BioGrammatics—糖基化毕赤酵母表达体系

Pichia酵母菌属的巴斯德毕赤酵母是当今常用的单细胞真核表达体系，是载体构建、表达、发酵和纯化重组蛋白和肽的优良体系。BioGrammatics在毕赤酵母的生命科学研究利用领域有着悠久的历史和丰富的经验，通过与Research Corporation Technologies（RCT）合作开发出GlycoSwitch®技术，利用该技术可以在毕赤酵母中表达的蛋白加以改性糖基化修饰。糖基化可影响蛋白质折叠，稳定性和蛋白质 – 蛋白质相互作用，因此利用GlycoSwitch®技术可设计具有更多“人类”糖基化特征的蛋白质，用以研发适用于人类的的生物药物，以及改良常规重组蛋白质。目前BioGrammatics可提供的基于毕赤酵母的产品包括快速简单的蛋白质表达、分子表达工具下的菌株设计（如强大的严格调控的启动子，的分泌基因组操作）、大规模高细胞密度酵母发酵（> 700 g / l wcw，200k升）、特定的酵母发酵条件设计、真核蛋白质加工（折叠，分泌，糖基化）及酵母遗传学分析等服务。

SuperMan5 (his—)

Description:

GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)

描述：

GlycoSwitch ®应变，曼5 N-连接的寡糖的结构（组氨酸营养缺陷型）

 

 

SuperMan5（his-），Och1-破坏与pGAP-甘露糖苷酶表达盒，杀稻瘟素抗性）。GS115（his4-），来自里氏木霉的α1,2-甘露糖苷酶，由具有杀稻瘟素抗性基因的质粒上的GAP启动子调节，破坏SuperMan5基因组中的Och1基因。

Catalog Number	Description	Units	Price
PS005-01	Pichia pastoris strain as YPD agar culture stab	1 stab	$400.00
PS005-02	Pichia pastoris strain as electrocompetent cells	5 transformations	$350.00

BioGrammatics公司产品：

一、毕赤酵母表达载体

重组蛋白在毕赤酵母中的表达常见于表达载体整合到毕赤酵母基因组中，基因组整合导致目的基因在毕赤酵母中稳定表达。通过大规模的表达菌株发酵可生产大量的目的蛋白质。基于目的蛋白和基因的自身特异性，在载体设计时需要考虑以下因素：1）胞内表达或者分泌表达；2）适宜的启动子（诱导型，组成型，强，弱）；3）选择标记；4）特定基因/ （开放阅读框）ORF序列；5）表达盒在毕赤酵母基因组中适的位置。

BioGrammatics在毕赤酵母表达载体研究领域拥有丰富的经验，创建并测试了大量的表达载体，以优化数百种基因的表达和用于特定的应用，包括细胞内和细胞外表达，膜蛋白的表达，高水平蛋白质生产以及蛋白质在代谢途径中的表达和支持重组蛋白质产物宜加工程度的蛋白质。

BioGrammatics采用的pJ载体（pJ – vectors, Jeannies vectors)是4-5kb的质粒，带有氨苄青霉素筛选基因和“无缝”克隆方案。克隆方案基于在其识别序列之外切割的IIS型限制酶，因此，可在终表达载体中去除限制酶结合位点，并且可以在不多加入不需要的密码子的情况下加入ORF。

Product	Description
pJAN–s1	extracellular expression vector, S. cerevisiae α mating factor leader, nourseothricin selection
pJAZ–s1	extracellular expression vector, S. cerevisiae α mating factor leader,  zeocin selection
pJAG–s1	extracellular expression vector, S. cerevisiae α mating factor leader,  G418 selection
pJAN	intracellular expression vector, nourseothricin selection
pJAZ	intracellular expression vector, zeocin selection
pJAG	intracellular expression vector, G418 selection

 

