板位：
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
NTC |
|
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
|
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
|
|
|
|
B |
NTC |
|
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
|
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
|
|
|
|
C |
NTC |
|
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
|
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
|
|
|
|
D |
|
|
|
|
|
|
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
|
|
|
|
E |
NCS |
|
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
|
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
|
|
|
|
F |
NCS |
|
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
G |
NCS |
|
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
表3 上机参考板位
该示例是对RCA (E1A)基因拷贝数的qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：5个浓度梯度的RCA (E1A) DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个加样回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
7. 扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）
1）创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2）创建2个检测探针，Target 1命名为“RCA (E1A)-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“None”；Target 2命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“None”。参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3）在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值为“164000”、“16400”、“1640”、“164”、“16.4”（含义为每孔DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“Sample Name”一栏命名为“164000copies/μL”、“16400copies/μL”、“1640copies/μL”、“164copies/μL”、“16.4copies/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔、样本加标回收ERC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”、“ERC”，参比荧光勾选“ROX”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。
4）扩增程序设置：设置两步法扩增程序，反应体积30 μL。
|
循环步骤 |
温度（℃） |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸（收集荧光） |
60℃ |
30 sec |
表4 扩增程序
8. qPCR结果分析
1）在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。
2）在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。
3）在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收ERC的检测值，单位为copies/μL。
4）结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。
5）根据待测样本TS和样本加标回收ERC的检测结果计算加标回收率，加标回收率要求在50%～150%之间。加标回收率计算公式：回收率(%) = {样本加标测定值(eg.copies/µL)-样本测定值(eg.copies/µL)}×洗脱体积(eg.µL) / DNA加入量理论值(eg.copies)×100%。
6）阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。
7）无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥35。
8）待测样本的Ct-IC值应该与NTC的Ct-IC值一致或±1，如果待测样本的Ct-IC值与NTC的Ct-IC值相比明显增大，则表明样本可能存在明显抑制。如果同时测试加标样本，则优先考虑样本加标回收率结果，IC结果作为参考。
Ver.CN20230731
RCA (E1A)基因拷贝数检测试剂盒可用于定量分析检测各种使用腺病毒载体相关的细胞治疗产品和基因治疗产品中可能发生的复制型腺病毒(Replication-competent Adenoviruses, RCA)的潜在风险；还可用于定量分析检测生物制品中宿主细胞，如HEK293和HEK293T细胞来源的风险基因E1A残留DNA的含量。
本试剂盒针对腺病毒上E1A基因序列设计特异性引物，采用探针法荧光定量PCR原理，快速特异的检测复制型腺病毒RCA风险情况以及宿主细胞来源的E1A残留DNA，其定量限可低至4.1 copies/μL水平，且配套有RCA (E1A) DNA Control（DNA定量参考品）。该试剂可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
41321ES50 |
41321ES60 |
|
41321-A |
RCA (E1A) qPCR Mix |
0.75 mL |
1.5 mL |
|
41321-B |
RCA (E1A)Primer&Probe Mix |
200 μL |
400 μL |
|
41321-C |
DNA Dilution Buffer |
1.8 mL×2管 |
1.8 mL×4管 |
|
41321-D |
RCA (E1A) DNA Control (1.64×107 copies/μL) |
25 μL |
50 μL |
|
41321-E |
IC* |
50 μL |
100 μL |
*IC：Internal control，内部对照
储存条件
1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。其中，41321-A和41321-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共5个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 使用本试剂前请仔细阅读说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
4. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5；
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用说明
1. RCA (E1A) DNA Control定量参考品的稀释和标准曲线的制备
用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer（DNA稀释液）将RCA (E1A) DNA Control定量参考品进行梯度稀释*，稀释浓度依次为1.64×106 copies/μL、1.64×105 copies/μL、1.64×104 copies/μL、1.64×103 copies/μL、1.64×102 copies/μL、1.64×101 copies/μL。具体操作如下：
1）将试剂盒中的RCA (E1A) DNA Control定量参考品和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2）取6支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5。
