无血清培养基使用方法

经历了天然培养基、合成培养基后,无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本,简化分离纯化步骤,避免病毒污染造成的危害。

    无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所 配制的*培养基可以满足大部分细胞培养的要求,但对有些实验却不适合,如观察一种生长因子对某种细胞的作用,这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血 清中可能含有各种生长因子;又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质的能力;或者要大规模的培养某种细胞,以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清 培养基一直是生物科学工作者努力的目标。

无血清培养基的基本配方

基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时,多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长;而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时,由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白,细胞往往以悬浮形式生长。

添加组分包括以下几大类物质:

(1)促贴壁物质:许多细胞必须贴壁才能生长,这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子,一般为细胞外基质,如纤连蛋白、层粘连蛋白 等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细 胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。

(2)促生长因子及激素:针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质,有些激素是许多细胞*的,如胰岛素。

(3)酶抑制剂:培养贴壁生长的细胞,需要用胰酶消化传代,在无血清培养基中*须含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到保护细胞的目的。zui常用的是大豆胰酶;抑制剂。

(4)结合蛋白和转运蛋白:常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大,可增加培养基的粘度,保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。

(5)微量元素:硒是zui常见的。

使用方法

目前,血清仍是动物细胞培养中zui基本的的添加物,尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛以 后,再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养。在降低 过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细 胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培养于含血清的培养基中,以保证细胞的特性不发生 变化。

为了使细胞适应无血清培养,关键的是使所培养细胞:
●处于对数生长中期
●>90% 活细胞率
●适应时以较高的起始细胞接种

有两种方法使细胞适应无血清培养基:

1. 直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。
一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应,接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到 1×106~3×106细胞/ml时,传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时,细胞*适应了无血清培养基。 每隔3~5天,当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

2. 连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中,与直接适应相比较,连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
●以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基:25%SFM 混合培养基中,传代培养。
●当细胞密度>5×105细胞/ml时,以2×105到3×105细胞/ml细胞密度,在有血清培养基:SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。
●以2×106到3×106细胞/ml细胞密度,25%有血清培养基和75% SFM中传代培养。
●当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml(接种后4到6天),在100%SFM培养基中传代培养。
●每隔3到5天,当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
建议备份前一次混合培养的培养物,直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。

  在适应过程中,不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意,与有血清培养基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白质,因而更易于受外界因 素的影响。细胞培养适应替代血清:许多细胞利用连续适应方法能很好的适应,用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基1∶1(v∶v)的混合培养基 培养细胞。通过下列的混合培养基的方式,连续几代减少当前培养基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100%替代培养基。每次适应改变血清比例时,传代细胞 2到3次。培养可以直接从FBS转换到替代血清。一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清,生长的延迟可能会发生,4允许进行2到3次的传代,使生 长率恢复到以前的水平。特别需要强调的是:配制无血清培养液必须使用高质量的水,如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。因为无血清培养基 缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子,既便水中的有毒物质含量甚微,也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。

无血清培养基的优点
 
●增加确定性
●性能更加一致
●容易进行纯化和下游加工
●细胞功能的评估
●增强生长和/或产量
●生理反应性的较好对照
●增强细胞内中介物的检测

上海金畔生物科技有限公司

尼龙毛柱使用方法

上海金畔生物科技有限公司尼龙毛/尼龙毛专业代理

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尼龙毛柱​操作方法

 

 1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃容器或注射器内,填料的体积控制在15毫升左右。因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率,所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。

   2. 加入大量的PBS平衡柱子后,用铝箔包裹,并置于适当的容器内,高压灭菌15分钟。

(商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略,经过PBS平衡后可以直接进行下列步骤。)

 3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内,顶部以铝箔覆盖,避免污染。

 4. 注射器下端,橡皮管,弹簧夹用*消毒。打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。

 5.首先,加入3-4倍柱体的无血培养基平衡,之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡(上述培养基都要预热),zui后等培养基液面接近柱填料液面时,关闭弹簧夹。

 6. 样本细胞悬浮液浓度控制在约5×108cells/ml,上样量一般是1/3-1/5柱体积。样品加入之后,再加入少量培养液,然后关闭弹簧夹。

 7.覆盖铝箔,垂直固定,置于消毒过的容器中,于培养箱内37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。

 8. 从培养箱中拿出柱子,置于超净台内,除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管,加入适当体积经37℃预热的培养基,打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min,流出约5ml之后,流出的培养液基变得不透明,此时其中含有T细胞,收集这一部分培养基。

