DNA凝胶回收试剂盒(琼脂糖凝胶)|Gel Extraction Kit
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FAQ
COA
已发表文献
MolPure® Gel Extraction Kit采用MolPure® DNA Column G1和高效的溶胶体系，适用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收长度为100 bp–40 kb的高质量DNA片段。回收过程中不需要用到有毒的酚、氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，溶胶时间短，加入溶胶液体积小，20 min即可完成整个纯化过程。试剂盒内的MolPure® DNA Column G1可选择性吸附高达8 μg的DNA片段，不吸附酶、矿物油和其它杂质，得到的DNA纯度高，可直接用于后续酶切、连接、转化、测序和文库构建等实验。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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19101ES08 (5 T) |
19101ES50 (50 T) |
19101ES70 (200 T) |
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19101-A |
DNA 吸附柱 (MolPure® DNA Column G1) |
5 个 |
50 个 |
200 个 |
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19101-B |
2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube G1) |
5 个 |
50 个 |
200 个 |
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19101-C |
缓冲液 AC (AC Buffer G1) |
0.5 mL |
5 mL |
20 mL |
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19101-D |
溶胶液 BD (BD Buffer G1) |
2 mL |
20 mL |
80 mL |
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19101-E |
漂洗液 W* (Wash Buffer*) |
1.3 mL |
13 mL |
50 mL |
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19101-F |
洗脱液 (Elution Buffer) |
1 mL |
10 mL |
20 mL |
运输和保存方法
常温运输，常温保存。产品有效期12个月。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。
3. 溶胶液BD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。且应注意避免强光直射。
4. PCR扩增产物和酶切产物等反应体系的纯化，建议使用MolPure® PCR Purification Kit（Cat#19106）。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
6. 本产品仅作科研用途！
实验前准备
1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。
2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到13,000 rpm转速的传统台式离心机。
3. 首次使用前，在漂洗液W*（19101-E）瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现漂洗液W*由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W*中的乙醇含量。
操作方法
一、样本预处理：
1. 称重含有目的片段的琼脂糖凝胶。
2. 每100 mg 1% 琼脂糖加入100 µL溶胶液BD。
【注】：对于高浓度的琼脂糖凝胶，溶胶液BD加入量需等比例增加。
3. 50~60℃水浴10 min。期间每2-3 min轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。
【注】：对于400 bp以下片段，建议加入0.3倍体积的异丙醇，可显著提高回收率。
二、DNA产物纯化：
1.（选做）向DNA吸附柱G1中加入100 µL缓冲液AC，13,000 rpm离心1 min，弃掉废液。
【注】：仅限临近效期3个月内的产品进行此项操作，常规产品选做此项操作。
【注】：处理后的DNA吸附柱G1仅限当天使用。
2. 将样本混合液加入到DNA吸附柱G1中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。
【注】：混合液每次最大加入体积750 µL，可分多次离心。
3. 将DNA吸附柱G1放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。
【注】：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。
4. 加入500 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。
5 将DNA吸附柱G1放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，室温晾干5 min。以除去残留的漂洗液W*。
6. 将DNA吸附柱G1放入新的离心管（自备）中，在DNA吸附柱G1中央加入50 µL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1min。收集滤液，即为DNA溶液。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。
7. DNA溶液可置于-20℃长期保存。
HB220623
MolPure® Gel Extraction Kit采用MolPure® DNA Column G1和高效的溶胶体系，适用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收长度为100 bp–40 kb的高质量DNA片段。回收过程中不需要用到有毒的酚、氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，溶胶时间短，加入溶胶液体积小，20 min即可完成整个纯化过程。试剂盒内的MolPure® DNA Column G1可选择性吸附高达8 μg的DNA片段，不吸附酶、矿物油和其它杂质，得到的DNA纯度高，可直接用于后续酶切、连接、转化、测序和文库构建等实验。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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19101ES08 (5 T) |