3）在标记为Std0的1.5 mL离心管中加入90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL RCA DNA Control定量参考品，Std0即稀释为1.64×106 copies/μL的浓度，振荡混匀后低速离心10 sec，该浓度可分装置于-25~-15℃短期保存（不超过3个月）**，使用时避免反复冻融。
4）在Std1、Std2、Std3、Std4、Std5离心管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer***，再进行梯度稀释****，具体稀释方法如下：
|
稀释管 |
稀释比例 |
终浓度 |
|
Std1 |
10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×105 copies/μL |
|
Std2 |
10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×104 copies/μL |
|
Std3 |
10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×103 copies/μL |
|
Std4 |
10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×102 copies/μL |
|
Std5 |
10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×101 copies/μL |
表1 标准品梯度稀释
*每个浓度做3个复孔，该试剂可测试1.64×105 copies/μL~1.64×101 copies/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
**为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-25~-15℃。
***已融化未使用的DNA稀释液可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-25~-15℃。
****为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约15 sec。
2.待测样本TS的制备
根据实验设置待测样本TS，具体操作如下：
取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为TS，进行样本前处理，制备待测样本TS纯化液。
3. 样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的RCA (E1A) DNA标准品浓度，以制备加1.64×104copies RCA (E1A) DNA量的ERC为例*，具体操作如下：
1）取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std3，混匀，标记为ERC。
2）加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
*一般建议样本加标量设置在样本中目的基因RCA (E1A)实际含量的0.8~1.5倍，如果样品中目的基因含量低于定量限，加标量应设置到定量限之内，以保证检测结果的可靠性。
4. 阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1）取100 μL样本基质溶液（或DNA稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2）阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
5. 无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1）无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
2）每管或孔中NTC样本为20 μL Mix混合液即15 μL RCA (E1A) qPCR Mix + 4 μL RCA Primer&Probe Mix + 1 μL IC，再加10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
6. 反应体系
|
组分 |
体积(μL) |
|
RCA (E1A) qPCR Mix* |
15 |
|
RCA (E1A) Primer&Probe Mix |
4 |
|
IC |
1 |
|
DNA Template** |
10 |
|
总体积*** |
30 |
表2 标准品反应体系
*根据反应孔数计算本次所需Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
**反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如10 μL的1.64×103 copies/μL标准品后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
***加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下表为参考板位：
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
NTC |
|
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
|
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
|
|
|
|
B |
NTC |
|
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
|
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
|
|
|
|
C |
NTC |
|
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
|
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
|
|
|
|
D |
|
|
|
|
|
|
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
|
|
|
|
E |
NCS |
|
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
|
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
|
|
|
|
F |
NCS |
|
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
G |
NCS |
|
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
表3 上机参考板位
该示例是对RCA (E1A)基因拷贝数的qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：5个浓度梯度的RCA (E1A) DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个加样回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
7. 扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）
1）创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2）创建2个检测探针，Target 1命名为“RCA (E1A)-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“None”；Target 2命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“None”。参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3）在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值为“164000”、“16400”、“1640”、“164”、“16.4”（含义为每孔DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“Sample Name”一栏命名为“164000copies/μL”、“16400copies/μL”、“1640copies/μL”、“164copies/μL”、“16.4copies/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔、样本加标回收ERC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”、“ERC”，参比荧光勾选“ROX”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。