 9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度,实际上,收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集,因为即使收集更多的量,回收率几乎不会增加。

 10.上述操作后,细胞的

 回收率为: 15~20 %

    T细胞含量: 85~95 %

 B细胞污染率: 1 5 %

 多数细胞被确定为T细胞。

       (注)收集粘附于尼龙毛上的细胞时,将T细胞收集完毕后的尼龙毛再无菌操作的状态下取出,转移到适当的容器中,用镊子小心的将尼龙毛松开,粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射器芯插入注射器内,通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。

 

尼龙毛柱是免疫学中一种用于分离T细胞的分离柱。忧郁在研究体内及体外的免疫系统时,分离淋巴细胞群是一个关键步骤。而市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清,所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力,从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。该方法不像流式和磁珠费用昂贵,而且操作简便,所需要的条件也不高,是一种非常实用的方法。

订货信息: 全部现货   75折*

 

21759-1 Nylon Wool Fiber, Sterile   3400 1 pkg polysiences
18369-50 Nylon Wool Fiber   3145 50g polysiences
18369-10 Nylon Wool Fiber   1054 10g polysiences

 

Sigma去糖基化试剂盒 使用心得


Sigma去糖基化试剂盒

Sigma-Aldrich 的天然蛋白去糖基化试剂盒(Native Protein Deglycosylation Kit,货号NDEGLY)可在天然条件下去除糖蛋白上的N连接寡糖。糖基化蛋白修饰通常位于折叠蛋白中不容易接近的位置,因此在未变性的情况下,不大可 能通过标准的肽N- 糖苷酶 F(PNGase F)处理来去除。如果您的下游分析需要折叠蛋白(如酶学分析或蛋白相互作用分析),那么这个试剂盒也许适合您。

此试剂盒包含了内糖苷酶F1、F2和F3,以及相应的反应缓冲液。与PNGase F相比,这些内糖苷酶对蛋白构象没那么敏感,更适合在蛋白未变性的情况下去除各种N连接寡糖。这三种内糖苷酶有着不同的连接特异性。F1能够去除低聚甘露 糖和混合寡糖结构,而F2和F3则分别能去除两个分支和三个分支的结构。

此试剂盒在去糖基化上的效果如何呢?美国西北大学的博士生A. Caulfield介绍了他的使用心得。

据Caulfield介绍,他们想要确定目的蛋白在去糖基化之后的生物学活性。糖基化的 去除可通过Western blot来评估,即蛋白条带的分子量减少。他们的目的蛋白包含N连接糖基化。此蛋白在HEK 293细胞中产生,并利用其N端的FLAG标签来纯化。之前他们试过PNGase,但无法让目的蛋白去糖基化。

在这一实验中,他们将2 ug目的蛋白与0.02个单位的内糖苷酶F1、F2或F3及其相应的缓冲液混合,在37°C孵育4小时。之后通过标准的SDS-PAGE和Western blot来评估去糖基化的程度。

正如他们预计的那样,蛋白被去糖基化,且各个样品之间的结果相当一致。有趣的是,内糖苷酶F1对他们的蛋白起作用,而F2和F3则*没效果。Caulfield认为,了解哪种酶能使蛋白去糖基化,将带来一些有关寡糖链性质的信息。

Caulfield认为这一试剂盒简单易用,适用于所有研究蛋白糖基化的研究人员。当然,随着蛋白底物不同,反应条件可能也需要调整。

Sigma-Aldrich提供了多种去糖基化试剂盒,包括GlycoProfile I In-Gel Deglycosylation Kit、GlycoProfile II Enzymatic In-Solution Deglycosylation Kit、GlycoProfile IV Chemical Deglycosylation Kit等,适用于溶液或PAGE胶中的糖蛋白,与下游多个分析(如质谱分析或功能研究)兼容。

dbiosys Montage Opus365使用方法

dbiosys Montage Opus365使用方法

Antigen Retrieval System
Operator Manual

dbiosys AR365操作流程:
开始运行
1.将电源线插入墙上的插座,确保电源供应
220V–240V交流50Hz/60Hz。这是我们的默认电源
3.确保橡胶密封垫和压力调节器清洁干净
准确定位
2.可能需要一个升压变压器或转换器来转换
来自本地电压和频率220V–240V AC 50Hz/60Hz

