MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的UDB Primer,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 097-192

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 097-192

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 193-288

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 193-288

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 289-384

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 289-384

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM。
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建共384种双端唯一Barcode标记的文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途
  2. 针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列。

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序各板位对应Index信息可直接联系翌圣销售或翌圣其他工作人员获取)。

 

HB230208

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

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Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的UDB Primer,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 097-192

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 097-192

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 193-288

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 193-288

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 289-384

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 289-384

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM。
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建共384种双端唯一Barcode标记的文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途
  2. 针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列。

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序各板位对应Index信息可直接联系翌圣销售或翌圣其他工作人员获取)。

 

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set4 (Unique Dual Index Primer Kit)

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

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已发表文献

 

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,其中Set1UDB Primer 001-048的最小平衡单元为8,其余Set中的UDB Primer的最小平衡单元为4每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的 DNA Adapter,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建384种双端唯一Barcode标记文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列

 

板位信息

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板位对应barcode信息咨询翌圣。

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序。

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

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暂无内容

 

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,其中Set1UDB Primer 001-048的最小平衡单元为8,其余Set中的UDB Primer的最小平衡单元为4每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的 DNA Adapter,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2 × 960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建384种双端唯一Barcode标记文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

板位对应barcode信息咨询翌圣。

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序。

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set3 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

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已发表文献

 

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的UDB Primer,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 097-192

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 097-192

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 193-288

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 193-288

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 289-384

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 289-384

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM。
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建共384种双端唯一Barcode标记的文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途
  2. 针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列。

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序各板位对应Index信息可直接联系翌圣销售或翌圣其他工作人员获取)。

 

HB230208

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

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产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 097-192

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 097-192

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 193-288

10 μL each

13538ES04

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2×960 μL

UDB Primer 193-288

20 μL each

13539ES02

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960 μL

UDB Primer 289-384

10 μL each

13539ES04

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2×960 μL

UDB Primer 289-384

20 μL each

 

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注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM。
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建共384种双端唯一Barcode标记的文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途
  2. 针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列。

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序各板位对应Index信息可直接联系翌圣销售或翌圣其他工作人员获取)。

 

HB230208

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set1 (Unique Dual Index Primer Kit)

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Hieff NGS双端接头试剂盒|Dual UMI UDI Adapter Kit Set1

Hieff NGS双端接头试剂盒|Dual UMI UDI Adapter Kit Set1

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® Dual UMI UDI Adapter Kit for Illumina®Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的Illumina UMI Adapter(短接头)以及特异性搭配的UDI Primer。在接头连接后,Insert DNA两端分别添加上8 bpUnique Molecular Identifier (UMI),可用于检测低频突变,有效降低标签跳跃和错配,保证分析结果的准确性和真实性。

该试剂盒分为2Set,每个Set包含48种双端唯一Index Primer,配合DNA Library Prep Kit for Illumina ®使用,可构建96种双端唯一Index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

货号

组分编号

组分名称

产品规格

48×2 T

48×4 T

13370

13370-A

UMI Adapter

480 μL

960 μL

13370-B

UDI Primer 0001-0048

10 μL each

20 μL each

13371

13371-A

UMI Adapter

480 μL

960 μL

13371-B

UDI Primer 0049-0096

10 μL each

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月

 

注意事项

1. 本试剂盒中UMI Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2. 本试剂盒提供的UMI Adapter为添加双端分子标签的通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDI Primer提供Index序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDI Primer浓度为12.5 μM

3. 本试剂盒有两种规格,分别提供48UDI Primer,可以构建多达96种双端唯一Index标记文库。

4. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25°C。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4°C

5. 使用Hieff NGS® Dual UMI UDI Adapter Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7. 本产品仅供科研使用!

 

序列信息

UMI Adapter for Illumina

5´-/Phos/ NNNNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNNN*T-3´

 

i5 Index Primer for Illumina

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC [i5 Index] ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

 

i7 Index Primer for Illumina

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT [i7 Index] GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

 

[i5 Index]表示 8 bp i5 Index 序列,[i7 Index]表示 8 bp i7 Index 序列Index序列信息请下载电子版说明书查看。

HB220701

Hieff NGS双端接头试剂盒|Dual UMI UDI Adapter Kit Set1

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Hieff NGS® Dual UMI UDI Adapter Kit for Illumina®Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的Illumina UMI Adapter(短接头)以及特异性搭配的UDI Primer。在接头连接后,Insert DNA两端分别添加上8 bpUnique Molecular Identifier (UMI),可用于检测低频突变,有效降低标签跳跃和错配,保证分析结果的准确性和真实性。

