CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品信息

产品名称	产品编号	规格
CDX2 Mouse mAb	31521JP50	50 μL
CDX2 Mouse mAb	31521JP60	100 μL

产品简介

Involved in the transcriptional regulation of multiple genes expressed in the intestinal epithelium. Important in broad range of functions from early differentiation to maintenance of the intestinal epithelial lining of both the small and large intestine.

产品性质

别名	CDX2; Homeobox protein CDX-2;
SwissProt ID	Q99626
基因ID	1045
免疫原	Purified recombinant human CDX2 protein fragments expressed in E.coli.
缓冲液	Liquid in PBS containing 50% glycerol, 0.5% BSA and 0.02% sodium azide, pH 7.3.
分子量	Calculated MW: 34 kDa; Observed MW: 34 kDa;
克隆类型	Monoclonal Antibody
亚型	IgG2b
克隆号	4B9
宿主	Mouse
物种反应	Human, Mouse
推荐应用	WB, ICC/IF, IP
纯化方式	Affinity Purified

应用

稀释比 WB:1/500-1/1000; IF:1/50-1/200; IP:1/20

储存条件

-25~-15℃保存

注意事项

1. 避免反复冻融。

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

产品数据

Western blot

CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

Immunocytochemistry

CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

Immunoprecipitation

CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

Ver.CN20240229

产品信息

产品名称	产品编号	规格
CDX2 Mouse mAb	31521JP50	50 μL
CDX2 Mouse mAb	31521JP60	100 μL

产品简介

产品性质

别名	CDX2; Homeobox protein CDX-2;
SwissProt ID	Q99626
基因ID	1045
免疫原	Purified recombinant human CDX2 protein fragments expressed in E.coli.
缓冲液	Liquid in PBS containing 50% glycerol, 0.5% BSA and 0.02% sodium azide, pH 7.3.
分子量	Calculated MW: 34 kDa; Observed MW: 34 kDa;
克隆类型	Monoclonal Antibody
亚型	IgG2b
克隆号	4B9
宿主	Mouse
物种反应	Human, Mouse
推荐应用	WB, ICC/IF, IP
纯化方式	Affinity Purified

应用

稀释比 WB:1/500-1/1000; IF:1/50-1/200; IP:1/20

储存条件

-25~-15℃保存

注意事项

1. 避免反复冻融。

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

产品数据

Western blot

CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

Immunocytochemistry

CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

Immunoprecipitation

CDX2小鼠单克隆抗体 CDX2 Mouse mAb(小鼠单抗)

Ver.CN20240229

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Hifair® Smearase 高通量测序酶切试剂片段化酶

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

Hifair® Smearase 高通量测序酶切试剂片段化酶

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff ® Smearase 是针对高通量测序平台设计的新一代酶切试剂。本品采用高质量的片段化酶，酶切效果稳定，偏好性低，可有效降低片段化的时间和成本，摆脱了繁琐的超声步骤，让片段化过程变得更加简单高效。

产品组分

组分编号	组分名称	8 T	24 T	96 T
12907	Hieff ® Smearase	80 μL	240 μL	960 μL

运输和保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，有效期 1 年。

注意事项

1. 本试剂盒兼容范围为 1 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量 Input DNA。

2. 若 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA

的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化，EDTA 耐受范围为 0-2 mM。

3. 对于常规的高质量基因组 DNA，酶切时间参考表 1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种 GC 含量的模板。

表 1 常规基因组 DNA 片段化时间推荐表

插入片段主峰大小	片段化时间	优化范围
600 bp	5 min	3-10 min
400 bp	10 min	8-15 min
250 bp	15 min	10-20 min
200 bp	20 min	12-25 min
150 bp	25 min	20-30 min

【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。

4. 参考表 1 片段化时间可将 DNA 酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。

5. 该酶在高温条件下即可失活。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅作科研用途！

使用方法

DNA 片段化（DNA Fragment）

该步骤将基因组 DNA 片段化。

1. 将表 2 中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表 2 反应体系。

表 2 DNA 片段化 PCR 反应体系

名称	体积（μL）
Input DNA	x
Hieff ® Smearase	10
ddH2O	Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述 PCR 管置于 PCR 仪，设置表 3 所示反应程序，进行 DNA 片段化反应。

表 3 DNA 片段化 PCR 反应程序

温度	体积（μL）
热盖 105°C	On
4 °C	1 min*
30 °C	3-30 min**
72 °C	10 min
4 °C	Hold

【注】：*DNA 片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置 4℃，待模块温度降至 4℃时，将 PCR 管放入 PCR 仪即可。

**对于完整的基因组 DNA，酶切时间参考表 1。

5. 产物如需纯化，可使用 Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或 AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。

参考实例

使用 Hieff ® Smearase 对 Human gDNA 样本进行酶切，片段化结果见图 1。

Hifair® Smearase 高通量测序酶切试剂片段化酶

图 1 Hieff ® Smearase 酶切 200 ng Human gDNA 样本（不同酶切时间片段化效果检测）

HB210527

产品组分

组分编号	组分名称	8 T	24 T	96 T
12907	Hieff ® Smearase	80 μL	240 μL	960 μL

运输和保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，有效期 1 年。

注意事项

1. 本试剂盒兼容范围为 1 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量 Input DNA。

2. 若 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA

的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化，EDTA 耐受范围为 0-2 mM。

3. 对于常规的高质量基因组 DNA，酶切时间参考表 1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种 GC 含量的模板。