Diagnostic BioSystems

开始工作
将500-600ml去离子水添加到可拆卸的加热室中
2.将24个滑架放入抗原回收罐内
可拆卸加热室(4个滑轨/AR罐可安装
容纳)
1.将所需的抗原提取液添加到抗原提取液中
储罐(约200-250ml)
3.将盖子放在仪器上,顺时针转动,直至其锁定
将盖安装到位(锁销应卡入位)
8.数字显示屏将显示第一个循环的运行时间
抗原提取系统
4.确保压力调节器旋钮关闭
5.选择所需循环(使用循环按钮最多5个循环)
温度时间周期
抗原提取系统
6.按下启动按钮以设置温度和正时
温度时间周期
抗原提取系统
7.设置每个循环所需的温度和正时
温度时间周期
抗原提取系统
9.按开始按钮开始跑步
温度时间周期
抗原提取系统
10.等待运行完成
抗原提取系统
完成跑步
1.运行完成后,警报将发出嘟嘟声
2.如果需要在运行中间停止循环,请按下停止按钮。
停止
温度时间周期
抗原提取系统
开始
3.关闭蒙太奇作品的电源™ 365
4.从腔室中取出载玻片并冷却20分钟
在室温下加载到加热室之前的分钟
12.等待5分钟释放压力,或等待20分钟释放压力
在打开盖子之前,应自行释放压力
11.运行完成后,关闭电源

genaxxon P2284.7005使用方法

 

genaxxon P2284.7005使用方法

MHC-I and MHC-II epitope peptides – PADRE peptide

Product Cat#    Package                                                     size  

PADRE  peptide (>70% – HPLC 214nm)                 P2284.7005       5mg

PADRE peptide (>95% – HPLC 214nm)                     P2284.9501        1mg

PADRE peptide (>95% – HPLC 214nm)                     P2284.9505         5mg

Sequence AKFVAAWTLKAAA Ala-Lys-Phe-Val-Ala-Ala-Trp-Thr-Leu-Lys-Ala-Ala-Ala Synonym Padre CAS-No. na MW /

Formula 1347.6 g/mol / C65H102N16O15

说明:

mhc-i限制性肽表位

mhc-i糖蛋白是专为识别感染细胞和肿瘤细胞而设计的。

t细胞表位是由hc分子在抗原呈递细胞表面呈现的。T细胞表位由

mhcⅠ类分子是长度在8-11个氨基酸之间的典型肽,具有mhc特异性序列模体。

这些抗原肽是从非结构蛋白和结构蛋白中通过胞浆内的蛋白质分解而得。然后将肽-MHC-I复合物运输到抗原呈递细胞的细胞表面,并通过CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别。这种相互作用诱导ctls的分化。活化的ctl溶解受感染的细胞,分泌细胞因子,并增殖。其中,padre已成功地用于开发阿尔茨海默病疫苗。结果表明,padre-amyloid-_1-15表位疫苗免疫balb/c小鼠可诱导高滴度的抗amyloid-_抗体。

这一机制确保可以检测到被病毒、细胞内细菌或癌细胞感染的细胞,因为病原体或肿瘤特异性mhc肽复合物显示在细胞表面。ctl可以识别并清除这些异常细胞。

mhc i和ii分子的基因具有多态性。每个mhc等位基因都有一个*的肽结合基序,该基序有利于特定序列位置的氨基酸锚定残基。

包装改造储存

肽是以冻干的无色粉末形式提供的,不含任何添加剂。可在环境温度下运输,并应在-20°C下储存。

padre肽可在水(1 mg/ml储备溶液)或水/甲醇(1:1)(1 mg/ml储备溶液)中重组。通过使用涡流混合器、均相器或超声波仪,可以制备出均相溶液。如果你使用超声波浴,注意小瓶标签。重组后,溶液应校准并储存在-20℃或以下。应避免反复解冻和冷冻。

处理

注意,没有*测试。任何多肽产品的安全处理都应采用良好的实验室技术。如果您没有经过充分的培训或不知道所涉及的危险,不要使用这种化合物!注意:不要内服!避免所有接触方式。穿戴适当的实验室服装,包括实验室外套、手套、面罩和安全眼镜。不要用嘴吸管、吸入、吞食或接触开放性伤口。*清洗身体与产品接触的任何部位。在与任何注射装置一起操作时,应格外小心,以避免意外的自体接种。

本产品仅供合格人员研究之用。它不打算用于人类或作为诊断剂。Genaxon Bioscience GmbH不对因误用或处理本产品而造成的任何损害负责。

 