4）扩增程序设置：设置两步法扩增程序，反应体积30 μL。
|
循环步骤 |
温度（℃） |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸（收集荧光） |
60℃ |
30 sec |
表4 扩增程序
8. qPCR结果分析
1）在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。
2）在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。
3）在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收ERC的检测值，单位为copies/μL。
4）结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。
5）根据待测样本TS和样本加标回收ERC的检测结果计算加标回收率，加标回收率要求在50%～150%之间。加标回收率计算公式：回收率(%) = {样本加标测定值(eg.copies/µL)-样本测定值(eg.copies/µL)}×洗脱体积(eg.µL) / DNA加入量理论值(eg.copies)×100%。
6）阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。
7）无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥35。
8）待测样本的Ct-IC值应该与NTC的Ct-IC值一致或±1，如果待测样本的Ct-IC值与NTC的Ct-IC值相比明显增大，则表明样本可能存在明显抑制。如果同时测试加标样本，则优先考虑样本加标回收率结果，IC结果作为参考。
Ver.CN20230731
暂无内容
暂无内容
使用基于 Gaussia 荧光素酶的 psiScreen 系统可以轻松筛选 siRNA。实时高通量筛选 siRNA 的理想选择。想象一下没有蛋白质印迹或实时 PCR！
| 基因沉默变得简单快捷：使用 targefect siRNA 试剂盒高效转染 siRNA。 |
Catalog # Capacity Price
#S00125 µg psiScreen plus GAR-1 reagent $420
#C001, (100 assays)pCMV-Fluc (25 µg)$200
ORIGENE——以基因研究为中心的生命科学工具试剂公司
ORIGENE
链接：https://www.origene.com.cn/
OriGene成立于1996年，立足于收集人全长cDNA克隆库，将其构建在统一的表达载体内，并使其商品化作为研究工具提供给q世界的科学家。随着人类基因组全测序的完成及以基因组研究为基础的研究工具的开发，使得人们可以通过系统生物学的研究，进行药物相关靶向的鉴定。OriGene的目标是提供大量全面的基因组、蛋白质组、抗体等研究工具和技术平台，使得科学家们可以研究整个生物学通路，从而对疾病的机制有更深入的了解，如癌症、干细胞研究等。
OriGene使用高通量的基因组技术为制药、生物技术和基础科研工作者提供性能z越的产品。我们的旗舰产品为cDNA克隆库：覆盖30,000多个人全长基因的TrueCloneTM cDNA克隆和25,000多个TrueORFTM cDNA克隆。利用TrueORFTM cDNA克隆，我们开发了大量的全长人重组蛋白产品（哺乳动物细胞表达），可以进行蛋白功能的研究。2010年，OriGene启动了TrueMAB项目，开发以全长人重组蛋白为抗原的鼠单克隆抗体，目标是研制出针对每一条人蛋白的蛋白检测试剂。
此外，OriGene还提供不同的基因表达产品，如TissueScan肿瘤组织qPCR阵列和组织生物信息库等，用于生物标志物的发现和验证。
ORIGENE产品线：
1、基因产品：
-提供克隆服务，包括基因克隆、表达载体构建等。
-基因表达产品，如表达谱芯片和基因表达分析服务。
2、蛋白质产品：
-提供重组蛋白和抗体的开发与生产服务。
-蛋白质分析服务，包括蛋白质纯化和蛋白质功能分析。
3、抗体产品：
-提供定制抗体服务，包括单克隆抗体和多克隆抗体的开发。
-现货抗体，覆盖多种研究领域和靶标。
4、生物服务：
-提供分子生物学服务，如基因合成、引物合成、RNA干扰等。
-细胞生物学服务，如细胞转染、细胞功能分析等。
5、基因编辑：
-OriGene提供的试剂支持广泛的CRISPR / Cas9基因编辑应用，单击下图与基因编辑相关的产品。
6、研究工具：
-提供研究工具，如报告基因、标记基因、研究试剂盒等。
7、定制服务：
-根据客户需求提供定制化服务，如定制基因合成、定制抗体开发等。
ORIGENE优势：
1.技术专长：在基因克隆、蛋白质表达和抗体开发方面具有专业技术。
2.产品多样性：提供广泛的基因、蛋白质和抗体产品，满足不同研究需求。
3.定制服务：能够根据客户需求提供个性化的定制服务。
4.研发能力：持续进行研发，以推动新技术和产品的发展。
5.客户支持：提供专业的技术支持和客户服务，帮助客户解决科研难题。
ORIGENE服务对象：
1.学术研究：大学和研究机构的研究人员。
2.生物技术公司：从事新药开发、基因编辑技术研究的公司。
3.制药公司：在药物发现和开发过程中需要基因和蛋白质分析的公司。
4.临床诊断：需要特定抗体或蛋白质产品进行疾病诊断和研究的医疗机构。
5.农业研究：进行作物基因改良和遗传研究的农业科研机构。
ORIGENE热卖产品
| 货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
| FD200003 | Male Human Forensic Control DNA 9948 in TE Buffer (100 ul, 1 ng/ul) | 100ul | ORIGENE |
| EA100676 | Human PCSK9 ELISA Kit | 1x96wells | ORIGENE |
| TP503917 | Smn1 (NM_011420) Mouse Recombinant Protein | 20ug | ORIGENE |
| TA334346 | PATL2 Rabbit Polyclonal Antibody | 50ul | ORIGENE |
| TP309429 | Recombinant protein of human signal transducer and activator of transcription 5B (STAT5B) | 20ug | ORIGENE |
| RG212070 | Lipoprotein a (LPA) (NM_005577) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| TA350706 | MASP2 Rabbit Polyclonal Antibody | 100ul | ORIGENE |
| TR30037 | Lentiviral Packaging Kits | 10 reactions | ORIGENE |
| CW306504 | CCR2 (Customized) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| RC209990 | RPL13A (NM_012423) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| RC200536 | HEXIM1 (NM_006460) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| PS100001 | pCMV6-Entry, mammalian vector with C-terminal Myc- DDK Tag, 10ug | 10ug | ORIGENE |
| TA592047 | Rabbit monoclonal HSD17B13 Antibody,Clone OTIR5C10 | 100ul | ORIGENE |
| RC213071L4 | Lenti ORF clone of Human CD274 molecule (CD274), mGFP tagged | 10ug | ORIGENE |
| TP311417M | Recombinant protein of human optic atrophy 1 (autosomal dominant) (OPA1), nuclear gene encoding mitochondrial protein, transcript variant 3 | 100ug | ORIGENE |
| C09-100 | DAB+ (2 components) Bulk Kit | 100ml | ORIGENE |