该试剂盒分为2Set,每个Set包含48种双端唯一Index Primer,配合DNA Library Prep Kit for Illumina ®使用,可构建96种双端唯一Index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

货号

组分编号

组分名称

产品规格

48×2 T

48×4 T

13370

13370-A

UMI Adapter

480 μL

960 μL

13370-B

UDI Primer 0001-0048

10 μL each

20 μL each

13371

13371-A

UMI Adapter

480 μL

960 μL

13371-B

UDI Primer 0049-0096

10 μL each

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月

 

注意事项

1. 本试剂盒中UMI Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2. 本试剂盒提供的UMI Adapter为添加双端分子标签的通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDI Primer提供Index序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDI Primer浓度为12.5 μM

3. 本试剂盒有两种规格,分别提供48UDI Primer,可以构建多达96种双端唯一Index标记文库。

4. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25°C。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4°C

5. 使用Hieff NGS® Dual UMI UDI Adapter Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7. 本产品仅供科研使用!

 

序列信息

UMI Adapter for Illumina

5´-/Phos/ NNNNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNNN*T-3´

 

i5 Index Primer for Illumina

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC [i5 Index] ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

 

i7 Index Primer for Illumina

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT [i7 Index] GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

 

[i5 Index]表示 8 bp i5 Index 序列,[i7 Index]表示 8 bp i7 Index 序列Index序列信息请下载电子版说明书查看。

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Hieff NGS双端接头试剂盒|Dual UMI UDI Adapter Kit Set1

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的UDB Primer,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 097-192

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 097-192

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 193-288

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 193-288

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 289-384

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 289-384

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM。
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建共384种双端唯一Barcode标记的文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途
  2. 针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列。

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序各板位对应Index信息可直接联系翌圣销售或翌圣其他工作人员获取)。

 

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MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

 

Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®MGI高通量测序平台DNA文库构建专用配套试剂盒,采用双端接头解决方案,包含二代测序建库中使用的UDB Adapter以及UDB Primer。共分为4个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的96种双端唯一Barcode标记的UDB Primer,配合YEASEN提供的MGI建库试剂盒使用,可构建多达384种双端唯一Barcode标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

组分体积

13536ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 001-096

10 μL each

13536ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 001-096

20 μL each

13537ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 097-192

10 μL each

13537ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 097-192

20 μL each

13538ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 193-288

10 μL each

13538ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 193-288

20 μL each

13539ES02

UDB Adapter

960 μL

UDB Primer 289-384

10 μL each

13539ES04

UDB Adapter

2×960 μL

UDB Primer 289-384

20 μL each

 

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期18个月。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本试剂盒中UDB Adapter的浓度为10 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒和起始模板投入量进行调整。
  3. 本试剂盒提供的UDB Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDB Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。本试剂盒中的UDB Primer浓度为10 μM。
  4. 本试剂盒分为4个Set,每个Set包含96种双端唯一Barcode标记的 UDB Primer,4个Set可以构建共384种双端唯一Barcode标记的文库。
  5. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。
  6. 使用Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®试剂盒构建的测序文库结构如下:

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

  1. 本产品仅做科研用途
  2. 针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序

 

序列信息

UDB Adapter for MGI:

5´-/5Phos/ AGTCGGAGGCCAAGCGGTCTTAGGAAGACAATCAG -3´

5´-TTGTCTTCCTAAGCAACTCCTTGGCTCACAGAACGACATGGCTACGATCCGACTT -3´

Barcode 2 Primer for MGI:

5´-/5Phos/CTCTCAGTACGTCAGCAGTT[Barcode 2]CAACTCCTTGGCTCACAGAAC -3´

Barcode 1 Primer for MGI:

5´-GCATGGCGACCTTATCAG[Barcode 1]TTGTCTTCCTAAGACCGCTTGG-3´

[Barcode 2 ]表示10 bp的Barcode 2 序列,[Barcode 1 ]表示10 bp的Barcode 1 序列。

 

板位信息

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

 

注:针对 MGI 平台的双 Barcode序列设计基于碱基平衡的原则,Barcode 1-48 为每 8 个成组;Barcode 49-384 为每 4 个成组。为达到最佳测序质量,不同样本数目建库时,推荐使用连续的Barcode 构建文库,且 Barcode ≥ 8 种,混合后上机测序各板位对应Index信息可直接联系翌圣销售或翌圣其他工作人员获取)。

