快速反转录试剂盒(一链DNA合成)|1st Strand cDNA Synthesis Kit
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COA
已发表文献
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)是基于Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)开发的快速反转录试剂盒，适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验。与Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)相比，具有稳定的检出率、特异性、产量保证，且反转录总时长最快可低于6分钟，大大缩短了实验时间。
该试剂盒包含gDNA Digester Mix，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为反转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
|
11150ES10（10 T） |
11150ES60（100 T） |
||
|
11150-A |
4× Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) |
50 μL |
500 μL |
|
11150-B |
5×gDNA Digester Mix |
20 μL |
200 μL |
|
11150-C |
Random Primers (50 μM) |
20 μL |
200 μL |
|
11150-D |
Oligo d(T)18 Primers (50 μM) |
20 μL |
200 μL |
|
11150-E |
RNase-free Water |
200 μL |
1 mL* 2 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。反转录产物可立即用于后续反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若实验需要去除残留基因组DNA
1. gDNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
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组分 |
使用量 |
|
RNase-free H2O |
To 10 μL |
|
5× gDNA Digester Mix |
2 μL |
|
Total RNA |
10 pg -5 μg* |
|
or mRNA |
10 pg-500 ng* |
2. 反转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
|
上一步的反应液 |
10 μL |
|
4×Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) |
5 μL |
|
Oligo d(T)18 Primers（50 μM) |
2 μL |
|
or Random Primers (* for qPCR)（50μM） |
or 2 μL |
|
RNase-free Water |
To 20 μL |
【注】：1）引物投入量可根据模板投入量调整，如果反转录产物用于qPCR实验，可在体系中按推荐量添加Random Primers。
2）建议先加入4× Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) 混匀后再加入反转录引物，以保证引物不受gDNA Digester影响。
3）体系配制完成后，请用移液器轻轻吹打混匀。
3. 反转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
55℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 s |
二、若实验无需去除基因组DNA
1. 反转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
|
4×Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) |
5 μL |
|
Oligo d(T)18 Primers（50 μM) |
2 μL |
|
or Random Primers (* for qPCR) （50μM） |
or 2 μL |
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Total RNA |
10 pg -5 μg |
|
or mRNA |
10 pg – 500 ng |
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RNase-free Water |
To 20 μL |
2. 反转录程序设置
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温度 |
时间 |
|
55℃ |
5 min |
|
85℃ |
5 s |
【注】：1.建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg Total RNA。
2.引物投入量可根据模板投入量调整，如果反转录产物用于qPCR扩增实验，需在体系中添加Random Primers。
3.对于高GC含量模板或者复杂模板，可将反转录温度提高到60℃。
4.本产品可合成14 kb以下的cDNA序列，如需得到更长的cDNA产物，可适当延长反转录时间。
注意事项
1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
HB23022
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)是基于Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)开发的快速反转录试剂盒，适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验。与Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye)相比，具有稳定的检出率、特异性、产量保证，且反转录总时长最快可低于6分钟，大大缩短了实验时间。
该试剂盒包含gDNA Digester Mix，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为反转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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11150ES10（10 T） |
11150ES60（100 T） |
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11150-A |
4× Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) |
50 μL |
500 μL |
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11150-B |
5×gDNA Digester Mix |
20 μL |
200 μL |
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11150-C |
Random Primers (50 μM) |
20 μL |
200 μL |
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11150-D |
Oligo d(T)18 Primers (50 μM) |
20 μL |
200 μL |
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11150-E |
RNase-free Water |
200 μL |
1 mL* 2 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。反转录产物可立即用于后续反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若实验需要去除残留基因组DNA
1. gDNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
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组分 |
使用量 |
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RNase-free H2O |
To 10 μL |
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5× gDNA Digester Mix |
2 μL |
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Total RNA |
10 pg -5 μg* |
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or mRNA |
10 pg-500 ng* |
2. 反转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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上一步的反应液 |
10 μL |
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4×Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) |
5 μL |
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Oligo d(T)18 Primers（50 μM) |
2 μL |
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or Random Primers (* for qPCR)（50μM） |
or 2 μL |
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RNase-free Water |
To 20 μL |
【注】：1）引物投入量可根据模板投入量调整，如果反转录产物用于qPCR实验，可在体系中按推荐量添加Random Primers。
2）建议先加入4× Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) 混匀后再加入反转录引物，以保证引物不受gDNA Digester影响。
3）体系配制完成后，请用移液器轻轻吹打混匀。
3. 反转录程序设置
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温度 |
时间 |
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55℃ |
5 min |
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85℃ |
5 s |
二、若实验无需去除基因组DNA
1. 反转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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4×Hifair®AdvanceFast SuperMix (No Dye) |
5 μL |
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Oligo d(T)18 Primers（50 μM) |
2 μL |
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or Random Primers (* for qPCR) （50μM） |
or 2 μL |
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Total RNA |
10 pg -5 μg |
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or mRNA |
10 pg – 500 ng |
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RNase-free Water |
To 20 μL |
2. 反转录程序设置
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温度 |
时间 |
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55℃ |
5 min |
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85℃ |
5 s |
【注】：1.建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg Total RNA。
2.引物投入量可根据模板投入量调整，如果反转录产物用于qPCR扩增实验，需在体系中添加Random Primers。
3.对于高GC含量模板或者复杂模板，可将反转录温度提高到60℃。
4.本产品可合成14 kb以下的cDNA序列，如需得到更长的cDNA产物，可适当延长反转录时间。
注意事项
1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
HB23022
暂无内容
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