表 1 常规基因组 DNA 片段化时间推荐表

插入片段主峰大小	片段化时间	优化范围
600 bp	5 min	3-10 min
400 bp	10 min	8-15 min
250 bp	15 min	10-20 min
200 bp	20 min	12-25 min
150 bp	25 min	20-30 min

【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。

4. 参考表 1 片段化时间可将 DNA 酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。

5. 该酶在高温条件下即可失活。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅作科研用途！

使用方法

DNA 片段化（DNA Fragment）

该步骤将基因组 DNA 片段化。

1. 将表 2 中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表 2 反应体系。

表 2 DNA 片段化 PCR 反应体系

名称	体积（μL）
Input DNA	x
Hieff ® Smearase	10
ddH2O	Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述 PCR 管置于 PCR 仪，设置表 3 所示反应程序，进行 DNA 片段化反应。

表 3 DNA 片段化 PCR 反应程序

温度	体积（μL）
热盖 105°C	On
4 °C	1 min*
30 °C	3-30 min**
72 °C	10 min
4 °C	Hold

【注】：*DNA 片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置 4℃，待模块温度降至 4℃时，将 PCR 管放入 PCR 仪即可。

**对于完整的基因组 DNA，酶切时间参考表 1。

5. 产物如需纯化，可使用 Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或 AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。

参考实例

使用 Hieff ® Smearase 对 Human gDNA 样本进行酶切，片段化结果见图 1。

Hifair® Smearase 高通量测序酶切试剂片段化酶

图 1 Hieff ® Smearase 酶切 200 ng Human gDNA 样本（不同酶切时间片段化效果检测）

HB210527

Q：12204ES、12907ES 和 12609ES 区别与联系？

A：12204 为完整的建库试剂盒，包含片段化模块，连接模块，扩增模块。12609 为片段化模块，可同时进行样本的片段化，末端修复/加A流程。12907 为单酶（原料酶），仅用于DNA 片段化。

Q：12907里面的酶是什么酶？能否作用于RNA?产生的片段末端是平末端还是黏性末端？

A：是一些随机内切酶，作用于dsDNA，产生的末端是黏性末端。

Q：产品使用时能否用单酶搭配机械法流程建库试剂盒，如 12907+12199?

A：可以。实际使用时我们建议购买完整试剂盒（Cat#12204）,该试剂盒经过流程的优化可获得优异的建库表现。如果想要购买 12907 搭配其他品牌建库试剂盒，建议片段化之后先进行纯化再接其他品牌建库试剂盒。

Q：酶切模块可否适用 MGI 平台？

A：片段化酶切模块 12907可通用于各类平台

Q：gDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min，竟然切不动？

A：一般优先考虑 DNA 的质量问题，比如 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐离子，可能会影响酶切效果，建议将DNA 稀释在 ddH2O 或不含EDTA 的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中再进行片段化。其次，如果样本是反转录得到的全长cDNA，则需考虑样本纯度问题。另外，对于环状DNA 的酶切，需要另行摸索酶切时间体系。特殊样本可考虑磁珠纯化之后进行酶切或适当延长酶切时间。

Q：酶切时间也不长，竟然过度酶切了?

A：以插入片段 300 bp 为例，白细胞 gDNA，30 度酶切 10min，出现如下图过度酶切现象。建议参考酶切条件需要考虑不同样本gDNA 大小，如白细胞gDNA 较小，应适当缩短酶切时间，否则易出现过度酶切现象。

Q：最低可以切到多小片段？

A：有小片段保护机制，最低可到150bp左右。

[1] Zhang S, Pei Z, Lei C, et al. Detection of cryptic balanced chromosomal rearrangements using high-resolution optical genome mapping [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. J Med Genet. 2022;jmedgenet-2022-108553. doi:10.1136/jmedgenet-2022-108553(IF:6.318)
[2] Ren J, Zhang R, Pan C, et al. Prevalence and genotype-phenotype correlations of GBA-related Parkinson disease in a large Chinese cohort. Eur J Neurol. 2022;29(4):1017-1024. doi:10.1111/ene.15230(IF:6.089)

微量样本DNA提取试剂盒|MolPure® Micro DNA Kit

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

微量样本DNA提取试剂盒|MolPure® Micro DNA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MolPure^® Micro DNA Kit采用MolPure^® DNA Column M3和新型的溶液体系，适用于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中快速地提取基因组DNA。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的乙醇沉淀。操作简便，可在30 min内完成单个样品的DNA提取和纯化工作。试剂盒内的MolPure^® DNA Column M3可选择性吸附核酸，不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质，得到的DNA纯度高，可直接用于PCR、qPCR等实验。

试剂盒组分

类别	编号	组分名称	18780ES50 (50 T)	18780ES70 (200 T)
Part I	18780-A	Proteinase K (20 mg/mL)	1 mL	1 mL× 4
Part I	18780-B	Carrier RNA	200 μL	800 μL
Part II	18780-C	DNA吸附柱M3 (MolPure^® DNA Column M3)	50个	200个
	18780-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3)	50个	200个
	18780-E	裂解液LB (LB Buffer M3)	11 mL	44 mL
	18780-F	结合液BD (BD Buffer M3)	15 mL	60 mL
	18780-G	去蛋白液PL (PL Buffer M3)	25 mL	100 mL
	18780-H	漂洗液W^(Wash Buffer^)	13 mL	50 mL
	18780-I	洗脱液 (Elution Buffer)	10 mL	20 mL