| TA503316-100ul | LGR5 mouse monoclonal antibody, clone OTI2A2 | 100ul | ORIGENE |
| TP305920 | Recombinant protein of human neurofilament, light polypeptide (NEFL) | 20ug | ORIGENE |
| TP321367 | SMN1 (NM_000344) Human Recombinant Protein | 20ug | ORIGENE |
| TR314610 | ATG5 – Human, 4 unique 29mer shRNA constructs in retroviral untagged vector | 5ug/vial | ORIGENE |
| TA806826-100ul | ROR1 mouse monoclonal antibody, clone OTI3D11 (formerly 3D11) | 100ul | ORIGENE |
| TA801287-100ul | ALK Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: OTI1A4] | 100ul | ORIGENE |
| TP315178 | PSD95 (DLG4) (NM_001365) Human Recombinant Protein | 20ug | ORIGENE |
| TP320060 | Recombinant protein of human transferrin receptor 2 (TFR2) | 20ug | ORIGENE |
| TA813980 | CD47 mouse monoclonal antibody, clone OTI5C9 | 100ul | ORIGENE |
| GE100023 | pCas-Guide-AAVS1 | 10ug | ORIGENE |
| RG217384 | EGFR (NM_005228) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| RG217003 | MET (NM_000245) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| RC211856 | TACI (TNFRSF13B) (NM_012452) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| TA504242S | ALG2 mouse monoclonal antibody, clone OTI3C2 (formerly 3C2) | 30ul | ORIGENE |
| RC208851 | BCMA (TNFRSF17) (NM_001192) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| GE100024 | pAAVS1-Puro-DNR | 10ug | ORIGENE |
| CF505437 | GADD45G Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: OTI2F12] | 100ug | ORIGENE |
| TP518768 | Purified recombinant protein of Mouse ATPase, Cu++ transporting, beta polypeptide (Atp7b), with C-terminal MYC/DDK tag, expressed in HEK293T cells, 20ug | 20ug | ORIGENE |
| RC210910 | PKC theta (PRKCQ) (NM_006257) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| RC217448 | MAP4K3 (NM_003618) Human Tagged ORF Clone | 10ug | ORIGENE |
| TP305446 | CYP46 (CYP46A1) (NM_006668) Human Recombinant Protein | 20ug | ORIGENE |
| EA200008 | Human HSD17B13 ELISA Kit for the detection of Human HSD17B13 in cell lysates, serum and plasma. | 1x96wells | ORIGENE |
| BM5011 | Adeno-Associated Virus 2 / AAV2 (Replicase Rep 78, 52) Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: 76.3] | 100ug | ORIGENE |
| AP52146PU-N | CTLA4 (N-term) Rabbit Polyclonal Antibody | 200ul/vial | ORIGENE |
| RC224386 | CWH43 (Myc-DDK-tagged)-Human cell wall biogenesis 43 C-terminal homolog (S. cerevisiae) (CWH43) | 10ug | ORIGENE |
| TP303507 | Seladin 1 (DHCR24) (NM_014762) Human Recombinant Protein | 20ug | ORIGENE |
| AP51010PU-N | Collagen XVII (COL17A1) (Center) Rabbit Polyclonal Antibody | 400ul | ORIGENE |
| RC221477L3 | Lenti ORF clone of Human interleukin 18 receptor accessory protein (IL18RAP), Myc-DDK-tagged | 10ug | ORIGENE |
| TP310065 | STAT6 (NM_003153) Human Recombinant Protein | 20ug | ORIGENE |
| TA379263 | BNP (NPPB) Rabbit Polyclonal Antibody | 100ul | ORIGENE |
| AM26751PU-N | Claudin 9 (CLDN9) rat monoclonal antibody, clone YD-4E9, Purified | 100ug | ORIGENE |
| RC213986L3 | Lenti ORF clone of Human ubiquitin specific peptidase 7 (herpes virus-associated) (USP7), Myc-DDK-tagged | 10ug | ORIGENE |
| KN419514 | TGFBR1 – KN2.0, Human gene knockout kit via CRISPR, non-homology mediated. | 1kit | ORIGENE |
| RC202624L3 | Lenti ORF clone of Human ubiquitin specific peptidase 5 (isopeptidase T) (USP5), transcript variant 2, Myc-DDK-tagged | 10ug | ORIGENE |
| AP00695PU-N | Epstein Barr Virus / EBV Nuclear Antigen goat polyclonal antibody, Purified | 1ml | ORIGENE |
| TP311135M | Purified recombinant protein of Human hydroxysteroid (17-beta) dehydrogenase 1 (HSD17B1), with C-terminal Myc/DDK tag, expressed in HEK293 cells, 20ug | 100ug | ORIGENE |
| TP311417L-1mg | OPA1 (NM_130832) Human Recombinant | 1mg | ORIGENE |
| TA50011-100 | Clone OTI4C5, Anti-DDK (FLAG) monoclonal antibody | 100ul | ORIGENE |
| TA502915S | CDK2 Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: OTI2A5] | 30ul | ORIGENE |
| TA324916 | Rabbit polyclonal EN1 (Engrailed 1) Antibody (N-term) | 200ul | ORIGENE |