Related Products Cat # Description

P2275 Ova (257-264) – SIINFEKL – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2276 Influenza A NP (366-374) – ASNENMETM – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2277 Influenza A matrix protein (58-66) – GILGFVFTL – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2278 HIV-1 p17 Gag (77-85) – SLYNTVATL – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2279 HCV-NS5b – ALYDVVSKL – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2280 LCMV GP (33-41) – KAVYNFATM – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2281 Melan-A / MART-1 (26-35) – EAAGIGILTV – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2282 MAGE-3 antigen (271-279) – FLWGPRALV – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2283 Ova (323-339) ISQAVHAAHAEINEAGR – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2284 PADRE – Peptid AKFVAAWTLKAAA – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2285 EBV EBNA-3A peptide RPPIFIRRL (HLA-B*0702) – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2295 EBV BMLF-1 Peptid GLCTLVAML (HLA-A*0201) – available with a guaranteed purity of >70% or >95%.

P2296 CMV pp65 Peptid NLVPMVATV (HLA-A*0201) – available with a guaranteed purity of >95%.

P2301 EBNA-1 Protein (562-570) – FMVFLQTHI – available with a guaranteed purity of >95%.

 

 

Molzym UMD试管使用方法

 

Molzym UMD试管使用方法

液体样本的采集、储存和运输说明

交付的样本储存容器UMD管设计用于储存0.4 mL至2.0 mL新鲜采集的临床样本。可使用UMD试管储存的液体样本包括EDTA或柠檬酸盐稳定的全血、支气管肺泡灌洗(BAL)、腹水  液体,  脑脊髓的  液体  (CSF),  胸膜的  液体,  和  滑膜的  液体。  以下  UMD试管含有甘油,作为保护细胞免受冷冻破裂的一种手段。

由于检测方法的普遍性和灵敏度,采样是细菌和真菌感染因子下游分子分析的关键步骤。该区域皮肤表面灭菌的国家指南  的穿刺应仔细遵循,以防止皮肤微生物序列扩增产生假阳性信号。

 

储存和稳定性

UMD-试管(不含样品)为  稳定  at  房间  温度  (+18  to  +25°C)  持续36个月。

立即将灌装样本的UMD-管储存在-70至-80 ℃下。灌装管稳定  长达6个月。

 

材料:

  • 无菌注射器
  • 对于血液采样:市售无菌采血管,含抗凝剂(未提供,例如K-EDTA S-Monovette series,Sarstedt,Germany)。
  • 层流工作站。在开始从细胞和DNA中去污之前,进行灭菌和UV辐照。工作期间必须关闭UV。遵循制造商的说明。
  • 1x涡旋仪。
  • 耗材:精密移液器和无菌移液器吸头(1000µl),用于移取液体样本至UMD试管中;一次性实验服、手套、袖套、Bouffant盖;塑料废物容器和废液(血液)。

 

说明:

  • 对穿刺区域的皮肤表面进行灭菌。
  • 用无菌注射器或无菌商业采集系统采集液体样品。
  • 使用含抗凝剂的采血管采集血样。颠倒采血管数次,混匀。不能使用凝结的血液。
  • 在无菌条件下将样本直接转移至UMD试管中,或将注射器或采集管运输至实验室进行立即处理。
  • 在无菌条件下(在层流工作站下操作),用移液管吸取0.4 mL至2.0 mL液体样品至UMD试管中;仅使用经过灭菌的消耗品和手套,以防止污染。

请勿使UMD管过载,多只能使用2.0 mL!

  • 全速涡旋UMD试管10-15秒。将样本与甘油混合直至均质化非常重要。
  • 记录试管上显示的样品ID或用自己的样品ID标记试管
  • 立即将灌装后的UMD试管置于-70 °C至-80 °C条件下储存长达6个月。
  • 将样本置于干冰上,在适当的聚苯乙烯箱中运输至UMD试管中。请每天使用5 kg干冰运输。

Abraxis544100使用方法

 

 

Abraxis544100使用方法

 

 

  • 通用描述AbraMag DNA大小选择磁珠设计用于从剪切的DNA或类似样本中纯化出所需大小的DNA片段,用于下游应用,如 作为排序。碎片被可逆地结合在顺磁性粒子上,而剩余的引物、盐、酶和在反应中留下的游离核苷酸被冲走。这些珠子是为使用而设计的。 有磁选机架。
  • 当使用核酸时,安全指南总是使用适当的防护设备(包括但不限于手套、实验室外套和安全玻璃)。 。有关进一步信息,请参阅安全数据表。
  • 储存和稳定在交货时,存放在4°C,不要冻结磁珠溶液。不要在打印的过期日期后使用。
  • Abramag DNA大小选择磁珠法使用一种简单、、基于磁性珠的方法从混合反应中纯化DNA片段,如下所示 gure

 

 

 

Figure 1. Schematic of the AbraMag® DNA Size Selection Magnetic Beads process.