 

HB230208

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

暂无内容

MGI高通量测序UDB双端接头试剂盒Set2 (Unique Dual Index Primer Kit)

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DNA双端Barcode环化试剂盒|Dual Barcode Fast-Pace™ DNA Cyclization Kit

DNA双端Barcode环化试剂盒|Dual Barcode Fast-Pace™ DNA Cyclization Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® Dual Barcode Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI®是针对 MGI®高通量测序平台专门开发设计的单链环化试剂盒。本产品采用高质量的酶和经优化后的 Buffer 组成,显著提高反应效率, 使整个环化消化流程在 30 min 内完成。本试剂盒适用于所有连接华大标准的双标签 PCR 接头文库扩增产物, 除建库试剂本身的限制外,本环化试剂盒不限 MGI®测序平台。

 

产品组分

组分编号与名称

13340ES08

13340ES16

13340ES96

13340-A

DB Splint Oligo

48μL

96 μL

576 μL

13340-B

Splint Buffer

120μL

240 μL

2×720 μL

13340C

Ligase

40μL

80 μL

480 μL

13340D

Digestion Buffer

64μL

128 μL

768 μL

13340E

Digestion Enzyme

16μL

32 μL

192 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

 

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡,剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染,推荐使用带滤芯的枪头,吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. 定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理),以保证实验环境的洁净度。

7. 本产品仅作科研用途!

 

二、样本要求及处理

2.1样本量要求

1. 本试剂盒推荐的Input DNA量为1 pmol;若PCR产物不足,最低可降至0.5 pmol投入量。

2. 若有特殊的环化投入量需求,则按照文库制备试剂盒的要求投入所需的 Input DNA 量。

3. 不同片段大小DNA 1 pmol 分子对应不同的质量,可根据公式 1 计算或参考表1选择所需的 Input DNA量:

公式 1 PCR 产物摩尔数与质量间的换算

1 pmol PCR 产物对应的质量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66

1  不同片段大小PCR产物1pmol对应产量

插入片段大小(bp)

PCR产物主片段大小(bp)

1 pmol对应产量(ng)

150

300

198

200

350

231

250

400

264

300

450

297

2.2 样本混样要求

1. Input DNA可以是单个样本,也可以是多个带有不同Barcodes的样本的混合物。

2. 对样本进行混合时需满足Barcodes混合的要求,可参考表华大双标签 PCR 接头试剂盒说明书选择合适的Barcodes进行混合。

3. 混合的样本总量推荐为1 pmol,若每个样本所需数据量相同,则等量混合,每个样本所需的质量按照公式2进行计算:

公式 2 混合样本中单个样本所需质量的计算

单个样本所需的质量(ng)=1 pmol Input DNA对应的质量(ng)/混合的样本个数 N

4. 单个样本或混合后样本用于环化时,体积应为34 μL,若不足则用 ddH2O补充至34 μL。

三、关于磁珠纯化(Bead-based Clean Up)

1. 磁珠使用前应先平衡至室温,否则会导致纯化得率下降。

2. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。

3. 磁珠漂洗使用的80%乙醇应现用现配,否则将影响回收效率。

4. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应;过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下,室温干燥约5 min。

5. 单链环产物纯化保存,可使用TE Buffer洗脱,产物可于-20°C可保存1个月。

四、关于文库质检(Library Quality Analysis)

1. 单链环产物纯化后推荐使用 Qubit® ssDNA Assay Kit 单链DNA荧光染料试剂对纯化后产物进行定量。  
2. 针对华大智造高通量测序平台, 单链环产物纯化后产量应≥80 fmol(足够2次上机测序)。
3. 可根据公式3计算或参考表2

公式 3 单链环摩尔数与质量间的换算
80 fmol单链环对应的质量(ng)=0.08×DNA 主片段大小(bp)×0.33

2  不同PCR产物片段大小对应80fmol单链环产量

插入片段大小(bp)

PCR产物主片段大小(bp)

80 fmol对应产量(ng)

150

300

7.92

200

350

9.24

250

400

10.56

300

450

11.88

 

使用方法

一、自备材料

1. 纯化磁珠:Cat#12601,Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880,AMPure XP Beads或其他等效产品。

2. 文库质控:Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit® ssDNA Assay Kit

3. 其他材料:无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer(10 mM Tris-HCl,pH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪等。