| KN407487 | FCGR1A – KN2.0, Human gene knockout kit via CRISPR, non-homology mediated. | 1kit | ORIGENE |
| AB8181-200 | Goat Polyclonal Anti-tdTomato Antibody | 600ug | ORIGENE |
| TR314609 | ATG7 – Human, 4 unique 29mer shRNA constructs in retroviral untagged vector | 5ug/vial | ORIGENE |
| TR306514 | ATG3 – Human, 4 unique 29mer shRNA constructs in retroviral untagged vector | 5ug/vial | ORIGENE |
| TA338307 | Rabbit Polyclonal Anti-GSPT1 Antibody | 100ul | ORIGENE |
| AM01271PU-N | Dinitrophenol Rat Monoclonal Antibody [Clone ID: LO-DNP-30] | 250ug | ORIGENE |
| TP302872 | Recombinant protein of human matrix metallopeptidase 9 (gelatinase B, 92kDa gelatinase, 92kDa type IV collagenase) (MMP9) | 20ug | ORIGENE |
| TA504752 | SMA (FOLH1) Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: OTI3H5] | 100ul | ORIGENE |
| TP310589 | Recombinant protein of human methionine adenosyltransferase II, beta (MAT2B), transcript variant 1 | 20ug | ORIGENE |
| TP320083 | Recombinant protein of human lysophosphatidylcholine acyltransferase 1 (LPCAT1) | 20ug | ORIGENE |
| TA378837 | CMH1 (MYH7) Rabbit Polyclonal Antibody | 100ul | ORIGENE |
| TR30036 | IDLV Lenti packaging kit, integration deficient- packaging plasmids and transfection reagent | 10reactions | ORIGENE |
| TP303765 | Recombinant protein of human methionine adenosyltransferase I, alpha (MAT1A) | 20ug | ORIGENE |
| TP790181 | Purified recombinant protein of Lachnospiraceae bacterium ND2006 LbCpf1 containing Simian virus 40 (SV40) T antigen nuclear localization sequence (NLS) on the N- and C-terminal of the protein, with N-terminal HIS tag, expressed in E.coli | 500pmol | ORIGENE |
| TP760144 | NR0B2 (NM_021969) Human Recombinant Protein | 50ug | ORIGENE |
| TA503920S | CCK4 (PTK7) Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: OTI2E7] | 30ul | ORIGENE |
| TA379262 | ANP (NPPA) Rabbit Polyclonal Antibody | 100ul | ORIGENE |
| TA383159 | USP30 Rabbit Polyclonal Antibody | 100ul | ORIGENE |
| TA592569 | DDK Rabbit monoclonal antibody, recognizing both N- and C-terminal tags | 100ul | ORIGENE |
| RC213312 | MAPT (Myc-DDK-tagged)-Human microtubule-associated protein tau (MAPT), transcript variant 2 | 10ug | ORIGENE |
| PS100020 | pCMV6-AC Mammalian Expression Vector | 10ug | ORIGENE |
| AM31851PU-N | PF4 Mouse Monoclonal Antibody [Clone ID: KKO] | 200ug | ORIGENE |
| TP319368 | Recombinant protein of human glutamate receptor, ionotropic, N-methyl D-aspartate 1 (GRIN1), transcript variant NR1-1 | 20ug | ORIGENE |
| TA349674S | Orosomucoid 2 (ORM2) Rabbit Polyclonal Antibody | 25ul | ORIGENE |
| PA510X | CD340 / ERBB2 / HER2 human recombinant protein, 0.1 mg | 100ug | ORIGENE |
| TA700027 | CD40L biotinylated mouse monoclonal detection antibody, validated for ELISA and Luminex assays | 50ug | ORIGENE |
| GE100052 | Vector kit for targeted transgene insertion into ROSA26 locus in mice (puro), including GE100050, GE100051 and GE100003 | 1kit | ORIGENE |
| RC218464 | CAMK1 (Myc-DDK-tagged)-Human calcium/calmodulin-dependent protein kinase I (CAMK1) | 10ug | ORIGENE |
| AM33304PU-S | MYOD1 mouse monoclonal antibody, clone 5.8A, Purified | 100ug | ORIGENE |
| AP14809PU-N | PAK5 rabbit polyclonal antibody, Purified | 400ul | ORIGENE |
| AP17161PU-N | C9orf156 (TRMO) (C-term) rabbit polyclonal antibody | 400ul | ORIGENE |
| AR50244PU-S | VTA1 (1-307, His-tag) human recombinant protein, 0.1 mg | 100ug | ORIGENE |
| TP309794M | CRBN (NM_016302) Human Recombinant Protein | 100ug | ORIGENE |
| RC239983 | LPHN2 (myc-DDK-tagged) – Human latrophilin 2 (LPHN2), transcript variant 4 | 10ug | ORIGENE |
| TA804532 | Purified CFH mouse monoclonal antibody, clone OTI5H5 (formerly 5H5) | 100ul | ORIGENE |
| AR50434PU-S | Thymidine kinase 1 (TK1) (1-234, His-tag) human recombinant protein, 0.1 mg | 100ug | ORIGENE |
| TA504590S | TFR2 (Transferrin Receptor 2) mouse monoclonal antibody, clone OTI1D8 (formerly 1D8) | 30ul | ORIGENE |
| TA504590 | TFR2 (Transferrin Receptor 2) mouse monoclonal antibody, clone OTI1D8 (formerly 1D8) | 100ul | ORIGENE |