 

  • a.混合:将混合样品添加到已清洗的AbraMag磁珠中。

b.结合:在经过优化的缓冲器存在的情况下,具有理想大小的DNA片段与珠子结合。磁铁是用来 守住珠子。

.c.洗涤:底漆和/或其他不想要的试剂分两步洗掉

  • 洗脱:然后将碎片洗脱并转移到一个新的管中。

.E.Downstr EAM应用:纯的,高质量的分离DNA片段可用于下游程序,如克隆和测序。

 

 

 

限制和预防措施样品表现的时候,在分子生物学级水或Tris/TE溶液之前,尺寸选择。如果需要一个简单的pcr清理(>100 bp),而不是大小se(>100 bp)。 使用Abramag聚合酶链反应清洁磁珠(PN 555030(5 ML),555035(60 ML),555040(450 ML)。

 

工作指令

 

A.提供的材料AbraMag DNA大小选择磁珠溶液

 

B.所需的额外材料和设备(不包括在产品中)

 

1.剪切DNA或其他样本

 

2.实验室级水

 

3.新制备的70%乙醇

 

4.分子级TE缓冲液pH 8.0(10 mm Tris,1mm EDTA pH 8.0)

 

5.一次性手套和其他防护设备

 

6.带一次性塑料过滤屏障的微型吸管

 

7.1.5mL无菌无核酸微离心管

 

8.4°C制冷机

 

9.磁性微离心管分离器,Solo(PN 472270),Multi-6(Pn 472260),微滴板侧拉(Pn 472235)或底拉(Pn 472236)或类似设备

 

10. Vortexer

 

C.为所需尺寸选择珠比

 

通过改变Abramag DNA大小选择磁珠与起始样品体积的比值,可以控制有利于50~400 bp的DNA片段的截留。图2 下面是凝胶电泳分析的大小选择根据增加的比率。例如,检查表1的比率。

 

 

 

图2.DNA梯状电泳的2%琼脂糖凝胶电泳显示珠液与样品比对片段大小排除的影响。100伏25分钟。

 

 

表1.示例珠比和由此产生的大小选择使用50公分的起始样本。

 

D.程序

 

将样品转移到1.5mL微离心管中进行纯化。用实验室级水将样品稀释至少50升.注意:要使用更大容量的开始样本,只需乘以 按预期比率计算(第6.C节)。例:100升样品x1.5=使用第6.D.2节中150升的珠子溶液。注:可以节省少量的起始产品用于凝胶分析。见第7.B节。

 

用~1秒脉冲旋转AbraMag DNA大小选择磁珠。确保解决方案*重新暂停。检查第6.C节以确定使用烟草的珠子溶液的数量 将珠子添加到所需的比例并添加到样品中。吸管上下混合。建议尝试与所需大小选择接近的比率范围,以便选择 模仿片段大小选择。

 

将样品/珠子混合物在室温下孵育5分钟。

 

将样品放在磁选机上,直到溶液清澈(~1分钟)。将管子留在分离器上,吸走并丢弃上清液,而不干扰有盖特的珠子。 对着磁铁。5.将管子放在分离器上,轻轻地加入200升新鲜配制的70%乙醇,而不将珠子从管子的侧面移开。坐30秒。吸出 把上清液扔掉。

 

6.重复步骤5进行第二次清洗。小心去除所有可吸入乙醇。

 

7.将管子从磁选机上取出,在室温下离开约3分钟,打开盖子,*蒸发任何残留的乙醇。

 

8.在样品中加入40升TE缓冲液、pH8.0或实验室级水。吸管上下混合。室温下孵育2-3分钟。将管子送回磁选机1米 降落伞。将试管留在分离器上,用吸管将洗脱液转移到新的微离心管中。洗脱液中含有大小选定的DNA片段。

 

7分析结果

 

A.产品回收可以使用带插层染料的荧光计、凝胶电泳分析和/或分光度计来确定。

 

确定凝胶电泳法可用于评价大小选择的效果,并可用于检查比例的优化。使用琼脂糖或凝胶,运行洗脱样本。 在科收回

 

