ELISA试剂盒在实验室已 经相当普及，绝大多数ELISA试剂盒都是用于检测未知样本中抗原的浓度。用试剂盒当然比自己慢慢摸条件快得多，ELISA试剂盒不仅可以让实验更便利， 往往还更加。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口，数量繁多令人目不暇接，怎样才能选出zui适用的产品呢？首先当然得根据我们所要检测的分子 进行检测，除此以外也还有一些需要加以考量的因素，本文就来为您介绍一二。

1. 实验类型

ELISA试剂盒有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形 式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型，In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA 实验。

通常人们使用双抗夹心法进行ELISA实验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体 之间，这种方法既灵敏又有效，受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是*选择，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或者抗体只有 一个抗体结合位点。在上述情况下，竞争性ELISA就更为适用，这种方法是采用带标记的纯化抗原与样本中无标记的抗原进行竞争，以结合捕获抗体。

2. 抗体类型

单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA，实际上有时候二者结合效果更好。例如，对于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。

        双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体（不论多抗还是单抗）的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与检测抗体竞争抗原上的同一位点，为此我们就需要确 保捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。如果捕获抗体和检测抗体之间发生了冲突，就会对实验结果产生较大影响。要避免这一问题，我们可以选择购 买“matched pair”的捕获/检测抗体对，这些打包在一起的抗体是商家经过验证才推荐的好组合。

3. 交叉反应

如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就 是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自动物的抗体越来越容易，我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测 时，检测用的二抗必须特异性针对检测一抗，而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合，实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的 捕获抗体和检测一抗，来避免上述问题。

与此同时，了解试剂盒中提供的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），以免这些buffer含有可能影响抗原抗体相互作用的组分，使检测结果收到影响。

4. 检测方式

如今检测ELISA有许多途径，我们可以根据自己的偏好进行选择。一般ELISA检测的 是酶促反应的可溶性产物，抗体上结合有相应的酶（例如通常使用的辣根过氧化物酶HRP），而反应体系中添加有相应的底物（如3，3-二氨基联苯胺 DAB）。这种酶促反应生成具有特征性的颜色，可以通过分光光度计进行检测，碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上，也可以结合在二抗上，还 可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外ELISA的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。

        上述四点展开来讲都足以大做文章，因此如果您对考虑购买的ELISA试剂盒还有任何疑问，都可以直接向商家咨询。各大商家的上也有相应的技术资料提供，您可以从中获取有价值的产品信息。