消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶,透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用; 胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,以胶原I为主。
胰蛋白酶(简称胰酶)是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强,容易造成平滑肌细胞损坏;
胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL 此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键.
胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此,这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。
胶原酶(collagenase)是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
中文名称: I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶
英文名称:Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V
CAS号: 9001-12-1
规格:100mg, 1g ,5
产地:Worthington sigma invitrogen
外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉;
保存:-20°C
胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制 成为200u/mL就可以了.,
胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程
准备样品:干粉,PBS缓冲液,离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。
准备工作:将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。
配制:
1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度0.25%用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS(PH到7.2左右)液中。搅拌混匀,置于4℃内过一晚。
2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。
3.分装:将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至
A: Collagenase I(胶原酶I型) : 主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
订货信息
货号
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品名
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包装
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价格
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品牌
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LS004194
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Collagenase I(胶原酶I型)
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100 mg
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476
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Worthington
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LS004196
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Collagenase I(胶原酶I型)
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1 gm
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2464
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Worthington
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LS004197
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Collagenase I(胶原酶I型)
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5 gm
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10360
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Worthington
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17100-017
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Collagenase I(胶原酶I型)
|
1g
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3025
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invitrogen
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C0130-100MG
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Collagenase I(胶原酶I型)
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100mg
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526.5
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sigma
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C0130-500MG
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Collagenase I(胶原酶I型)
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500MG
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1473.03
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sigma
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C0130-1G
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Collagenase I(胶原酶I型)
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1G
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2208.96
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sigma
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C0130-5G
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Collagenase I(胶原酶I型)
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5G
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6113.25
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sigma
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B: Collagenase II(胶原酶II型) : 适用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离。
订货信息
货号
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品名
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包装
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价格
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品牌
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LS004177
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Collagenase II(胶原酶II型)
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5 gm
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10360
|
Worthington
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LS004176
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Collagenase II(胶原酶II型)
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1 gm
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2464
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Worthington
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LS004174
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Collagenase II(胶原酶II型)
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100 mg
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476
|
Worthington
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17101-015
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Collagenase II(胶原酶II型)
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1g
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3025
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invitrogen
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C6885-25MG
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Collagenase II(胶原酶II型)
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25MG
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508.95
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sigma
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C6885-100MG
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Collagenase II(胶原酶II型)
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100mg
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778.05
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sigma
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C6885-500MG
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Collagenase II(胶原酶II型)
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500MG
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1,980.81
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sigma
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C6885-1G
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Collagenase II(胶原酶II型)
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1G
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2,971.80
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sigma
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C6885-5G
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Collagenase II(胶原酶II型)
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5G
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7,926.75
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sigma
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C: Collagenase III(胶原酶 III型) 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用
订货信息
货号
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品名
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包装
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价格
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品牌
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LS004182
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Collagenase III(胶原酶 III型)
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1 gm
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2464
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Worthington
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LS004183
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Collagenase III(胶原酶III型)
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5 gm
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10360
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Worthington
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LS004180
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Collagenase III(胶原酶III型)
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100 mg
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476
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Worthington
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D: Collagenase IV(胶原酶IV型):胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织, 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用。
订货信息
货号
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品名
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包装
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价格
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品牌
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17104-019
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Collagenase IV(胶原酶IV型)
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1g
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3025
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invitrogen
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C5138-25MG
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Collagenase IV(胶原酶IV型)
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25MG
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452.79
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sigma
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C5138-100MG
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Collagenase IV(胶原酶IV型)
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100mg
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772.20
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sigma
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C5138-500MG
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Collagenase IV(胶原酶IV型)
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500MG
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2,530.71
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sigma
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C5138-1G
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Collagenase IV(胶原酶IV型)
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1G
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4,095.00
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sigma
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C5138-5G
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Collagenase IV(胶原酶IV型)
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5G
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15,420.60
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sigma
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LS004189
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Collagenase IV(胶原酶V型)
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5 gm
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10360
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Worthington
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LS004188
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Collagenase IV(胶原酶V型)
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1 gm
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2464
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Worthington
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LS004186
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Collagenase IV(胶原酶V型)
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100 mg
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476
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Worthington
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E: Collagenase V(胶原酶V型): 胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离,结缔组织分离。
货号
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品名
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包装
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价格
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品牌
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LS005283
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Collagenase V(胶原酶V型)
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5 gm
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12460
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Worthington
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LS005282
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Collagenase V(胶原酶V型)
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1 gm
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2968
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Worthington
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LS005280
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Collagenase V(胶原酶V型)
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100 mg
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588
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Worthington
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C9263-25MG
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Collagenase V(胶原酶V型)
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25MG
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469.17
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sigma
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C9263-100MG
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Collagenase V(胶原酶V型)
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100mg
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625.95
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sigma
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C9263-500MG
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Collagenase V(胶原酶V型)
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500MG
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1,814.67
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sigma
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C9263-1G
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Collagenase V(胶原酶V型)
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1G
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2,845.44
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sigma
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C9263-5G
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Collagenase V(胶原酶V型)
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5G
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5,686.20
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sigma
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