运输与保存方法

Part I组分冰袋运输，-20℃保存。Part II组分常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 结合液BD和去蛋白液PL低温时可能析出，可37℃温浴复溶至溶液澄清，不影响使用效果。

3. 结合液BD和去蛋白液PL中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途！

实验前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，100%无水乙醇，液氮（组织研磨用），1.5 mL离心管等。

2. 所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. 首次使用前，在漂洗液W^*瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入指定体积的无水乙醇。每次使用后盖紧瓶盖，保持瓶中的乙醇含量。

4. Carrier RNA使用方法：如果起始处理量很少，我们推荐使用Carrier RNA，如果预期有较大量核酸产量，用户可以根据需要选择是否加入Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液BD中加入4 μL Carrier RNA储存溶液，将结合液BD与Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可（结合液BD容易起泡沫，请勿使用涡旋振荡混匀）。也可根据样品数量，在总共需要的结合液BD中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

操作方法

一、样本预处理：

1. 血液样本

1）取10-100 μL血液至1.5 mL离心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

【注】：不足100 μL时，需用裂解液LB补足。

2）加入100 µL结合液BD，充分混匀，70℃放置10 min。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在100 μL结合液BD中加入1 μL Carrier RNA储存溶液。

3）冷却后，加50 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

4）室温（15-25℃）放置3 min。

2. 血卡类样本

1）打孔机取2-3个3 mm直径的血卡纸片至1.5 mL离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇10 min。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中10 min，期间每隔3 min涡旋振荡10 sec。

3. 微量组织

1）取微量组织（< 10 mg）至1.5 mL 离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃水浴锅或金属浴中 1 h至溶液变清亮，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）冷却后，加200 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

5）室温（15-25℃）放置5 min。

4. 口香糖

1）取30 mg 口香糖至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇3 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中3 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

5）冷却后，加200 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

6）1,2000 rpm离心5 min，收集上清液。

5. 法医检材

1）烟头：取1 cm² 烟头，切成6块转移至1.5 mL离心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

毛发：剪取靠近毛囊部位0.5-1 cm的毛发，转移至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB、20 µL Proteinase K (20 mg/mL)和20 µL 1 M DTT溶液（自备），立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

5）1,2000 rpm离心5 min，收集上清液。

二、DNA提取：

1. 将DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中，备用。

2. 将上述样本预处理液加入DNA吸附柱M3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

3. 加入500 µL去蛋白液PL，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。

4. 加入600 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室温离心30 sec，弃废液。

【注】：确保漂洗液W^*已添加无水乙醇。

5. 重复一遍步骤4。

6. 将DNA吸附柱M3放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W^*。

7. 将DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL离心管中，在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液，即为DNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

8. DNA溶液可置于-20℃长期保存。

HB220812

试剂盒组分

类别	编号	组分名称	18780ES50 (50 T)	18780ES70 (200 T)
Part I	18780-A	Proteinase K (20 mg/mL)	1 mL	1 mL× 4
Part I	18780-B	Carrier RNA	200 μL	800 μL
Part II	18780-C	DNA吸附柱M3 (MolPure^® DNA Column M3)	50个	200个
	18780-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3)	50个	200个
	18780-E	裂解液LB (LB Buffer M3)	11 mL	44 mL
	18780-F	结合液BD (BD Buffer M3)	15 mL	60 mL
	18780-G	去蛋白液PL (PL Buffer M3)	25 mL	100 mL
	18780-H	漂洗液W^(Wash Buffer^)	13 mL	50 mL
	18780-I	洗脱液 (Elution Buffer)	10 mL	20 mL

运输与保存方法

Part I组分冰袋运输，-20℃保存。Part II组分常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 结合液BD和去蛋白液PL低温时可能析出，可37℃温浴复溶至溶液澄清，不影响使用效果。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途！

实验前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，100%无水乙醇，液氮（组织研磨用），1.5 mL离心管等。

2. 所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

操作方法

一、样本预处理：

1. 血液样本

1）取10-100 μL血液至1.5 mL离心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

【注】：不足100 μL时，需用裂解液LB补足。

2）加入100 µL结合液BD，充分混匀，70℃放置10 min。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在100 μL结合液BD中加入1 μL Carrier RNA储存溶液。

3）冷却后，加50 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

4）室温（15-25℃）放置3 min。

2. 血卡类样本

1）打孔机取2-3个3 mm直径的血卡纸片至1.5 mL离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇10 min。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中10 min，期间每隔3 min涡旋振荡10 sec。

3. 微量组织

1）取微量组织（< 10 mg）至1.5 mL 离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃水浴锅或金属浴中 1 h至溶液变清亮，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）冷却后，加200 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

5）室温（15-25℃）放置5 min。

4. 口香糖

1）取30 mg 口香糖至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇3 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中3 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

5）冷却后，加200 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

6）1,2000 rpm离心5 min，收集上清液。

5. 法医检材

1）烟头：取1 cm² 烟头，切成6块转移至1.5 mL离心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