| SC316876 | LPHN2 (untagged)-Human latrophilin 2 (LPHN2) | 10ug | ORIGENE |
| EA101085 | Rubella IgM ELISA Kit | 96-well strip plate | ORIGENE |
| GE100072 | AAVS1 donor vector with AAVS1 homologous arms, luciferase under EF1a promoter, and Puro selection (10 ug) | 10ug | ORIGENE |
| AR09880PU-N | Ubiquitin-fold modifier 1 (UFM1) (1-83, His-tag) human recombinant protein, 0.1 mg | 100ug | ORIGENE |
| FD200006 | Male Human Forensic Control DNA 9948 in TE Buffer (100 ul, 100 ng/ul) | 100ul | ORIGENE |
| GE100037 | Cas9 expression vector in AAVS1 donor vector, puromycin selection (10 ug) | 10ug | ORIGENE |
trilink基因编辑
基因组编辑已成为治疗发展中令人兴奋的新领域之一。存在多种用于基因组编辑的工具。簇状规则间隔的短回文重复序列（CRISPR）/ Cas9由于其高效和易用性，已成为受欢迎的基因组编辑工具。Cas9 mRNA与指导RNA的共转染导致双链断裂，可以通过非同源末端连接（NHEJ）修复，从而导致使目标基因失活的插入缺失。如果与切割位点具有同源性的供体DNA模板也被共转染，则同源性指导的修复可导致基因校正或插入。
TriLink提供了三种类型的Catalog mRNA，用于CRISPR基因组编辑。对于CRISPR / Cas9基因编辑，这些包括具有未修饰碱基的Cas9 mRNA以及经5-甲氧基尿苷修饰以减少先天免疫应答的Cas9 mRNA。我们还提供经5-甲氧基尿苷修饰的Cas9切口酶。Cas9切口酶具有D10A氨基酸突变，可防止DNA链之一的切割。结果，Cas9切口酶产生单链切口，而不是双链断裂。DNA的切割或编辑通过约100个核苷酸的单个引导链RNA（sgRNA）定向到特定的染色体位置。CRISPR的另一种核酸酶是Cas12a。CRISPR / Cas12a基因编辑使用约42个核苷酸的RNA导链。TriLink提供未修饰的Cas12a或5-甲氧基尿苷修饰的Cas12a mRNA。
我们的基因编辑工具中包括Cre重组酶，这是一种酪氨酸重组酶，可催化两个loxP位点之间的重组。由于Cre介导的重组，两个都包含loxP位点的独立DNA物种可能发生融合事件。Cre可用于将DNA序列插入包含loxP位点的基因组。它也可用于细胞标记研究，其中Cre表达激活了转基因小鼠品系中loxP位点侧翼的无活性报告基因。然后，用Cre mRNA转染的细胞将表达报告基因，并揭示哪些细胞被高效转染。
成簇的规则间隔的短回文重复序列（CRISPR）迅速成为基因组编辑领域受欢迎的工具。CRISPR已被适配用于细菌抗噬菌体免疫系统的哺乳动物细胞。
TriLink CRISPR工具套件包括两个组件：一个是由Cas9或Cas12a mRNA编码的CRISPR核酸酶，第二个是向导RNA。实际上，Cas9指南由CRISPR RNA（crRNA）和反式CRISPR RNA（tracrRNA）组成。为了简化和提高效力，研究人员将这两个RNA融合为一个约100个核苷酸的单个RNA，他们将其称为单个向导RNA（sgRNA）。与Cas9相比，Cas12a使用约42个核苷酸的单个引导RNA。
当将Cas9或Cas12a mRNA和sgRNA共转染到细胞中时，引导链将Cas9或Cas12a蛋白导向基因组中的特定位置，然后在Cas9中产生双链断裂。Cas9切口酶mRNA编码具有D10A突变的Cas9，该突变导致单链切口而不是双链断裂。这可能导致较少的脱靶效应。
嵌合抗原受体（CAR）T细胞已被用作血液肿瘤临床治疗的过继性T细胞疗法（ACT）免疫疗法之一。近，它们也已经应用于实体瘤。
通常对CAR构建体进行修饰，使其包含单链抗体片段（scFv）结合结构域，跨膜结构域，以及通过独立于主要组织相容性复合物（MHC）的细胞内信号传导域激活T细胞的能力。修饰的T细胞在细胞表面表达CAR，其在治疗期间识别肿瘤相关抗原。
从要治疗的患者中收集大多数CAR T细胞的原始材料（自体移植）。扩增并修饰收获的细胞以表达CAR。CRISPR通常用于在TRAC（T细胞受体α常数）位点特异性插入位点，取代内源性T细胞受体。自体移植可避免排斥反应和移植物抗宿主病，但这些细胞通常来自病情较重的患者，因此效力可能不及健康供体所收集的细胞。另一种通用的现成解决方案是使用来自健康，同种异体供体的修饰细胞。这提供了一种途径来克服高昂的成本，一定程度地减少制造复杂性，缩短治疗时间并解决患者健康和生物安全问题。
然而，为了防止这些外源细胞的排斥，需要通过CRISPR进行广泛的基因缺失。CRISPR-Cas工程提供了下一代CAR T细胞解决方案，可以沉默或破坏任何所需的基因组基因座，使移植物抗宿主病（GvHD）和排斥反应小化，敲除检查点受体，增强抗肿瘤反应等。今天的CRISPR-Cas工程CAR T细胞在治疗感染性疾病，自身免疫性疾病和提高移植耐受性方面具有治疗潜力。
TriLink为CRISPR提供了几种未经修饰或经5-甲氧基尿苷（5moU）修饰的mRNA，以减少先天免疫应答。在该领域*的研究人员的帮助下，这些序列已进行了序列优化，以实现良好表达。TriLink还生产锌指核酸酶和转录激活因子样效应子核酸酶（TALEN）mRNA，用于生产CAR T细胞疗法。当您准备将研究成果转移到临床时，TriLink会在我们的cGMP设施中提供GMP合成的导链和核酸酶mRNA。
重组酶
位点特异性重组酶是用于操纵基因组以及有条件地激活或去激活细胞和生物体中基因表达的有用工具。重组酶识别约30-40个核苷酸的短目标DNA序列，并催化定向DNA交换反应。由于识别位点在高等生物的基因组中并不常见，因此可以用作工程改造基因组的工具。然而，重组酶在细胞或体内的持续表达可能会导致毒性和不合需要的脱靶重组。因此，mRNA的瞬时表达是重组酶表达的理想方法。
常用的重组酶之一是Cre重组酶。我们CleanCap ® NLS-Cre重组酶基因是一个上限（第1章）和聚腺苷酸化信使RNA，编码Cre重组酶融合到核定位序列（NLS）。Cre重组酶是衍生自P1噬菌体的酪氨酸重组酶。Cre催化两个loxP位点之间的重组，这些位点由一个34个碱基对的识别位点（5'ATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTAT 3'）组成。Cre重组酶已被广泛用于操纵植物，细菌，酵母和哺乳动物中的DNA。根据loxP位点的方向，Cre可用于诱导DNA盒交换，切除/插入，倒位和易位。
NLS-Cre重组酶mRNA的应用包括创建敲除或敲入动物，组织特异性蛋白表达以及标记研究，这些研究报道了将mRNA递送至给定细胞类型。Cre重组酶mRNA也是评估体外和体内 mRNA递送效力的有用工具。
人才
转录激活因子样效应核酸酶（TALENs）已经成为锌指核酸酶（ZFN）的一种更容易获得的替代物。像ZFN一样，TALENs利用模块化的DNA结合基序，可以对其进行修饰以引入新的DNA结合特异性。与ZFN不同，TALEN不太容易使从头设计复杂化的序列上下文效应，使它们成为普通科学界更实用的工具。TriLink自定义mRNA转录服务包括TALEN mRNA。TALEN由多个重复可变双残基（RVD）组成，每个重复残基与单个核苷酸结合。通过以特定顺序将RVD串在一起制成TALEN阵列，以提供对新型DNA序列的特异性和结合亲和力。通常，工程化的TALEN序列与非特异性切割结构域融合，例如FokI。与ZFN一样，TALEN充当与相邻DNA序列结合的对。TriLink提供了mRNA表达载体，旨在轻松接受使用Golden Gate方法克隆的TALEN。
转座酶
转座酶是一种以非常准确的方式催化转座子（DNA元件）从基因组中的一个位置移动到另一位置的酶。转座子广泛存在于人类基因组中，并可能导致多达40％的基因组重排。转座酶是将外源序列插入靶基因组的早可用工具之一。通常，用于转移的序列在转座子盒中侧接反向末端重复序列。当转座子盒与转座酶mRNA共转染时，转座酶催化转座子的切除及其插入细胞染色体中。两种常见的转座酶/转座子系统是Sleeping Beauty和PiggyBac。睡美人转座子整合到基因组的TA序列中，
Accegen细胞库/基因培养
AcceGen 是美国生物技术公司。成立于 2016 年，位于费尔菲尔德，新泽西，AcceGen 提供完整和精确的细胞产品和科研服务。我们擅长于细胞生物学、药学、生物技术和特种配料市场领域。我们承诺供应拥有全球制造和开发专长的最佳产品和服务，和先进的技术，提高整体生活质量。AcceGen 在细胞和基因组研究方面拥有重要的专业知识。我们提供一个多种优质原代细胞、肿瘤细胞系、MicroRNA Agomir/Antagomir，干细胞，永生化细胞系，转染稳定细胞系，和核酸检测试剂盒等。
