牛胰腺脱氧核糖核酸酶I DNase I核酸内切酶|Deoxyribonuclease I from bovine pancreas

发表于2024年3月12日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸酶，属核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca²⁺，并可被二价金属离子如Co²⁺，Mn²⁺，Zn²⁺等激活。5 mM Ca²⁺可保护酶使其不被水解。在Mg²⁺存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn²⁺存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
本品来自牛胰腺，分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以粉末形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

产品性质

CAS号（CAS NO.）	9003-98-9
分子量（Molecular Weight）	~31 kDa
孔尼茨单位（Kunitz Units）	≥2000Kunitz Units/mg protein
类型（Type）	Type IV
最佳PH（Optimal pH）	7～8
外观（Appearance）	白色至浅黄色粉末
纯度（Purity）	Protein: ≥80% by Biuret
激活剂（Activators）	多种二价金属离子如Mg²⁺、Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺, and Zn²⁺
抑制剂（Inhibitors）	β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白
活力单位定义（Unit Definition）	25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA₂₆₀增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

运输和保存方法

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl₂，0.1 mM PMSF，50%甘油。

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl₂。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

HB210721

产品描述

产品性质

CAS号（CAS NO.）	9003-98-9
分子量（Molecular Weight）	~31 kDa
孔尼茨单位（Kunitz Units）	≥2000Kunitz Units/mg protein
类型（Type）	Type IV
最佳PH（Optimal pH）	7～8
外观（Appearance）	白色至浅黄色粉末
纯度（Purity）	Protein: ≥80% by Biuret
激活剂（Activators）	多种二价金属离子如Mg²⁺、Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺, and Zn²⁺
抑制剂（Inhibitors）	β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白
活力单位定义（Unit Definition）	25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA₂₆₀增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

运输和保存方法

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl₂，0.1 mM PMSF，50%甘油。

DNase Ⅰ失活或抑制

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl₂。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

HB210721

Q：10607ES 和 10608ES 的区别？

A：10607 以含氯化钙的冻干粉形式供应；10608 以粉末形式供应。两者用途一样，用于清除蛋白中的 DNA。

Q: 我想问一下这个Kunitz跟u如何换算呢？那如果说反应体系中需要加入150U，那我该怎么换算呀?

A: Kunitz Units和U是不同的单位，不能直接换算，它的酶活就是Kunitz Units不是U，是孔尼茨单位，不能换算的。

如果是要要加入150U是没法计算的，但如果是要150 Kunitz Units，可以根据每个批次的COA上的测试的酶活情况计算。比如，某批次酶活是2500Kunitz Units/mg，那就是加入150/2500=0.06mg。

[1] Wang Z, Gong X, Li J, et al. Oxygen-Delivering Polyfluorocarbon Nanovehicles Improve Tumor Oxygenation and Potentiate Photodynamic-Mediated Antitumor Immunity. ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(IF:15.881)
[2] Huang Y, Chen Y, Zhou S, et al. Dual-mechanism based CTLs infiltration enhancement initiated by Nano-sapper potentiates immunotherapy against immune-excluded tumors. Nat Commun. 2020;11(1):622. Published 2020 Jan 30. doi:10.1038/s41467-020-14425-7(IF:12.121)
[3] Wang Y, Gong X, Li J, et al. M2 macrophage microvesicle-inspired nanovehicles improve accessibility to cancer cells and cancer stem cells in tumors. J Nanobiotechnology. 2021;19(1):397. Published 2021 Nov 27. doi:10.1186/s12951-021-01143-5(IF:10.435)
[4] Liu J, Shen Z, Tang J, et al. Extracellular DNA released by glycine-auxotrophic Staphylococcus epidermidis small colony variant facilitates catheter-related infections. Commun Biol. 2021;4(1):904. Published 2021 Jul 22. doi:10.1038/s42003-021-02423-4(IF:6.268)

FuniCut™ KpnI限制性内切酶,KpnI内切酶,快速内切酶KpnI

发表于2024年3月8日由上海金畔生物科技有限公司

FuniCut™ KpnI限制性内切酶,KpnI内切酶,快速内切酶KpnI

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

酶切位点

5'-GGTAC↓C-3'

3'-C↑CATGG-5'

产品简介

FuniCut® 系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA 等。FuniCut® 系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

产品信息

货号	15015ES70
规格	200 T
识别位置	5'-GGTAC↓C-3' 3'-C↑CATGG-5'
推荐反应条件	1×FuniCut® 缓冲液；最适37℃孵育
酶活	100 U/μL
失活条件	80℃孵育20 min
常用搜索字词	KpnI、Kpn I、Kpn i、Kpn1、Kpn 1、KpnⅠ、Kpn Ⅰ、Kpn