二、操作流程

DNA双端Barcode环化试剂盒|Dual Barcode Fast-Pace™ DNA Cyclization Kit

1  单链环化文库构建流程

三、操作步骤

3.1 变性

1. 根据文库长度,取1 pmol 至0.2 ml PCR管中,ddH2O补充至34 μL

2. 将表3中试剂解冻后,颠倒混匀并置于冰上备用。

3. 于冰上配制表3反应体系。

3  DNA变性体系

名称

体积(μL)

单个或混合好的双链文库

34

DB Splint Oligo

6

Total

40

4. 混匀后,在PCR仪上进行98℃变性3 min,之后立即置于冰上,冰浴2 min 后瞬时离心。

3.2 单链环化

1. 将表4中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

2. 于冰上配制表4反应体系。

4  单链环化体系

名称

体积(μL)

上一步反应物

40

Splint Buffer

15

Ligase

5

Total

60

3.使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

4.将PCR管置于PCR仪上,按照表5所示摄制反应程序,进行单链环化反应。

5单链环化反应程序

温度

时间

热盖105°C

OFF

37°C

15min

4°C

Hold

3.3 酶切消化

1. 将表6中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

2. 于冰上配制表6所示反应体系。

6  酶切消化体系

名称

体积(μL)

上一步反应物

60

Digestion Buffer

8

Digestion Enzyme

2

Total

70

3. 使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

4. PCR管置于PCR仪上,按照表7的条件进行反应:

7  酶切消化反应程序

温度

时间

热盖105°C

OFF

37°C

10 min

4°C

Hold

5. 反应结束后,瞬时离心,立即进行纯化。

3.4 消化产物纯化

该步骤使用磁珠对3.3步骤的产物进行纯化。

1. 准备工作:将Hieff NGS® DNA Selection Beads或 Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取120 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads至消化产物中,涡旋或吹打混匀室温孵育10min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约2 min),小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂。

8. 将PCR管从磁力架中取出,加入22 μL TE Buffer,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置10 min。

9. 短暂离心,将 PCR 管始终置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约 2min),将上清小心移至新 PCR 管中。

★停止点:环化纯化产物,可置于-20℃储存一个月。

3.5 消化产物质控

使用Qubit® ssDNA Assay Kit荧光试剂对酶切消化产物进行定量,具体请参见注意事项四。

 

HB210803

DNA双端Barcode环化试剂盒|Dual Barcode Fast-Pace™ DNA Cyclization Kit

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DNA双端Barcode环化试剂盒|Dual Barcode Fast-Pace™ DNA Cyclization Kit

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Hieff NGS® Dual Barcode Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI®是针对 MGI®高通量测序平台专门开发设计的单链环化试剂盒。本产品采用高质量的酶和经优化后的 Buffer 组成,显著提高反应效率, 使整个环化消化流程在 30 min 内完成。本试剂盒适用于所有连接华大标准的双标签 PCR 接头文库扩增产物, 除建库试剂本身的限制外,本环化试剂盒不限 MGI®测序平台。

 

产品组分

组分编号与名称

13340ES08

13340ES16

13340ES96

13340-A

DB Splint Oligo

48μL

96 μL

576 μL

13340-B

Splint Buffer

120μL

240 μL

2×720 μL

13340C

Ligase

40μL

80 μL

480 μL

13340D

Digestion Buffer

64μL

128 μL

768 μL

13340E

Digestion Enzyme

16μL

32 μL

192 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

 

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡,剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染,推荐使用带滤芯的枪头,吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. 定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理),以保证实验环境的洁净度。

7. 本产品仅作科研用途!

 

二、样本要求及处理

2.1样本量要求

1. 本试剂盒推荐的Input DNA量为1 pmol;若PCR产物不足,最低可降至0.5 pmol投入量。

2. 若有特殊的环化投入量需求,则按照文库制备试剂盒的要求投入所需的 Input DNA 量。

3. 不同片段大小DNA 1 pmol 分子对应不同的质量,可根据公式 1 计算或参考表1选择所需的 Input DNA量:

公式 1 PCR 产物摩尔数与质量间的换算

1 pmol PCR 产物对应的质量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66

1  不同片段大小PCR产物1pmol对应产量

插入片段大小(bp)

PCR产物主片段大小(bp)

1 pmol对应产量(ng)