D.8与分子量阶梯相比较,确保选择了所需的片段大小。

AbraMag ®磁珠超顺磁性,非聚集的铁氧化物颗粒(或“微球”),用于样品制备,或用于捕获/纯化(SPRI ™:固相可逆固定)靶例如蛋白质,抗体, DNA / RNA(直接,或通过ChIP,RIP或CLIP),外泌体和大肠杆菌。AbraMag的设计可在手动和自动生物医学和研究应用中实现更快的结合动力学,高灵敏度和选择性。

 

比主要竞争对手更高的产量,纯度,质量和价值。

 

● 多重优势 – 超过传统方法(色谱柱,离心)。

● 的性能 – 我们设计它们以匹配或超越竞争对手。

● 的容量和产量 – 高结合能力,可快速有效地进行目标纯化。

● 的纯度 – 稳定的预先封闭的颗粒即使是复杂的样品也能提供清洁的净化。

● 可定制 – 提供定制珠子和连接服务。

 

磁选机

反-E。大肠杆菌磁珠(IMS)

即用型磁珠,25 mg / ml(2.5%)

具有游离胺或羧基的磁性颗粒,可使用简单的步骤(提供)与您的抗体或其他配体偶联。

胺 – PN 544080(2 ml),PN 544081(5 ml)

羧基 – PN 544085(2 ml),PN 544086(5 ml)。

Protein A / Protein G Magnetic Beads,5 mg / ml

Protein A Magnetic Beads – PN 544030(2 ml),PN 544031(5 ml)

蛋白A磁珠纯化试剂盒 – PN 555000(20个样品)

蛋白G磁珠 – PN 544040(2 ml),PN 544041(5 ml)

蛋白G磁珠纯化试剂盒 – PN 555010(20个样品)

抗IgG磁珠,5 mg / ml

抗小鼠IgG磁珠 – PN 544020(4 ml),PN 544021(20 ml)

抗兔IgG磁珠 – PN 544010(4 ml), PN 544011(20 ml)

抗人IgG磁珠 – PN 544060(4 ml),PN 544061(20 ml)

Streptavidin / Biotin Magnetic Beads,5 mg / ml

Streptavidin Magnetic Beads – PN 544050(2 ml),PN 544051(5 ml)

生物素磁珠 – PN 544000(2 ml),PN 544001(5 ml)

 

DNA / RNA纯化磁珠

新 DNA尺寸选择/ PCR纯化磁珠

AbraMag ® DNA尺寸选择和PCR纯化磁珠被设计成净化所需大小的DNA片段。

●为了替代AMPure ® XP / SPRIselect ®和血清弹匣 ™ Speedbeads ™的性能相当,但更好的价值(参见比较数据)。

●去除污染物:引物,引物二聚体,dNTP,盐等。

●尺寸截止范围> 50至> 800 bp(尺寸选择)或> 100bp(PCR纯化)

●处理时间短:无离心或过滤

●管或微孔板格式

●适合手动或自动过程

DNA大小选择Magnetic Beads PN 544100(5 ml),544103(60 ml),544106(450 ml)

PCR Clean-Up Magnetic Beads PN 555030(5 ml),555035( 60 ml),555040(450 ml)

DNA纯化磁珠,12毫克/毫升

AbraMag ® DNA纯化磁珠结合在高容量DNA(基因组,质粒等)。将它们插入您当前的磁珠DNA纯化方案中,以获得更高的产量,纯度和价值。珠子的表现始终优于竞争对手的珠子(参见比较数据)。

PN 544090(1ml)

基因组DNA纯化试剂盒,磁珠

的AbraMag ®基因组DNA磁性纯化试剂盒被设计为从不同的生物样品纯化的基因组DNA,得到DNA的高收率和低RNA,蛋白质,核酸酶,和其它细胞污染物。

PN 555020(100个样本)

mRNA纯化磁珠,为5mg / ml的

AbraMag ® mRNA纯化磁珠加上寡(dT)25,在高容量结合多聚腺苷酸化的mRNA和mRNA的洗脱基本上不含核糖体RNA。将珠子插入您当前的磁珠mRNA纯化方案中,以获得更高的产量,纯度和价值。

PN 544075(2ml)

mRNA纯化试剂盒,磁珠

的AbraMag ® mRNA的磁性纯化试剂盒被设计为从总RNA纯化的mRNA,使多聚腺苷酸化的信使RNA的高产量,同时留下核糖体RNA(rRNA基因)和其他RNA后面。

PN 555025(10个样本)

 

 

 

 

 

 

