Receptor Ligand Technologies GmbH代理

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描述: 内皮细胞生长因子（ECGF）是一种从牛大脑中提取出来的，含有能够促进哺乳动物血管内皮细胞生长的因子。 也有报道称ECGF对用于单克隆抗体生产的杂交瘤细胞的融合和生长有一定的辅助作用。制备内皮细胞生长因子的方法是根据Maciag等的方法（1979）修改过的，是从含有氯化钠和硫酸链霉素的溶液中无菌冻干而来的。
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）可以用传统的方法进行原代培养。这些细胞的持续增殖已被证明是非常困难的。牛脑中的提取物可以保证这些细胞的长期体外增殖。在细胞培养系统中加入纤维连接蛋白或胶原基质可以培养内皮细胞。当加入ECGF后，在细胞培养液中加入胎牛血清的量可以减少。肝素可以提高ECGF有丝分裂的活性。 有报道称在培养杂交瘤和其他类型的细胞时，加入ECGF后可以不用加入饲养层细胞。 
宿主: 牛
纯化: 粗提物
缓冲液: H₂O, w/o 防腐剂
形式: 冻干粉 
使用说明:内皮细胞生长因子是经过无菌冻干的，每小瓶含6毫克蛋白。原液的配制：用2毫升预热（37℃）的灭菌平衡盐溶液溶解蛋白，温和旋转小瓶使干粉溶解。原液可进一步用无菌组织培养液稀释到所需的工作浓度。虽然原液可加入无菌组织培养液中，建议将稀释的蛋白无菌过滤后使用。6毫克ECGF可以加入 500毫升的培养基中。 
生物活性/工作浓度: 培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），ECGFzui适宜的工作浓度是50-200 μg/ml。 加入50 μg/ml肝素后，ECGFzui适宜浓度是10 μg/ml. 作为制备单克隆抗体的辅助生长因子，ECGF的zui适宜浓度是25- 100 μg/ml. 
种属的特异性: 牛ECGF 可以作用于牛，鼠和人的细胞。 
保存条件：
溶解之前保存 2-8 °C。 溶解之后，溶液保存在 –20 °C。
推荐将溶解后溶液保存在 -20°C。避免反复冻融。 
使用: 牛ECGF 只用于科研，不能应用于临床! 
产品编号: 300-090-5 规格: 5x 6 mg 
参考文献: [Maciag T (1982) JBC 257:5333; Olander J (1980) In Vitro 6:209; Folkman J (1980) Nature 288:551; Evans CH (1982) JNCI 68:127; Pintus C (1983) J Immuno Meth 61:195; Maciag T (1979) PNAS 6:5674; Thornton SC (1983) Science 222:623; Ransom JH (1986) Methods Enzymol 121:293]
ECGF 用于HUVEC细胞培养

ECGF用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的zui适浓度范围是100-300 μg/ml，加入肝素(50 μg/ml)后的zui适浓度范围是10-20 μg/ml。作为一种生长添加物用于单克隆抗体的生产，zui适浓度范围是25-100 μg/ml。牛和猪ECGF因子对小鼠细胞，牛细胞和人细胞起作用。

Protocol:
– 每孔中生长培养基(EGM)中的细胞浓度是5-7 x 10³ cells
– 隔天培养细胞[如果实验很急,可以将早上培养的细胞下午进行换液。将生长培养基换成基础培养基（EBM）]
– 将生长培养基换成基础培养基(HUVEC: 基础培养基 +1-2% 胎牛血清)
– 培养24h
– 再次换液，加入因子 (生长因子，抑制剂，等等)
– 培养18h
– 加入10u l 3H-胸腺嘧啶溶液[0.025mCi/ml]/孔 (=0.25u Ci)
– 37°C再培养6h
– 洗涤步骤：(250ul/孔)
       PBS        一次
       MeOH     两次，每次5min
       TCA        两次，每次10min
       H₂O        一次
– 每孔加入250 ul 0.3M NaOH，裂解细胞
– 将2.5 ml ECO加入到相应的闪烁计数瓶中
– 将细胞裂解液加入的闪烁计数瓶中
– 用闪烁液体计数（-计数器;贝克曼仪器公司） 

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