5）1,2000 rpm离心5 min，收集上清液。

二、DNA提取：

1. 将DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中，备用。

2. 将上述样本预处理液加入DNA吸附柱M3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

3. 加入500 µL去蛋白液PL，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。

4. 加入600 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室温离心30 sec，弃废液。

【注】：确保漂洗液W^*已添加无水乙醇。

5. 重复一遍步骤4。

6. 将DNA吸附柱M3放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W^*。

7. 将DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL离心管中，在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液，即为DNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

8. DNA溶液可置于-20℃长期保存。

HB220812

Q:试剂盒中的蛋白酶 K 没有了，有替代的吗？

A:盒子里的浓度是 20 mg/mL 的蛋白酶 K，客户可以自行购买。

Q:组织必须要用液氮研磨吗？

A:建议使用液氮研磨成细碎粉末后再加入裂解液(LB Buffer)和蛋白酶 K(Proteinase K)匀浆处理。研磨不充分将会降低DNA 产量。

Q：可以提取细菌样本吗？

A:细菌有细胞壁，用这个可能效果不太好，建议用专门用作于细菌提取核酸的 18806 来提。

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LPA线性化丙烯酰胺溶液(5mg/mL) 核酸纯化共沉淀剂|Linear Acrylamide Solution

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

LPA线性化丙烯酰胺溶液(5mg/mL) 核酸纯化共沉淀剂|Linear Acrylamide Solution

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FAQ

COA

已发表文献

产品描述

传统方法常使用单价盐，乙醇/异丙醇沉淀DNA或RNA，但该方法受其浓度的影响，当核酸浓度低于50 ng/mL时，则较难定量，且沉淀后形成的核酸沉淀肉眼难以辨别，影响回收率。而加入线性丙烯酰胺则会改善这些情况，并提高核酸得率。
线性丙烯酰胺，英文名称Linear Acrylamide（Linear Polyacrylamide，简称LPA），是一种共沉淀剂，有助于核酸纯化过程中核酸的沉淀。本质上讲，该丙烯酰胺是一种中性载体，且非生物性来源，因此，不含潜在的核酸或核酸酶污染。此外，本品不会干扰A₂₆₀/A₂₈₀读数、且不会抑制聚合酶以及限制性内切酶活性，因此兼容于其他后续分子生物学应用，如PCR，酶切消化等。
本品为线性丙烯酰胺溶液，浓度为5 mg/mL，无DNase、RNase以及核酸污染。使用时2-4 μL（即10-20 μg）溶液即可用于1 mL DNA或RNA溶液的沉淀。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期3年。

操作步骤

1）添加线性化丙烯酰胺到样本内使其终浓度为10-20 μg/mL，完全混匀；

2）添加一倍体积的异丙醇或者两倍体积的乙醇至样本内（乙醇推荐用于沉淀寡核苷酸）；

3）将样本至于-20℃冰浴10 min，然后于10,000 g以上的转速至少离心10 min；

4）小心去除上清（需注意，线性化丙烯酰胺沉淀不能紧紧粘附在离心管底，去除上清液的过程中小心操作防止去除沉淀），然后重悬沉淀于水，TE缓冲液或其他合适的缓冲液内。

注意事项

1）使用前请回温至室温。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

HB210802

产品描述

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期3年。

操作步骤

1）添加线性化丙烯酰胺到样本内使其终浓度为10-20 μg/mL，完全混匀；

2）添加一倍体积的异丙醇或者两倍体积的乙醇至样本内（乙醇推荐用于沉淀寡核苷酸）；

3）将样本至于-20℃冰浴10 min，然后于10,000 g以上的转速至少离心10 min；

注意事项

1）使用前请回温至室温。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

HB210802

LPA线性化丙烯酰胺溶液(5mg/mL) 核酸纯化共沉淀剂|Linear Acrylamide Solution

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[1] Hao K, Chen Y, Yan X, Zhu X. Cilia locally synthesize proteins to sustain their ultrastructure and functions. Nat Commun. 2021;12(1):6971. Published 2021 Nov 30. doi:10.1038/s41467-021-27298-1(IF:14.919)
[2] Zhang L, Cao N, Wang Y, et al. Improvement of Oxazolone-Induced Ulcerative Colitis in Rats Using Andrographolide. Molecules. 2019;25(1):76. Published 2019 Dec 24. doi:10.3390/molecules25010076(IF:3.060)

新冠RT-LAMP检测预混液新冠检测引物预混液

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

新冠RT-LAMP检测预混液新冠检测引物预混液

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已发表文献

RT-LAMP COVID-19 Primer Master Mix (N)为新冠RT-LAMP检测预混液，可识别 SARS-CoV-2 基因组中的核衣壳蛋白基因（N）区域。本产品可搭配货号Cat#13762，Cat#13810，Cat#13906产品使用。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13995ES60

(100 T)

13995ES80

(1000 T)

13995-A

Primer Master Mix

200 μL

2 mL

【注】：1）16 µM FIP/BIP，2 µM F3/B3，4 µM Loop F/B each。

运输和保存方法

1. 运输方式：干冰运输。

2. 保存方式：

Part 1：13995-A【Primer Master Mix 】 -20℃，避光保存，有效期 1 年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220621

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13995ES60

(100 T)