Abraxis中国代理, Abraxis上海代理, Abraxis北京代理,Abraxis广东代理, Abraxis江苏代理Abraxis湖北代理,Abraxis天津代理, Abraxis黑龙江代理, Abraxis内蒙古代理, Abraxis吉林代理, Abraxis福建代理,  Abraxis江苏代理, Abraxis浙江代理,  Abraxis四川代理,Abraxis代理,Abraxis湖南代理

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

4:富有竞争良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等知药企。

6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发,欢迎合作。

 

逆转录酶(AMV)使用说明

反转录酶(reverse transcriptase,也可写成逆转录酶) 又称为依赖RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中发现了一种特殊的DNA 聚合酶,该酶以RNA 为模板,以dNTP 为底物,tRNA( 主要是色氨酸tRNA) 为引物,在tRNA 3'-OH 末端上,根据碱基配对的原则,按5'-3'方向合成一条与RNA 模板互补的DNA 单链,这条DNA 单链叫做互补DNA (complementary DNA,CDNA)。

反转录酶(Reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。

AMV是一种逆转录酶的名称。amv逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒,其方法由houts等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为157kd的αβ全。amv逆转录酶经高度纯化,*无核酸酶污染。amv逆转录酶可用于cdna合成,也可用于rnadna的双脱氧测序。amv逆转录酶以总rnd或polya+rnd为模板,具有以rna为模板的dna聚合酶活性,dna为模板的dna聚合酶活性和rnaseh酶活性,

AMV逆转录酶

适反应温度在42-55℃,高可达60℃,如果使用焦磷酸钠,适温度为37-41℃。rtt反应缓冲液根据不同用途可以作为5x或10x反应液使用,同时可抑制rnaseh酶活性。按照标准使用方法可以得到长至10-12kbcdna。rt007amv逆转录酶比普通amv逆转录酶和mmlv逆转录酶能耐受更高的温度和合成更长的cdna。

 

基本资料

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反应温度:42-60℃产物长度:10-12kb

来源:禽畜源,全酶

反应效率:5u/reaction

rnaseh活性:弱,被抑制

特点

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1.高灵敏度2、高得率

3.高达60℃的反应温度可有效打开rna二级结构

4.可合成长至10-12kb的cdna

5.rt反应液可适用不同用途

 

逆转录酶(AMV)使用方法

solarbio逆转录酶

货号:RT1060
规格:200U/500U/1000U
保存:-20℃保存,避免反复冻融,保质期为2年。
产品内容

 

产品简介:
逆转录酶(AMV)从AvianMyeloblastosisVirus分离出来,经过高度纯化,不含核酸酶。可用于合成一链cDNA、制作cDNA探针、RNA转录、测序和RNA的逆转录反应。

逆转录酶(AMV)一个活性单位U定义为:在37℃,10min条件下,使1nmol的脱氧核糖核酸掺入酸性沉淀物质所需的酶量。

使用说明:
合成一链cDNA的步骤
以下试剂客户自己提供
dNTPs(10mM)

引物(OligodT(18)或随机引物或特异性引物

无核酸酶双蒸水
RNA模板
RNase抑制剂

RT反应(20μl体系):
1.使用前每个组份轻轻混匀,然后2000rpm离心20s;
2.取灭过菌且无核酸酶的0.2mlPCR管,依次加入

2~5μgRNAXμl
引物*1μl

引物*:OligodT18(10μM)或随机引物(50ng/μl)或特异性引物(2μM)】
dNTPs(10mM)1μl
补加无核酸酶的双蒸水至总体积15.5μl

3. 65度保温 5min 然后冰浴5min;

4.往步骤3的pcr管中依次加入下列组份

RNase 抑制剂(40u/ul)    0.5ul

10*AMV reaction buffer   2ul

DTT  (200mm)  1ul

逆转录酶(AMV)     1UL

5.轻轻混匀后,然后2000rpm离心20s

6. 现在42度保温1hr ,然后70度保温15min,

7.上述产物可立即进行下一步的pcr反应或-20度保存。

 

 

AMV 逆转录酶

英文名称: AMV Reverse Transcriptase 总访问: 213
国产/进口: 进口 半年访问: 125
产地/品牌: 美国 Life Sciences Advanced Technologie 产品类别: 其他生物试剂
规       格: 50,000 U
货       号: AMV 007

 

LifeSci AMV 逆转录酶
一、公司介绍
Life Sciences Advanced Technologies 成立于1975年,是世界上一家生产AMV反转录酶的厂商。LSAT的AMV反转录酶因为其高灵敏度和有竞争力的价格体系,已经被许多世界有名的测序公司用于他们的反转录试剂盒产品。
Life Sciences Advanced Technologies在分子诊断试剂和酶类的开发研究上处于世界*地位。
Life Sciences Advanced Technologies决心在两个方面帮助人类疾病的诊断:提供应用基因测序诊断慢性复杂疾病的反转录试剂盒里的AMV反转录酶和传染病现场诊断的NASBA试剂盒。
 