150

300

198

200

350

231

250

400

264

300

450

297

2.2 样本混样要求

1. Input DNA可以是单个样本,也可以是多个带有不同Barcodes的样本的混合物。

2. 对样本进行混合时需满足Barcodes混合的要求,可参考表华大双标签 PCR 接头试剂盒说明书选择合适的Barcodes进行混合。

3. 混合的样本总量推荐为1 pmol,若每个样本所需数据量相同,则等量混合,每个样本所需的质量按照公式2进行计算:

公式 2 混合样本中单个样本所需质量的计算

单个样本所需的质量(ng)=1 pmol Input DNA对应的质量(ng)/混合的样本个数 N

4. 单个样本或混合后样本用于环化时,体积应为34 μL,若不足则用 ddH2O补充至34 μL。

三、关于磁珠纯化(Bead-based Clean Up)

1. 磁珠使用前应先平衡至室温,否则会导致纯化得率下降。

2. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。

3. 磁珠漂洗使用的80%乙醇应现用现配,否则将影响回收效率。

4. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应;过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下,室温干燥约5 min。

5. 单链环产物纯化保存,可使用TE Buffer洗脱,产物可于-20°C可保存1个月。

四、关于文库质检(Library Quality Analysis)

1. 单链环产物纯化后推荐使用 Qubit® ssDNA Assay Kit 单链DNA荧光染料试剂对纯化后产物进行定量。  
2. 针对华大智造高通量测序平台, 单链环产物纯化后产量应≥80 fmol(足够2次上机测序)。
3. 可根据公式3计算或参考表2

公式 3 单链环摩尔数与质量间的换算
80 fmol单链环对应的质量(ng)=0.08×DNA 主片段大小(bp)×0.33

2  不同PCR产物片段大小对应80fmol单链环产量

插入片段大小(bp)

PCR产物主片段大小(bp)

80 fmol对应产量(ng)

150

300

7.92

200

350

9.24

250

400

10.56

300

450

11.88

 

使用方法

一、自备材料

1. 纯化磁珠:Cat#12601,Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880,AMPure XP Beads或其他等效产品。

2. 文库质控:Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit® ssDNA Assay Kit

3. 其他材料:无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer(10 mM Tris-HCl,pH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪等。

二、操作流程

DNA双端Barcode环化试剂盒|Dual Barcode Fast-Pace™ DNA Cyclization Kit

1  单链环化文库构建流程

三、操作步骤

3.1 变性

1. 根据文库长度,取1 pmol 至0.2 ml PCR管中,ddH2O补充至34 μL

2. 将表3中试剂解冻后,颠倒混匀并置于冰上备用。

3. 于冰上配制表3反应体系。

3  DNA变性体系

名称

体积(μL)

单个或混合好的双链文库

34

DB Splint Oligo

6

Total

40

4. 混匀后,在PCR仪上进行98℃变性3 min,之后立即置于冰上,冰浴2 min 后瞬时离心。

3.2 单链环化

1. 将表4中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

2. 于冰上配制表4反应体系。

4  单链环化体系

名称

体积(μL)

上一步反应物

40

Splint Buffer

15

Ligase

5

Total

60

3.使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

4.将PCR管置于PCR仪上,按照表5所示摄制反应程序,进行单链环化反应。

5单链环化反应程序

温度

时间

热盖105°C

OFF

37°C

15min

4°C

Hold

3.3 酶切消化

1. 将表6中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

2. 于冰上配制表6所示反应体系。

6  酶切消化体系

名称

体积(μL)

上一步反应物

60

Digestion Buffer

8

Digestion Enzyme

2

Total

70

3. 使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

4. PCR管置于PCR仪上,按照表7的条件进行反应:

7  酶切消化反应程序

温度

时间

热盖105°C

OFF

37°C

10 min

4°C

Hold

5. 反应结束后,瞬时离心,立即进行纯化。

3.4 消化产物纯化

该步骤使用磁珠对3.3步骤的产物进行纯化。

1. 准备工作:将Hieff NGS® DNA Selection Beads或 Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取120 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads至消化产物中,涡旋或吹打混匀室温孵育10min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约2 min),小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂。

8. 将PCR管从磁力架中取出,加入22 μL TE Buffer,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置10 min。

9. 短暂离心,将 PCR 管始终置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约 2min),将上清小心移至新 PCR 管中。

★停止点:环化纯化产物,可置于-20℃储存一个月。

3.5 消化产物质控

使用Qubit® ssDNA Assay Kit荧光试剂对酶切消化产物进行定量,具体请参见注意事项四。

 

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