二、毕赤酵母表达菌株

BioGrammatics提供BG和GlycoSwitch®菌株两种毕赤酵母表达菌株系列。其中BG菌株来源于野生巴斯德毕赤酵母菌株，初于1940年由加利福尼亚的Herman Phaff分离。我们使用Illumina HiSeq技术对Phaff菌株进行单菌落分离，成为BioGrammatics起始的原始菌株BG08，BG08在经过改良以消除细胞质杀伤质粒的能力产生野生型表达菌株BG10。此后除了BG09之外，BG系列中的所有后续菌株均通过的BG10基因组操作衍生而来。 而BG09是BG08的一个特定变体，已开发用于在特定的胰蛋白酶切割位点标记13C同位素后进行质谱分析。

除BG系列外，BioGrammatics还是RCT的GlycoSwitch®菌株经销商。 GlycoSwitch®菌株系列源于20世纪70年代的巴斯德毕赤酵母GS115菌株，是Phaff菌株的突变分离株之一，选择用于组氨酸营养缺陷型培养。初的GlycoSwitch®Man5菌株来源于比利时根特大学和法兰德斯生物技术研究所（VIB）的Roland Contreras博士，Nico Callewaert博士及其同事的合作分离。 SuperMan5菌株是由BioGrammatics研发的GlycoSwitch®Man5的后续修饰菌株，其突变体och1基因座的所有同源性区域基因已被去除以防止其通过同源重组而逆转为野生型。

Product	Description
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+)	GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures
Pichia pastoris SuperMan5 strain (his—)	GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)
Pichia pastoris BG10 strain	Wild type Pichia pastoris expression strain (killer plasmid free)
Pichia pastoris BG11 strain	Derivative of Pichia pastoris BG10 strain, aox1Δ, MutS (methanol utilization slow)
Pichia pastoris BG09 strain	Derivative of Pichia pastoris BG08 strain, arg4Δ::nourseothricinR, lys2Δ::hygromycinR(arginine, lysine auxotroph)
Pichia pastoris BG12 strain	Derivative of Pichia pastoris BG10 strain, his4Δ (histidine auxotroph)
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+, pep4Δ)	GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (PEP4 protease deletion)

 

 

 

 

三、具有修饰糖基化的毕赤酵母菌株 – GlycoSwitch®技术。

GlycoSwitch系列菌株是与BioGrammatics与Research Corporation Technologies（RCT）合作，提供个可进行糖基化修饰的毕赤酵母表达载体。糖基化可影响蛋白质折叠，稳定性和蛋白质 – 蛋白质相互作用，因可用于设计生成具有更多“人类”糖基化的蛋白质和生物制药，以及改良其他类别的重组蛋白质。其核心GlycoSwitch®菌株具有中心聚糖加工酶（OCH1），可阻止聚糖延伸，并表达外源甘露糖苷酶以将现有聚糖修剪成更均匀的Man5结构。此外，BioGrammatics还可提供基于GlycoSwitch®技术的定制化研发合同服务，使用BioGrammatics公司的丰富的Pichia专业技术为客户提供特定应用的量身定制糖蛋白。

Product	Description
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+)	GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures
Pichia pastoris SuperMan5 strain (his—)	GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph)
GlycoSwitch Expression Vector Kit
pGlycoSwitch®–GnT–I–HIS	Histidine selection vector for expression of GlcNAc transferase I activity in Pichia pastoris
pGlycoSwitch®–ManII/1	G418 selection vector for expression of Mannosidase II activity in Pichia pastoris
pGlycoSwitch®–GnT–II	Hygromycin selection vector for expression of GlcNAc transferase II activity in Pichia pastoris
pGlycoSwitch®–GalT/1	Nourseothricin selection vector for expression of Gal transferase I activity in Pichia pastoris
Pichia pastoris  SuperMan5 strain (HIS+, pep4Δ)	GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (PEP4 protease deletion)
pGlycoSwitch®–GnT–I	Zeocin selection vector for expression of GlcNAc transferase I activity in Pichia pastoris

 

四、毕赤酵母表达系统培养基

该系列产品于毕赤酵母表发体系发酵培养或扩增，包括干粉和浓缩液，用于配制100ml和2.5L的培养液。

货号	类    型	规 格
PD001-100	1 g/ml stock solution, prepares 2.5 liters of YPD-nourseothricin plates	100 mg
PM001-100	pouch of powdered medium, prepares 100 ml	1 pouch
PM001-500	pouch of powdered medium, prepares 500 ml	1 pouch

 

 

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