二、产品推荐
1. RTHSA34
产品描述:
作为CDNA文库构建试剂盒的配套产品用于基因测序,浓度为35,000 U/ml。该款反转录酶已经被位居世界前三的的一家测序公司用于他们的反转录试剂盒,可实现17.5 U / cDNA逆转录和低于1 ng的RNA序列转录。
产品优势:
•仅需要0.5ul的酶对于每个cDNA文库试剂盒,有效控制反应体系,用于后续的扩增等
每个cDNA文库试剂盒只需要17.5U, 相对于其他使用200单位的逆转录酶,可以节省50%以上的成本。
• amv 效率是Invitrogen superscriptase (一款MMLV 反转录酶)的11倍,是NEB和Promega 同款AMV的4倍。
2.AMV 007
产品描述:
主要应用于RT-PCR反应的AMV反转录酶,已广泛应用于许多生物技术实验室,浓度是20,000 U/ml。终端用户使用2.5 U 就能完成一个RT-PCR反应。
产品优势:
•用2.5U就能完成一个反应,有些中国用户,将其20000单位/ml的产品稀释到5000 U /ml,这样客户使用0.5 ul 就能完成一个RT-PCR反应。
•一个RT – pcr反应只需要2.5 U,相比NEB和Promega 的AMV RT,可以节省75%的成本。
3. BRT121
产品描述:
作为一种低无机磷酸盐的反转录酶,适用于进行下游克隆过程中的CDNA合成,因为一般情况下较高的无机磷酸盐浓度对磷酸转移反应有抑制作用。常用的可选浓度为5,000 Units/mL。

Matriks Biotek S-ATT使用说明书


MatriksBiotek®是一家生物技术公司,从事生物技术研究,开发产品并提供范围的产品,帮助人们过上更好的生活。

Matriks Biotek S-ATT使用说明书

SHIKARI®S-ATT

 

酶免疫测定法用于定量测定血清和血浆中曲妥珠单抗(Herceptin®,Herclon®)的抗体。

 

Matriks Biotek抗体曲妥珠单抗(Herceptin®,Herclon®)酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒用于定性测定血清和血浆中曲妥珠单抗(Herceptin®,Herclon®)的抗体。

 

 

 

 

所需体积(μl) 20
总时间(分钟) 140
样品 血清,血浆
样品编号 96
检出限(ng / mL) 30
加标回收率(%) 85-115之间
保质期(年) 1

lifescienceproduction使用T-STORE方法

lifescienceproduction使用T-STORE方法

组织样本的采购

T-STORE®的使用无需进一步稀释。还有其他抗生素制剂,包括两性霉素和氯霉素、两性霉素和纳米霉素。作为制造商,我们还可以根据客户规格为T-STORE®提供定制添加剂。产品介绍见下表2。

切除后,组织样本应立即*浸入T-STORE中。T-STORE®所需的容量应由用户确定,因为样品和下游应用的大小可能会影响需求。作为进一步优化的起点,我们建议在T-STORE®中*浸没,使用无菌防漏容器,无顶部空间。建议使用过量的T-STORE®与组织重量/大小比,以确保成功

存储

使用T-STORE®在环境温度下储存电池

储存前,细胞系应在推荐的条件下培养。

1.分离生长活跃的贴壁细胞或直接收获悬浮细胞,计算细胞数量和存活率。

2.在室温下,将颗粒细胞置于180 x g条件下5分钟,并丢弃上清液。将颗粒重新悬浮在3 mL T-STORE®中,并像之前一样重新添加颗粒。丢弃上清液。

3.将细胞颗粒重新悬浮在2mL T-STORE中,并转移至2mL冷冻管(或等效物)。

4.试管在室温下可在黑暗中储存72小时。坚固的细胞类型可储存96小时。

5.为了恢复细胞,在转移到包含完整生长培养基的适当容器中之前,轻轻地重新悬浮细胞(恢复前无需移除T-STORE®)。培养细胞

在最佳条件下(例如,在37℃下加湿5%CO2培养箱)。

6.细胞应在48小时内*恢复。

 

 

lifescienceproduction的一些优质细胞培养产品包括:

  •  

    • 胎牛血清

    • 人AB血清

    • 细胞培养基和试剂