19101ES50 (50 T) |
19101ES70 (200 T) |
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19101-A |
DNA 吸附柱 (MolPure® DNA Column G1) |
5 个 |
50 个 |
200 个 |
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19101-B |
2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube G1) |
5 个 |
50 个 |
200 个 |
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19101-C |
缓冲液 AC (AC Buffer G1) |
0.5 mL |
5 mL |
20 mL |
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19101-D |
溶胶液 BD (BD Buffer G1) |
2 mL |
20 mL |
80 mL |
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19101-E |
漂洗液 W* (Wash Buffer*) |
1.3 mL |
13 mL |
50 mL |
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19101-F |
洗脱液 (Elution Buffer) |
1 mL |
10 mL |
20 mL |
运输和保存方法
常温运输，常温保存。产品有效期12个月。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。
3. 溶胶液BD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。且应注意避免强光直射。
4. PCR扩增产物和酶切产物等反应体系的纯化，建议使用MolPure® PCR Purification Kit（Cat#19106）。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
6. 本产品仅作科研用途！
实验前准备
1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。
2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到13,000 rpm转速的传统台式离心机。
3. 首次使用前，在漂洗液W*（19101-E）瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现漂洗液W*由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W*中的乙醇含量。
操作方法
一、样本预处理：
1. 称重含有目的片段的琼脂糖凝胶。
2. 每100 mg 1% 琼脂糖加入100 µL溶胶液BD。
【注】：对于高浓度的琼脂糖凝胶，溶胶液BD加入量需等比例增加。
3. 50~60℃水浴10 min。期间每2-3 min轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。
【注】：对于400 bp以下片段，建议加入0.3倍体积的异丙醇，可显著提高回收率。
二、DNA产物纯化：
1.（选做）向DNA吸附柱G1中加入100 µL缓冲液AC，13,000 rpm离心1 min，弃掉废液。
【注】：仅限临近效期3个月内的产品进行此项操作，常规产品选做此项操作。
【注】：处理后的DNA吸附柱G1仅限当天使用。
2. 将样本混合液加入到DNA吸附柱G1中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。
【注】：混合液每次最大加入体积750 µL，可分多次离心。
3. 将DNA吸附柱G1放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。
【注】：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。
4. 加入500 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。
5 将DNA吸附柱G1放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，室温晾干5 min。以除去残留的漂洗液W*。
6. 将DNA吸附柱G1放入新的离心管（自备）中，在DNA吸附柱G1中央加入50 µL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1min。收集滤液，即为DNA溶液。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。
7. DNA溶液可置于-20℃长期保存。
HB220623
Q：需要多长时间的操作时间？
A：操作简便：20 min 即可完成纯化
Q：胶回收试剂盒回收率为多少？
A：回收率>60%，最高可达 90%。
Q：胶回收可以直接回收 PCR 原液吗？
A：可以。溶液还是加溶胶液，只是不用置于 50-60℃温浴了，其他步骤不变。 比例为 PCR 原液 50 uL体系，加 200 uL 溶胶液。片段小的话，也按照说明书的方式加入异丙醇。但更推荐专门的PCR产物纯化试剂盒（货号：19106ES）。
Q: 回收效率低怎么办？
A: 回收小片段，可以多加溶胶液，溶胶后可以加入0.3 倍体积的异丙醇，可显著提高回收率；另外使用70℃预热的洗脱液也可以提高回收产量。
Q：加了溶胶液BD后溶液呈紫色什么原因呢？正常吗？
A: 如溶液颜色为橙色或紫色，建议加入10μL 3M醋酸钠（pH值5.2）溶液混合。混合物的颜色变成黄色
后进行后续实验，黄色是DNA结合的最佳pH值。
Q: 回收率低,有什么建议吗？
A: 1）电泳的时候，用新鲜的电泳液，不新鲜的会导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力;
2）切胶的时候在保证目的片段的情况下，尽可能的减少胶体积，并且减少紫外灯下的暴露时间;
3）观察加了溶胶液后混合物的颜色，如果是如溶液颜色为橙色或紫色，需要加入10μL3M醋酸钠（pH值5.2）溶液混合。混合物的颜色变成黄色后进行后续实验;
4）溶胶要完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数;
5）加洗脱液前，可适当延长室温晾干时间;
6）70℃预热洗脱液，可提高回收率，加洗脱液时注意加到膜中央，延长室温静置时间。
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