组分信息

组分编号	组分名称	15015ES70
15015-A	FuniCut® KpnI	200 μL
15015-B	10×FuniCut® Buffer	2×1 mL
15015-C	10×FuniCut® Color Buffer*	2×1 mL

*10×FuniCut® Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。FuniCut® Color Buffer的红色染料与2500 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10 bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

注意事项

1.3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3.本产品仅作科研用途。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL (~1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut® KpnI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FuniCut® Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3) 37℃孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA）。

4) 80℃孵育20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

5) 如果使用FuniCut® Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可直接上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3. 质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）*
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
FuniCut® KpnI	1 μL	2 μL	5 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

*如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

4. 不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
2	0	0	1	1	1	1	8

5. 甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	无影响	无影响	无影响	无影响

6. 不同反应缓冲液中的活性*

反应缓冲液

FuniCut® Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

*活性数据来自金畔生物限制酶标准反应体系下的检测。

Ver.CN20230828

酶切位点

5'-GGTAC↓C-3'

3'-C↑CATGG-5'

产品简介

产品信息

货号	15015ES70
规格	200 T
识别位置	5'-GGTAC↓C-3' 3'-C↑CATGG-5'
推荐反应条件	1×FuniCut® 缓冲液；最适37℃孵育
酶活	100 U/μL
失活条件	80℃孵育20 min
常用搜索字词	KpnI、Kpn I、Kpn i、Kpn1、Kpn 1、KpnⅠ、Kpn Ⅰ、Kpn

组分信息

组分编号	组分名称	15015ES70
15015-A	FuniCut® KpnI	200 μL
15015-B	10×FuniCut® Buffer	2×1 mL
15015-C	10×FuniCut® Color Buffer*	2×1 mL

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

注意事项

1.3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3.本产品仅作科研用途。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL (~1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut® KpnI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3) 37℃孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR产物），或30~60 min（基因组DNA）。

4) 80℃孵育20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

5) 如果使用FuniCut® Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可直接上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

1) 每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2) 所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3) 如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3. 质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）*
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
FuniCut® KpnI	1 μL	2 μL	5 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

*如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

4. 不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
2	0	0	1	1	1	1	8

5. 甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	无影响	无影响	无影响	无影响

6. 不同反应缓冲液中的活性*

反应缓冲液

FuniCut® Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

*活性数据来自金畔生物限制酶标准反应体系下的检测。

Ver.CN20230828

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FastCut™ BglII快速限制性内切酶,BglII内切酶,快速内切酶BglII

发表于2024年3月8日由上海金畔生物科技有限公司

FastCut™ BglII快速限制性内切酶,BglII内切酶,快速内切酶BglII

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

酶切点位

5'-A↓GATCT-3'

3'-TCTAG↑A-5'

产品描述

FuniCut™系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut™系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

keywords: Bgl II、Bgl I I、Bgl ii、Bgl11、Bgl 11、BglⅠⅠ、Bgl ⅠⅠ、Bgl

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
15049-A	FuniCut™ BglII	100 μL
15049-B	10×FuniCut™ Buffer	1 mL
15049-C	10×FuniCut™ Color Buffer	1 mL

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。

识别位置

5'-A↓GATCT-3'

3'-TCTAG↑A-5'

推荐反应条件

1× FuniCut™ 缓冲液；

37°C孵育。

失活条件

80°C孵育20 min。

注意事项

1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；

2）受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切受阻；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

4）本产品仅作科研用途！

质量控制

1. 功能活性检测：最适反应温度下，在20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

2. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。

3. 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

4. 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

5. 蓝白斑检测：将含有单一lacZα基因的载体以1 μL酶消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于FuniCut™系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL（~1 μg）	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut™ BglII	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FuniCut ^TMBuffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3）37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）。

4）80°C温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3）如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3.质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
FuniCut™ BglII	1 μL	2 μL	5 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

【注】：如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
6	0	0	0	0	0	1	11

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

序列可能重叠

剪切受阻

不同反应缓冲液中的活性

反应缓冲液

FuniCut™

Buffer

Thermo Scientific

FuniDigest Buffer

NEB

CutSmart^® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

50%

【注】：活性数据来自金畔生物限制酶标准反应体系下的检测。

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产品名称	货号	规格
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HB220620

酶切点位

5'-A↓GATCT-3'

3'-TCTAG↑A-5'

产品描述

keywords: Bgl II、Bgl I I、Bgl ii、Bgl11、Bgl 11、BglⅠⅠ、Bgl ⅠⅠ、Bgl

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
15049-A	FuniCut™ BglII	100 μL
15049-B	10×FuniCut™ Buffer	1 mL
15049-C	10×FuniCut™ Color Buffer	1 mL

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。

识别位置

5'-A↓GATCT-3'

3'-TCTAG↑A-5'

推荐反应条件

1× FuniCut™ 缓冲液；

37°C孵育。

失活条件

80°C孵育20 min。

注意事项

1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；

2）受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切受阻；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