13995ES80

(1000 T)

13995-A

Primer Master Mix

200 μL

2 mL

【注】：1）16 µM FIP/BIP，2 µM F3/B3，4 µM Loop F/B each。

运输和保存方法

1. 运输方式：干冰运输。

2. 保存方式：

Part 1：13995-A【Primer Master Mix 】 -20℃，避光保存，有效期 1 年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220621

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sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

产品说明书

FAQ

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已发表文献

RNA纯化方案

CRISPR/Cas9是一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，源于细菌和古细菌为应对噬菌体和外源质粒的攻击而演化来的一种获得性免疫防御机制。在现代生物技术研究中，此系统是通过人工优化的具有引导作用的sgRNA(Single Guide RNA)引导核酸酶Cas9蛋白在与sgRNA配对的靶位点处剪切双链DNA，从而引起DNA断裂。由于生物体内非同源末端修复机制或同源重组机制修复DNA，导致基因移码突变、替换或删除，致使基因功能丧失。

Hifair^®Precision sgRNA Synthesis Kit采用T7 RNA聚合酶混合物高效转录spCas9 sgRNA。本试剂盒含有能被Cas9蛋白识别并起支架作用的特异性序列，该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠。退火形成互补链后由DNA聚合酶进行填充。最终生成用于转录的dsDNA模板。本试剂盒利用其提供的试剂和使用者自己设计的特异性DNA序列，单管反应可在4小时内获得20-100μg具有功能的sgRNA。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11355ES25 (25 T)	11355ES50 (50 T)	11355ES60 (100 T)
11355-A	10×sgRNA Enzyme Mix	50 μL	100 μL	200 μL
11355-B	10×sgRNA Reaction Buffer	50 μL	100 μL	200 μL
11355-C	2×Canace Enzyme Mix	312.5 μL	625 μL	1.25 mL
11355-D	Scaffold Template	31.25 μL	62.5 μL	125 μL
11355-E	NTPs（25mM each）	200 μL	400 μL	800 μL
11355-F	Control sgRNA Oligo（10μM）	10 μL	20 μL	40 μL

运输储存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期两年。

注意事项

1. 反应体系中须严格注意不要混入RNase。

2. 实验器材（如：枪头、产品管等）注意严格使用 RNase Free用品。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

合成原理

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

操作流程

1. 上游引物（Target-specific sgRNA oligo）设计

A. 引物的5’端：T7启动子序列加保护碱基（20nt：TTCTAATACGACTCACTATA）

B. 转录起始位点：添加0~2个G，添加G的个数由靶序列的5’端决定，T7启动子至少需要2个G才能有效转录。

（注：若特异靶序列已经存在2个G，则不需要额外添加，额外的G会降低剪切效率。）

C. 特异的sgRNA靶序列（20nt）：靶DNA序列PAM（NGG）的5’端20nt碱基序列。

D. 引物的3’端：Scaffold Template退火序列（14nt：GTTTTAGAGCTAGA）。

示例：

DNA模板：

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

上游引物（Target-specific sgRNA oligo）：

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

2. sgRNA合成

A.sgRNA模板扩增

①按下列体系配制反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
RNase free H₂O	Up to 25	–
Scaffold Template	1.25	–
sgRNA Oligo（10μM）	1.25	0.5μM
2×Canace Enzyme Mix	12.5	1×

注： 1. Scaffold Template已预先与下游引物混合。

2. 使用试剂、容器等无RNase污染。

②PCR反应程序：

循环步骤	温度	时间	循环数
变性	98℃	10s	30
延伸	68℃	10s	30
保持	4℃	∞

③电泳检测：

使用2%琼脂糖胶，取5μL PCR反应液电泳检测条带大小及亮度，用100bp DNA Ladder（货号：10507）标定，其大小为120bp左右单一条带。

B.体外转录sgRNA

①按下列体系室温配制反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
RNase free H₂O	Up to 20	–
10×sgRNA Reaction Buffer	2	1×
NTPs (25 mM each)	8	10 mM each
sgRNA模板（上述A获得）	5	–
10×sgRNA Enzyme Mix	2	1×

注： 1. 低温配置可能引起DNA模板沉淀。

2. 使用试剂、容器等无RNase污染。

②反应程序：

温度	时间
37℃	4h
4℃	∞

注：反应于PCR仪中进行，热盖打开，防止长时间导致反应液蒸发。

③DNA模板消化：

反应完成后，每管加入2μL DNaseⅠ（RNase free），37℃孵育15min以去除模板DNA。

④转录产物纯化：

体外转录产物可选用 RNA Cleaner 磁珠进行纯化（货号：12602），也可以采用酚/氯仿纯化法（具体操作步骤可联系Yeasen索取），以去除蛋白、游离的核苷酸等。

HB200916

RNA纯化方案

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11355ES25 (25 T)	11355ES50 (50 T)	11355ES60 (100 T)
11355-A	10×sgRNA Enzyme Mix	50 μL	100 μL	200 μL
11355-B	10×sgRNA Reaction Buffer	50 μL	100 μL	200 μL
11355-C	2×Canace Enzyme Mix	312.5 μL	625 μL	1.25 mL
11355-D	Scaffold Template	31.25 μL	62.5 μL	125 μL
11355-E	NTPs（25mM each）	200 μL	400 μL	800 μL
11355-F	Control sgRNA Oligo（10μM）	10 μL	20 μL	40 μL