Accegen常卖产品：
| 货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
| CG1500 | Pyrochrome® Chromogenic Test Kit | kit | accegen |
| ABI-TC004D | Human Neural Progenitor Cell Line-ventral mesencephalon derived | 1vial | accegen |
| ABC-TC3905 | Monkey Dermal Fibroblasts | 1vial | accegen |
| ABC-TC454S | BPH-1 Human Prostate Cancer Cell Lines | 1vial | accegen |
| ABC-TC478S | MONO-MAC-6 | 1vial | accegen |
| ABC-TC497S | HuP-T3 | 1vial | accegen |
| ABC-TC517S | MOLM-13 | 1vial | accegen |
| ABC-TC534S | UACC-62 | 1vial | accegen |
| ABC-TC605S | SCLC-21H | 1vial | accegen |
| ABC-X1118 | press™ Human FFAR1 Over-expressing Stable Cell Line | 1vial | accegen |
| ABC-TC3838 | Human Trabecular Meshwork Cells | 1vial | accegen |
| ABI-TC044D | Retinal Cell Line (R28) | 1vial | accegen |
| ABL-TC0172 | EHS | 1vial | accegen |
| ABL-TC0729 | UE7T-13 | 1vial | accegen |
| ABM-TM3646 | HUMAN HEPATOCYTES Medium Kit | 1kit | accegen |
| ABM-TM4286 | HUMAN PANCREATIC ISLETS OF LANGERHANS CELLS Medium Kit | 1kit | accegen |
| CS425 | GELATIN-BASED COATING SOLUTION- READY TO USE (100 ml) | 100ml | accegen |
| PSD250 | 凝胶法内毒素检测试剂盒 | 盒 | accegen |
| ABC-TC0989 | RPMI 8866 | 1vial | accegen |
| ABC-KH8365 | HUMAN LDLR KNOCKOUT CELL LINE | 1vial | accegen |
| ABC-SC003X | HighQC™ Human iPSC Line (Episomal, CB) | 1vial | accegen |
| ABC-SC2105 | HighQC™ Human IPS Cell Line (Episomal, CD34+, ApoE4) | 1vial | accegen |
| ABC-SC2106 | Human Neural Progenitor Cell Line-cortical derived | 1vial | accegen |
| ABC-TC0016 | 59M | 1vial | accegen |
| ABC-TC0209 | DH82 | 1vial | accegen |
| ABC-TC0453 | IRR-MRC-5 | 1vial | accegen |
| ABC-TC0506 | KHYG-1 | 1vial | accegen |
| ABC-H0034X | Human Alveolar Macrophages | 1vial | accegen |
| ABC-TC1055 | SN12C | 1vial | accegen |
| ABC-TC1257 | U-698-M | 1vial | accegen |
| ABC-TC1312 | HDLM-2 | 1vial | accegen |
| ABC-TC1313 | M-07e | 1vial | accegen |
| ABC-TC212S | BV-2 | 株 | accegen |
| ABC-TC3146 | v6.5 Mouse Embryonic Stem (ES) Cells | 1vial | accegen |
| ABC-TC3573 | Human Conjunctival Epithelial Cells | 1vial | accegen |
| ABC-TC3646 | Human Hepatocytes | 1vial | accegen |
关键词：Accegen；Accegen代理；ABC-TC212S；ABI-TC004D；Pyrochrome® Chromogenic Test Kit
简要描述：基因扩增仪
详细介绍
产品咨询
www.gene.com/
GeneTech是英国著名的基因扩增仪供应商，在产品研发和销售领域，与原美国MJ Research公司具有近二十年的合作，自2005年MJ公司被收购后， GeneTech公司推出自己品牌的基因扩增仪，强大的研发技术和高品质的性能，很快成为欧洲及美国市场强有力的竞争者。的GS482，更是把PCR使用性能和价格的*融合推向极至。GS系列PCR仪的著名用户包括：北京大学，复旦大学，中国科学院，中国预防医学科学院，中南大学等
Origio
我们提供了一个可靠的系统的消耗品，设备，技术和基因检测的完整的艺术过程。
我们提供了一个可靠的系统的消耗品，设备，技术和基因检测的完整的艺术过程。
CooperSurgical Fertility and Genomic Solutions is the global leader in IVF and reproductive genetics, providing innovative products and services for every step in the ART journey.
Building on the high-quality reputation of our legacy companies ORIGIO, SAGE, Humagen, The Pipette Company (TPC), K-Systems, Research Instruments (RI), Wallace®, LifeGlobal® and CooperGenomicsSM, we provide a trusted system of consumables, equipment, technologies and genetic testing for the complete ART process.
|
品牌 |
货号 |
名称 |
规格 |
|
Origio |
LGUA-100 |
High viscosity oil |
100ml |
|
Origio |
LGUA-500 |
High viscosity oil |
500ml |
|
Origio |
AMLG-100 |
High viscosity oil |
100ml |
QuantiGene Singleplex Assay Kits 包含执行检测所需的缓冲液、板和检测试剂。
| 描述 | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|
| QuantiGene Singleplex 检测试剂盒 | 2个盘子 | QS0012 |
| QuantiGene Singleplex 检测试剂盒 | 10个盘子 | QS0013 |
| QuantiGene Singleplex 检测试剂盒 | 5 x 10 盘子 | QS0014 |
| QuantiGene SinglePlex 检测试剂盒 | 50个盘子 | QS0016 |
| QuantiGene Singleplex HT 检测试剂盒（384 孔格式） | 50个盘子 | QS0384 |
QuantiGene 样品处理试剂盒专为多种样品类型而设计，包含用于从培养的细胞、组织、FFPE 组织和血液中制备 RNA 的试剂和说明。如果使用纯化的 RNA，则不需要这些试剂盒。
| 描述 | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|
| 用于培养细胞的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 2个盘子 | QS0100 |
| 用于培养细胞的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 10个盘子 | QS0101 |
| 用于培养细胞的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 5 x 10 盘子 | QS0102 |