4）本产品仅作科研用途！

质量控制

1. 功能活性检测：最适反应温度下，在20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

4. 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL（~1 μg）	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut™ BglII	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3）37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）。

4）80°C温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3）如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3.质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
FuniCut™ BglII	1 μL	2 μL	5 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

【注】：如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
6	0	0	0	0	0	1	11

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

序列可能重叠

剪切受阻

不同反应缓冲液中的活性

反应缓冲液

FuniCut™

Buffer

Thermo Scientific

FuniDigest Buffer

NEB

CutSmart^® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

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【注】：活性数据来自金畔生物限制酶标准反应体系下的检测。

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2×Hieff Canace^® Gold 高保真酶预混液	10149ES03	1 mL
Hieff Clone^® 多片段一步法快速克隆试剂盒	10912ES10	10 T
Hieff Clone^® Universal One Step Cloning Kit 通用型一步法快速克隆试剂盒	10922ES20	20 T
Hieff MutTM 定点突变试剂盒	11003ES10	10 T

HB220620

FastCut™ BglII快速限制性内切酶,BglII内切酶,快速内切酶BglII

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FastCut™ BstBI快速限制性内切酶,BstBI内切酶,快速内切酶BstBI

发表于2024年3月8日由上海金畔生物科技有限公司

FastCut™ BstBI快速限制性内切酶,BstBI内切酶,快速内切酶BstBI

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

识别位置

5'-TT↓CGAA-3'

3'-AAGC↑TT-5'

产品描述

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
15050-A	FuniCut™ BstBI	100 μL
15050-B	10×FuniCut™ Buffer	1 mL
15050-C	10×FuniCut™ Color Buffer	1 mL

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。

识别位置

5'-TT↓CGAA-3'

3'-AAGC↑TT-5'

推荐反应条件

1× FuniCut™ 缓冲液；

37°C孵育。

失活条件

80°C孵育20 min。

注意事项

1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；

2）受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切阻断；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

4）本产品仅作科研用途！

质量控制

1. 功能活性检测：最适反应温度下，在20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λ DNA。

2. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λ DNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。

4. 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL（~1 μg）	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut™ BstBI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3）37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）。

4）80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3）如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3.质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
FuniCut™ BstBI	1 μL	2 μL	5 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

【注】：如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
7	0	0	0	0	0	0	1

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

序列完全重叠

剪切阻断

无影响

不同反应缓冲液中的活性

反应缓冲液

FuniCut™

Buffer

Thermo Scientific

FuniDigest Buffer

NEB

CutSmart^® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

【注】：活性数据来自金畔生物限制酶标准反应体系下的检测。

同裂酶

AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI

【注】：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

keywords: BstBI、BstB I、BstB i、BstB1、BstB 1、BstBⅠ、BstB Ⅰ、BstB

相关产品

产品名称	货号	规格
Top10化学感受态细胞	11801ES80	10×100 μL
DH5α化学感受态细胞	11802ES80	10×100 μL
Hieff Canace^® Gold 高保真DNA聚合酶	10148ES60	100 U
2×Hieff Canace^® Gold 高保真酶预混液	10149ES03	1 mL
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Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit 通用型一步法快速克隆试剂盒	10922ES20	20 T
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产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
15050-A	FuniCut™ BstBI	100 μL
15050-B	10×FuniCut™ Buffer	1 mL
15050-C	10×FuniCut™ Color Buffer	1 mL

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。

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5'-TT↓CGAA-3'

3'-AAGC↑TT-5'

推荐反应条件

1× FuniCut™ 缓冲液；

37°C孵育。

失活条件

80°C孵育20 min。

注意事项

1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；

2）受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切阻断；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

4）本产品仅作科研用途！

质量控制

1. 功能活性检测：最适反应温度下，在20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λ DNA。

2. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λ DNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。

4. 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：

组分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH₂O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL（~1 μg）	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut™ BstBI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3）37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）。

4）80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3）如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

3.质粒的扩大反应体系

组分	体积（20 μL）	体积（20 μL）	体积（50 μL）
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
FuniCut™ BstBI	1 μL	2 μL	5 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

【注】：如果总反应体系大于20 μL，可使用水浴、金属浴或沙浴，并增加孵育时间。

不同DNA中的识别位点数

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
7	0	0	0	0	0	0	1

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Dam

Dcm

CpG

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无影响

序列完全重叠

剪切阻断

无影响

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Buffer

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100%

【注】：活性数据来自金畔生物限制酶标准反应体系下的检测。

同裂酶

AsuII, Bpu14I, Bsp119I, BspT104I, NspV, SfuI

【注】：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

keywords: BstBI、BstB I、BstB i、BstB1、BstB 1、BstBⅠ、BstB Ⅰ、BstB

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