运输储存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期两年。

注意事项

1. 反应体系中须严格注意不要混入RNase。

2. 实验器材（如：枪头、产品管等）注意严格使用 RNase Free用品。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

合成原理

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

操作流程

1. 上游引物（Target-specific sgRNA oligo）设计

A. 引物的5’端：T7启动子序列加保护碱基（20nt：TTCTAATACGACTCACTATA）

B. 转录起始位点：添加0~2个G，添加G的个数由靶序列的5’端决定，T7启动子至少需要2个G才能有效转录。

（注：若特异靶序列已经存在2个G，则不需要额外添加，额外的G会降低剪切效率。）

C. 特异的sgRNA靶序列（20nt）：靶DNA序列PAM（NGG）的5’端20nt碱基序列。

D. 引物的3’端：Scaffold Template退火序列（14nt：GTTTTAGAGCTAGA）。

示例：

DNA模板：

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

上游引物（Target-specific sgRNA oligo）：

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

2. sgRNA合成

A.sgRNA模板扩增

①按下列体系配制反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
RNase free H₂O	Up to 25	–
Scaffold Template	1.25	–
sgRNA Oligo（10μM）	1.25	0.5μM
2×Canace Enzyme Mix	12.5	1×

注： 1. Scaffold Template已预先与下游引物混合。

2. 使用试剂、容器等无RNase污染。

②PCR反应程序：

循环步骤	温度	时间	循环数
变性	98℃	10s	30
延伸	68℃	10s	30
保持	4℃	∞

③电泳检测：

使用2%琼脂糖胶，取5μL PCR反应液电泳检测条带大小及亮度，用100bp DNA Ladder（货号：10507）标定，其大小为120bp左右单一条带。

B.体外转录sgRNA

①按下列体系室温配制反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
RNase free H₂O	Up to 20	–
10×sgRNA Reaction Buffer	2	1×
NTPs (25 mM each)	8	10 mM each
sgRNA模板（上述A获得）	5	–
10×sgRNA Enzyme Mix	2	1×

注： 1. 低温配置可能引起DNA模板沉淀。

2. 使用试剂、容器等无RNase污染。

②反应程序：

温度	时间
37℃	4h
4℃	∞

注：反应于PCR仪中进行，热盖打开，防止长时间导致反应液蒸发。

③DNA模板消化：

反应完成后，每管加入2μL DNaseⅠ（RNase free），37℃孵育15min以去除模板DNA。

④转录产物纯化：

HB200916

Q：sgRNA 的作用是基于什么原理？

A：在 RNA 编辑的过程中引导尿苷残基插入或缺失到动质体（kinetoplastid）中，属于一种小型非编码RNA，可与 pre-mRNA 配对。

Q：试剂盒提供的组分能直接用于合成sgRNA 吗?

A：试剂盒提供的是基于 T7RNA 聚合酶的转录反应体系，含有能被 Cas9 蛋白识别并起支架作用的特异性序列，该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠，退火形成互补链后由DNA 聚合酶进行填充生成用于转录的 dsDNA 模板，使用者需要自己设计的特异性 DNA 序列。

sgRNA合成试剂盒|Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit

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NP40裂解液乙基苯基聚乙二醇|NP-40(Nonidet P 40)

发表于2024年9月1日由上海金畔生物科技有限公司

NP40裂解液乙基苯基聚乙二醇|NP-40(Nonidet P 40)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

NP-40 (Nonidet P 40)，中文名称乙基苯基聚乙二醇，化学式为C15H24O·(C2H4O)n，是一种非离子表面活性剂。

运输和保存方法

室温运输和保存即可。干燥保存。

注意事项

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

产品描述

NP-40 (Nonidet P 40)，中文名称乙基苯基聚乙二醇，化学式为C15H24O·(C2H4O)n，是一种非离子表面活性剂。

运输和保存方法

室温运输和保存即可。干燥保存。

注意事项

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

Q：NP-40 是什么类型的试剂？

A：该产品中文名称乙基苯基聚乙二醇，是一种非离子表面活性剂。

Q：NP-40 运输与保存方法？

A：该产品室温运输和保存即可。干燥保存。

Q：NP-40 有何优点？

A：该产品为非离子去垢剂和表面活性剂，其临界胶束浓度（ Critical Micelle Concentration）低，与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和结构稳定。产品即到即用，无菌过滤，无核酶污染，性能稳定，高纯均一，重复性好，简化操作。

Q：NP-40 通常在什么情况下使用？

A：该产品可用于裂解、融化、蛋白处理、组化处理、杂交洗涤、稳定蛋白质和电泳等实验。尤其用于膜蛋白的非变性条件下的溶解。

Q：该产品注意事项是什么？

A：使用时应避免对母液的污染；溶液摇荡后，会呈现泡沫，静置后，泡沫即消失。

Q：该产品的浓度是多少？

A: NP-40 是纯品，可以理解为100%浓度，使用时按需稀释即可。

[1] Wang S, Hao Q, Li J, et al. Ubiquitin ligase DTX3 empowers mutant p53 to promote ovarian cancer development. Genes Dis. 2020;9(3):705-716. Published 2020 Nov 21. doi:10.1016/j.gendis.2020.11.007(IF:4.803)