| 用于培养细胞的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 50个盘子 | QS0103 |
| 用于组织的 QuantiGene 样本处理试剂盒 | 10个样品 | QS0104 |
| 用于组织的 QuantiGene 样本处理试剂盒 | 25 个样品 | QS0105 |
| 用于组织的 QuantiGene 样本处理试剂盒 | 100 个样本 | QS0106 |
| 用于 FFPE 样品的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 10个样品 | QS0107 |
| 用于 FFPE 样品的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 25 个样品 | QS0108 |
| 用于 FFPE 样品的 QuantiGene 样品处理试剂盒 | 100 个样本 | QS0109 |
| 用于血液样本的 QuantiGene 样本处理试剂盒 | 2个盘子 | QS0110 |
| 用于血液样本的 QuantiGene 样本处理试剂盒 | 10个盘子 | QS0111 |
| 用于血液样本的 QuantiGene 样本处理试剂盒 | 5 x 10 盘子 | QS0112 |
QuantiGene 培养箱温度验证试剂盒使用经过校准的温度计来评估检测中使用的烘箱培养箱温度的准确性。
| 描述 | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|
| QuantiGene 温度验证试剂盒 | 1 个套件 | QS0517 |
用于 QuantiGene Singleplex Assay 的小型紧凑型数字气动培养箱。在杂交步骤中提供最佳的温度均匀性（来自 Quincy Labs）。
| 描述 | 外部尺寸（WxDxH in.） | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 卧式气流烘箱，120V | 13×15×11 | 0.7 立方厘米。英尺。 | QS0720 |
| 卧式气流烘箱，220V | 13×15×11 | 0.7 立方厘米。英尺。 | QS0721 |
推荐用于 QuantiGene Singleplex Assay 的烘箱，用于更高通量的应用。在杂交步骤中提供最佳的温度均匀性（来自 Shel Labs）。
| 描述 | 外部尺寸（WxDxH in.） | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 卧式气流烘箱，120V | 21.3 x 23.8 x 33 | 1.6立方 英尺。 | QS0704 |
| 卧式气流烘箱，120V | 25.5 x 26.8 x 33.5 | 3 立方 英尺。 | QS0700 |
| 卧式气流烘箱，120V | 30×26.8×38 | 5 立方 英尺。 | QS0701 |
| 卧式气流烘箱，220V | 21.3 x 23.8 x 33 | 1.6立方 英尺。 | QS0712 |
| 卧式气流烘箱，220V | 25.5 x 26.8 x 33.5 | 3 立方 英尺。 | QS0710 |
| 卧式气流烘箱，220V | 30×26.8×38 | 5 立方 英尺。 | QS0711 |
| 描述 | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|
| QuantiGene 板密封 | 每个 12 个 | QS0506 |
| QuantiGene 板密封 | 45个 | QG0524 |
| QuantiGene 板密封 | 每个 260 | QS0507 |
| QuantiGene 裂解混合物 | 93 毫升 | QG0503 |
| QuantiGene 裂解混合物 | 470 毫升 | QG0504 |
| QuantiGene Singlelplex 洗涤缓冲液成分 | 1升 | QG0507 |
| QuantiGene Singleplex 洗涤缓冲液成分 | 5升 | QG0508 |
| QuantiGene Singleplex 洗涤缓冲液成分 | 25 升 | QG0509 |
| QuantiGene 均质溶液 | 20 毫升 | QS0518 |
| QuantiGene 均质溶液 | 50 毫升 | QG0516 |
| QuantiGene 均质溶液 | 200 毫升 | QG0517 |
| 蛋白酶 K，50 µg/µL | 150 µL | QS0510 |
| 蛋白酶 K，50 µg/µL | 750 µL | QS0511 |
| 蛋白酶 K，50 µg/µL | 3.5 毫升 | QS0512 |
| 软胶辊，4 英寸 | 各 1 个 | QS0515 |
| 描述 | 产品尺寸 | 货号 |
|---|---|---|
| 乳腺腺癌 (MCF-7) 总 RNA | 10微克 | QS0600 |
| T 细胞白血病 (Jurkat) 总 RNA | 10微克 | QS0601 |
| 人 Burkitts 淋巴瘤 (Raji) 总 RNA | 10微克 | QS0605 |
| 人类早幼粒细胞白血病 (HL-60) 总 RNA | 10微克 | QS0607 |
| 人宫颈腺癌 (HeLa-S3) 总 RNA | 10微克 | QS0608 |
| 人骨髓总 RNA | 10微克 | QS0610 |
| 人脑参考 RNA | 10微克 | QS0611 |
| 人结肠总 RNA | 10微克 | QS0613 |
| 人心脏总 RNA | 10微克 | QS0614 |
| 人空肠总 RNA | 10微克 | QS0615 |
| 人肾总 RNA | 10微克 | QS0616 |
| 人肝总 RNA | 10微克 | QS0617 |
| 人肺总 RNA | 10微克 | QS0618 |
| 人淋巴结总 RNA | 10微克 | QS0619 |
| 人卵巢总 RNA | 10微克 | QS0620 |
| 人胰腺总 RNA | 10微克 | QS0621 |
| 人外周血白细胞总 RNA | 10微克 | QS0622 |
| 人胎盘总 RNA | 10微克 | QS0623 |
| 人前列腺总 RNA | 10微克 | QS0624 |
| 人体骨骼肌总 RNA | 10微克 | QS0625 |
| 人小肠总 RNA | 10微克 | QS0626 |
| 人脾总 RNA | 10微克 | QS0627 |
| 人胃总 RNA | 10微克 | QS0628 |
| 人类睾丸总 RNA | 10微克 | QS0629 |
| 人胸腺总RNA | 10微克 | QS0630 |
| 人甲状腺总 RNA | 10微克 | QS0631 |
| 人子宫总 RNA | 10微克 | QS0632 |
| 人腔静脉总 RNA | 10微克 | QS0633 |
| 小鼠肝脏总 RNA | 10微克 | QS0634 |
| 小鼠肾脏总 RNA | 10微克 | QS0635 |
| 瑞士小鼠胚胎 (NIH/3T3) 总 RNA | 10微克 | QS0636 |
| 大鼠肝脏总 RNA | 10微克 | QS0637 |
| 大鼠肾脏总 RNA | 10微克 | QS0638 |
| 通用人类参考 RNA | 10微克 | QS0639 |
| 通用小鼠参考 RNA | 10微克 | QS0640 |
| 通用大鼠参考 RNA | 10微克 | QS0641 |
仅供研究使用，不可应用于诊断程序。
GeneCopoeia
GeneCopoeia Inc.是大的基因克隆供应商之一，NCBI推荐的基因克隆供应商。
GeneCopoeia致力于在生命科学和药物开发研究领域为基因功能研究、分子和细胞水平的药靶验证，以及药物筛选、疾病诊断和治疗评估的生物标记开发等方面提供高质量材料、技术和优质服务，已建立了人类全长基因开放阅读框(ORF)、穿梭克隆库和表达克隆库，并以此为基础建立了高通量蛋白质表达生产平台，基因表达差异分析平台，RNA干扰、抗体生产和药物靶标筛选平台，成为优先的人类全长蛋白编码基因表达克隆和重组蛋白提供者。
GeneCopoeia, Inc. is a US-based manufacturer and provider of genomics and proteomics products and services for academic and governmental research institutes, pharmaceutical and biotechnology industry. The company is headquartered in the I-270 Hi-Tech corridor in the state of Maryland. Together with investors in China, GeneCopoeia formed a joint venture, FulenGen Co., Ltd. in P.R. China, which has been in operation since 2000.