考马斯亮蓝R250 三苯甲烷染料|Coomassie Brilliant Blue R250
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产品描述
考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1 µg蛋白。R250染色后需要褪色，才能进行蛋白条带的观察。
考马斯亮蓝G250的检测灵敏度虽然较低，但也可替代R250，使用一种快速而简单的方法进行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0时，溶液无色；pH 7.0时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化，溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分子周围具有更偏中性的pH环境。合适条件下，当把胶放在酸化的G250溶液中染色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限是0.5 µg。虽然灵敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色节省高达11 h。
产品性质
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中文别名（Chinese synonym） |
考马斯亮兰R250；酸性蓝83；酸性艳蓝6B；亮蓝R； |
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英文别名（English synonym） |
Brilliant Blue R; Brilliant Indocyanine 6B; C.I. number 42660; Acid Blue 83; |
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CAS号（CAS NO.） |
6104-59-2 |
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分子式（Formula） |
C45H44N3NaO7S2 |
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分子量（Molecular weight） |
825.97 |
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外观（Appearance） |
暗红色至深暗红或暗色粉末 |
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溶解性（Solubility） |
溶于热水（1 mg/mL），乙醇和甲醇 |
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结构式（Structure） |
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运输与保存方法
室温运输和保存即可。
使用方法
1.标准染色步骤（考马斯亮蓝R250）
1） 蛋白电泳凝胶置于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平摇床上低速摇动30 min~过夜。
2）去除固定液，更换0.25%考马斯亮蓝R250染色液（0.25% R250溶于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）完全覆盖住胶，染色2-4 h。直至胶染成均匀的蓝色。
注意：当胶在染色液内肉眼不可见时，说明染色完成，否则与深色的染色液对比，凝胶区域看起来颜色偏浅。
3）将胶重新放置在5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脱色4-24 h。约1-2 h后蛋白条带即可看到，直至背景变透明后脱色才结束。中间可更换2-4次脱色液。
注意：此方法可检测到的蛋白量最低达到0.1 µg蛋白/条带。
4）将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。
2.快速染色步骤（考马斯亮蓝R250）
1）蛋白电泳凝胶在25% IPA，10%醋酸的水溶液中固定30-60 min。
2）将胶放置在10%醋酸的水溶液中进行染色，含有60 µg/mL的考马斯亮蓝R250。约30 min后条带显示，让胶继续染色直至达到理想的蛋白条带。在此染色方法中胶的背景染色比较浅，由于使用胶的浓度很低。
3）将胶重新放在10%醋酸溶液中脱色2 h或更长。期间可更换2-4次脱色液。
4）将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。
注意事项
1）0.25%考马斯亮蓝R250染色液配置的过程中，需要先用甲醇溶解R250粉末后，再加入醋酸和水，一般情况下不需要滤纸除杂。溶液可在4℃存放6个月，若长时间保存出现沉淀，可用滤纸过滤得到澄清液体。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
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考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1 µg蛋白。R250染色后需要褪色，才能进行蛋白条带的观察。
考马斯亮蓝G250的检测灵敏度虽然较低，但也可替代R250，使用一种快速而简单的方法进行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0时，溶液无色；pH 7.0时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化，溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分子周围具有更偏中性的pH环境。合适条件下，当把胶放在酸化的G250溶液中染色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限是0.5 µg。虽然灵敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色节省高达11 h。
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CAS号（CAS NO.） |
6104-59-2 |
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分子式（Formula） |
C45H44N3NaO7S2 |
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分子量（Molecular weight） |
825.97 |
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外观（Appearance） |
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运输与保存方法
室温运输和保存即可。
使用方法
1.标准染色步骤（考马斯亮蓝R250）
1） 蛋白电泳凝胶置于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平摇床上低速摇动30 min~过夜。
2）去除固定液，更换0.25%考马斯亮蓝R250染色液（0.25% R250溶于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）完全覆盖住胶，染色2-4 h。直至胶染成均匀的蓝色。
注意：当胶在染色液内肉眼不可见时，说明染色完成，否则与深色的染色液对比，凝胶区域看起来颜色偏浅。
3）将胶重新放置在5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脱色4-24 h。约1-2 h后蛋白条带即可看到，直至背景变透明后脱色才结束。中间可更换2-4次脱色液。
注意：此方法可检测到的蛋白量最低达到0.1 µg蛋白/条带。
4）将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。
2.快速染色步骤（考马斯亮蓝R250）
1）蛋白电泳凝胶在25% IPA，10%醋酸的水溶液中固定30-60 min。
2）将胶放置在10%醋酸的水溶液中进行染色，含有60 µg/mL的考马斯亮蓝R250。约30 min后条带显示，让胶继续染色直至达到理想的蛋白条带。在此染色方法中胶的背景染色比较浅，由于使用胶的浓度很低。
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Q：该产品是粉末状，可以用水溶解吗？
A：不能，可以用热水。但是我们一般用少量甲醇溶解。
Q：该产品可以在室温储存吗？
A：一般存放在 4℃。
Q：若保存过程出现沉淀，还能继续使用吗？
A：可以的。可用滤纸过滤得到澄清液体。
Q：G250 与 R250 什么区别？
A：G250 灵敏度低，检测下限是 0.5 µg，但是检测快，显色清楚，且不需要褪色处理； R250 灵敏度高，检测下限 0.1 µg 蛋白，但是检测相对慢，需要褪色处理。
[1] Hu Q, Jia L, Zhang X, Zhu A, Wang S, Xie X. Accurate construction of cell membrane biomimetic graphene nanodecoys via purposeful surface engineering to improve screening efficiency of active components of traditional Chinese medicine. Acta Pharm Sin B. 2022;12(1):394-405. doi:10.1016/j.apsb.2021.05.021(IF:11.614)