molzym S-040-0100说明书
Mastermix 16S Basic，无DNA
用于使用自定义引物进行细菌和真菌DNA的PCR扩增
仅供研究使用
目录号编号S-040-0100 100个反应
目录号编号S-040-0250 250个反应
目录号编号S-040-1000 1000个反应
产品概述
试剂盒/组件
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Mastermix 16S碱性 |
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100 rxn |
250转 |
1000 rxn |
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2.5×预混液（3 mM Mg2 + 终浓度） |
2 × 0.5 mL |
5 × 0.5 mL |
20 × 0.5 mL |
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MolTaq 16S DNA聚合酶（非热启动） |
0.08 ml |
0.2 ml |
4 × 0.2 mL |
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无DNA的PCR级水 |
1.7 ml |
3 × 1.7 mL |
10 × 1.7 mL |
产品描述
Mastermix 16S Basic适用于扩增细菌和真菌DNA。Mastermix 16S Basic是一种2.5x浓缩液，反应混合物的终体积为25µl。产品包含PCR运行所需的所有组分。对于PCR运行，必须加入提供的MolTaq 16S、无DNA水、定制引物和/或探针和模板以获得完整的反应混合物。
稳定性
在适当储存条件下，自生产日期起可稳定储存24个月。如果包装材料在到货时未损坏且试剂未开封，则在外包装盒标签上打印的失效日期前确保试剂和缓冲液的全部性能。
应用程序
PCR扩增法检测和鉴定细菌和真菌
包装、储存和处理
在标准预防措施下完成预混液的纯化及其配制，以避免空气传播和基于操作的DNA污染。预混液以无DNA螺旋盖小瓶中的2.5x浓缩液形式提供。接收后，将试剂盒中的所有小瓶储存在-15 ℃至-25 ℃下。使用时，将预混液和试剂盒的其他组分在冰上解冻，取出等份试样使用后，再次冷冻储存。在打开小瓶和处理预混液期间，注意保持无DNA的环境。仅使用经认证的无细菌DNA移液器吸头和PCR耗材运行检测。定制的引物、探针和稀释水可能含有污染的细菌DNA，将给出假阳性PCR结果。注意仅使用Mastermix 16S Basic的无细菌DNA引物、探针和稀释水。
请联系Molzym，获取有关我们产品和无DNA塑料耗材的其他供应商的更多信息。
质量控制和质量标准
使用无DNA水代替模板DNA的阴性PCR对照用于分析纯化终预混液中细菌DNA的污染。保证使用扩增大小 > 200 bp的通用16S rDNA引物进行长达40个PCR循环，阴性对照中无信号的比率≥97%（前提是避免处理错误导致的污染）。无DNA的预混液定义为不产生细菌DNA特异性信号。在阴性对照运行中，必须证明凝胶电泳分析中不存在条带。使用从金黄色葡萄球菌或其他细菌中提取和纯化的已知量基因组DNA运行阳性对照。或者，使用Molzym的DNA阳性对照（目录号：否。S-200-050）。
PCR方案
注意所有操作均在无DNA的环境（UV辐照工作站）中进行。确保塑料耗材（包括PCR小瓶、移液器吸头、螺旋盖聚丙烯管）与扩增反应混合物结合使用时无污染细菌DNA。按照以下步骤顺序工作：
- 在室温(18-25 ℃)下解冻预混液。涡旋几秒钟以混匀并短暂离心小瓶。4 ℃保存备用。将MolTaq 16S放入另一个冷却架（-15至-25）
℃）。使用后，将组分储存在-15至-25 ℃下。
- 移取xµl提供的无DNA水（体积为25µl）至每个PCR小瓶中。保持小瓶冷却。
- 加入10µl 2.5x预混液
- 加入0.5µl正向引物(10µM)
- 加入0.5µl反向引物(10µM)
- 加入0.8µl MolTaq 16S
- 后加入yµl模板。密封小瓶并保持冷却，直至置于PCR仪中
- 启动特定试验的程序
对于例如10个反应，使用以下移液方案（加入2µl模板DNA）在无DNA螺旋盖或聚丙烯瓶中制备1x预混液：
- 120µl无DNA水
- 100µl 2.5x预混液
- 5µl正向引物(10µM)
- 5µl反向引物(10µM)
- 共8µl MolTaq 16S 238µl
从该1x预混液中移取23µl至每个PCR小瓶中，并加入2µl模板DNA或2µl提供的无DNA水（阴性PCR对照）。使用每个PCR系列，运行由从细菌培养物中提取的DNA标准品（10-100 ng/反应）组成的阳性对照。
PCR热循环条件：
使用检测试剂的特定条件。1x预混液多可使用40个循环。
使用标准凝胶电泳技术或杂交探测分析PCR反应。