双链DNA甲基化建库试剂盒(Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®)

发表于2024年9月1日由上海金畔生物科技有限公司

双链DNA甲基化建库试剂盒(Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®是针对Illumina^®高通量测序平台开发的双链DNA甲基化建库试剂盒。本试剂盒通过连接相应的甲基化接头，经亚硫酸氢盐或酶法转化处理，再经过一步扩增即可构建针对Illumina^®平台测序的甲基化文库。试剂盒所有组分均通过质量控制和功能验证，以确保文库的稳定产出，支持多种类型DNA样本，包括gDNA、cfDNA和FFPE等。本试剂盒推荐的样本起始量为10 ng-1000 ng DNA，并兼容市面主流的转化方案。

组分信息

组分编号	组分名称	12214ES08	12214ES24	12214ES96
12214-A	Endprep Buffer	56 μL	168 μL	672 μL
12214-B	Endprep Enzyme	24 μL	72 μL	288 μL
12214-C	Ligation Enhancer	240 μL	720 μL	3×960 μL
12214-D	Rapid T4 DNA Ligase	80 μL	240 μL	960 μL
12214-E	Methyl Stubby Adapter	40 μL	120 μL	480 μL
12214-F	2 × Canace^® Uracil + PCR Mix 2.0	200 μL	600 μL	2×1200 μL

储存条件

-25~–15℃保存，有效期1年。

使用方法

一、自备材料

纯化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS^® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效产品。
转化模块：Cat#12222，Hieff^® DNA Bisulfite Conversion Kit；Cat#12223，Hieff^® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit和酶转化模块Cat#12213，Hieff^® DNA Mild methyl- Conversion Kit或其他等效产品。
DNA质控：Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效产品。
其他材料：无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer (10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁

力架、PCR仪等。

二、操作流程

双链DNA甲基化建库试剂盒(Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®)

图1 Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®

双链DNA甲基化建库试剂盒(Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®)

图2 文库片段分布示例

注：10 ng cfDNA使用Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®建库后的文库片段分布 (Agilent 2100,DNA 1000 Kit)，其中红色代表酶转化方案构建的DNA文库，PCR扩增循环数为10；蓝色代表重亚硫酸盐转化方案构建的DNA文库，PCR 扩增循环数为 12。

组分信息

组分编号	组分名称	12214ES08	12214ES24	12214ES96
12214-A	Endprep Buffer	56 μL	168 μL	672 μL
12214-B	Endprep Enzyme	24 μL	72 μL	288 μL
12214-C	Ligation Enhancer	240 μL	720 μL	3×960 μL
12214-D	Rapid T4 DNA Ligase	80 μL	240 μL	960 μL
12214-E	Methyl Stubby Adapter	40 μL	120 μL	480 μL
12214-F	2 × Canace^® Uracil + PCR Mix 2.0	200 μL	600 μL	2×1200 μL

储存条件

-25~–15℃保存，有效期1年。

使用方法

一、自备材料

纯化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS^® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效产品。
转化模块：Cat#12222，Hieff^® DNA Bisulfite Conversion Kit；Cat#12223，Hieff^® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit和酶转化模块Cat#12213，Hieff^® DNA Mild methyl- Conversion Kit或其他等效产品。
DNA质控：Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效产品。
其他材料：无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer (10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁

力架、PCR仪等。

二、操作流程

双链DNA甲基化建库试剂盒(Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®)

图1 Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®

双链DNA甲基化建库试剂盒(Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®)

图2 文库片段分布示例

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0.4%台盼蓝染色液 Typan Blue Solution

发表于2024年9月1日由上海金畔生物科技有限公司

0.4%台盼蓝染色液 Typan Blue Solution

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
0.4% Typan Blue Solution 台盼蓝染色液（0.4%）	40207ES20	20mL	73.00
0.4% Typan Blue Solution 台盼蓝染色液（0.4%）	40207ES60	100mL	193.00

产品描述

台盼蓝（Trypan Blue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。

本品为溶于生理盐溶液的0.4%（w/v）台盼蓝染色液，以无菌形式提供，细胞培养级别。

运输和保存方法

室温运输和保存即可，二年有效。

注意事项

1）细胞计数前，需要用生理盐缓冲液或者无血清培养基对细胞进行充分的清洗，因为细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，残留的血清蛋白会导致较暗的染色背景。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

使用方法

1）对于悬浮细胞，离心收集细胞，充分清洗后，用适当缓冲液如PBS，HBSS重悬制成单细胞悬液；对于贴壁细胞，先用胰酶消化细胞，再按照悬浮细胞的方法制备单细胞悬液。

2）取0.5mL单细胞悬液，按照1:1比例与0.5mL 0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3~10min。

【注1】：因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。

【注2】：若细胞密度比较高，可取0.2mL单细胞悬液，经适当缓冲液稀释到0.5mL，之后再用0.5mL0.4%台盼蓝染色液染色。

3）取少量上述染色细胞加入血细胞计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞（即损伤细胞和死细胞）和总细胞。

【注1】：用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其完全覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。

【注2】：1mm²方格内细胞数通常控制在20-50 cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。

4）按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，

a，计算每mL细胞数目：Cells/mL=1mm²大方格内的平均细胞数×稀释倍数×10⁴；【注】：此时的稀释倍数为：步骤2所取的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数

b，总细胞数目：Total cells=（Cells/mL）×最初制备单细胞悬液的总体积

c，细胞活力值：Viability（%）=（总细胞数-总着色细胞数）/总细胞数 ×100

【注】：通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。

相关产品

产品编号	产品名称	规格
40208ES60	Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit 台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒	100 T
40208ES76	Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit 台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒	500 T
40724ES10	Trypan blue 台盼蓝	10 g

HB181204

产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
0.4% Typan Blue Solution 台盼蓝染色液（0.4%）	40207ES20	20mL	73.00
0.4% Typan Blue Solution 台盼蓝染色液（0.4%）	40207ES60	100mL	193.00

产品描述

本品为溶于生理盐溶液的0.4%（w/v）台盼蓝染色液，以无菌形式提供，细胞培养级别。

运输和保存方法

室温运输和保存即可，二年有效。

注意事项

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

使用方法

2）取0.5mL单细胞悬液，按照1:1比例与0.5mL 0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3~10min。

【注1】：因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。

【注2】：若细胞密度比较高，可取0.2mL单细胞悬液，经适当缓冲液稀释到0.5mL，之后再用0.5mL0.4%台盼蓝染色液染色。

3）取少量上述染色细胞加入血细胞计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞（即损伤细胞和死细胞）和总细胞。

【注1】：用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其完全覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。

【注2】：1mm²方格内细胞数通常控制在20-50 cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。

4）按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，

b，总细胞数目：Total cells=（Cells/mL）×最初制备单细胞悬液的总体积

c，细胞活力值：Viability（%）=（总细胞数-总着色细胞数）/总细胞数 ×100

【注】：通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。

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产品编号	产品名称	规格
40208ES60	Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit 台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒	100 T
40208ES76	Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit 台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒	500 T
40724ES10	Trypan blue 台盼蓝	10 g

HB181204

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[1] Guo X, Yuan Z, Xu Y, Wei M, Fang Z, Yuan WE. A fluorinated low-molecular-weight PEI/HIF-1α shRNA polyplex system for hemangioma therapy. Biomater Sci. 2020;8(8):2129-2142. doi:10.1039/d0bm00171f(IF:6.183)
[2] Xu H, Wang X, Wang W. Monomethylarsonous acid: Induction of DNA damage and oxidative stress in mouse natural killer cells at environmentally-relevant concentrations. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2018;832-833:1-6. doi:10.1016/j.mrgentox.2018.05.017(IF:1.996)

Hifair®超逆转录酶Ultra Reverse Transcriptase(200 U/μL)

发表于2024年9月1日由上海金畔生物科技有限公司

Hifair®超逆转录酶Ultra Reverse Transcriptase(200 U/μL)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase是对Hieff^® M-MLV (H^–) Reverse Transcriptase进行基因工程改造的全新逆转录酶，该酶缺乏RNase H活性，合成全长cDNA的能力大幅提升，可扩增长达20 kb的cDNA。Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase的热稳定性显著提高，耐受温度达65℃，可对具有复杂二级结构的RNA模板高效逆转录。与Hieff® M-MLV (H^–) Reverse Transcriptase相比，Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase具有更高的持续合成能力及合成速率，同时增强了耐抑制剂的能力，可有效解决样品中的抑制剂导致逆转录效率低下的问题。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	14604ES84 (2000 U)	14604ES92 (10000 U)	14604ES98 (200000 U)
14604–A	Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL)	10 μL	50 μL	1 mL
14604-B	5×Hifair^®Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer	50 μL	250 μL	5×1 mL

产品应用

全长cDNA文库构建；

终点法PCR；

RT-PCR及实时定量RT-PCR等。

运输与保存方法

干冰运输，-20ºC保存，有效期一年。

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2）所有操作均应在冰上进行，防止发生RNA降解；

3）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5）本产品仅用作科研用途！

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分	使用量
RNase free ddH₂O	to 13 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL
	or 1 μL
	or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应液配制

组分	使用量
上一步的反应液	13 μL
5×Hifair^®Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1 μL
RNase Inhibitor (40 U/µL)	1 μL

3. 逆转录程序设置

温度	时间
25℃	5 min
50℃	15 min
85℃	5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃-60℃；

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

HB221114

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	14604ES84 (2000 U)	14604ES92 (10000 U)	14604ES98 (200000 U)
14604–A	Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL)	10 μL	50 μL	1 mL
14604-B	5×Hifair^®Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer	50 μL	250 μL	5×1 mL

产品应用

全长cDNA文库构建；

终点法PCR；

RT-PCR及实时定量RT-PCR等。

运输与保存方法

干冰运输，-20ºC保存，有效期一年。

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2）所有操作均应在冰上进行，防止发生RNA降解；

3）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本；

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5）本产品仅用作科研用途！

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分	使用量
RNase free ddH₂O	to 13 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL
	or 1 μL
	or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应液配制

组分	使用量
上一步的反应液	13 μL
5×Hifair^®Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1 μL
RNase Inhibitor (40 U/µL)	1 μL

3. 逆转录程序设置

温度	时间
25℃	5 min
50℃	15 min
85℃	5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃-60℃；

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

HB221114

Hifair®超逆转录酶Ultra Reverse Transcriptase(200 U/μL)

暂无内容