zeptometrix 0801010说明书
Chicken IgY (IgG) ELISA
预期用途
鸡IgY是鸟类中发现的IgG样分子的名称。免疫鸡IgY（IgG）
ELISA是一种快速、简便的酶联免疫吸附试验（ELISA），用于鸡IgY的测定。
鸡血清、蛋黄或白色、血浆、唾液、粘膜、鸡细胞或其他生物细胞培养液
样品。
免疫试验鸡IgY（IgG）酶联免疫吸附试验仅用于研究目的。
试验原理
用对鸡IgY反应的多克隆抗体包裹的微孔板孔形成了分析的捕获阶段。正常鸡蛋黄抗体
样品样品连同提供的标准品用分析稀释剂适当稀释，然后在
微孔板井。经过一个洗涤步骤后，在井内捕获的鸡IgY与检测抗体（一种多克隆抗惊厥药）一起孵育。
与辣根过氧化物酶（HRP）结合的IgY。这种抗体只对免疫球蛋白的Fc部分起反应。
允许特异性检测免疫球蛋白的分子。在另一个洗涤步骤之后，显色底物
加入四甲基联苯胺（TMB），蓝色与已添加的鸡IgY的量成比例。
与抗体涂层板结合。通过添加停止溶液来停止酶反应，从而产生颜色。
变为黄色，可以在450纳米分光光度计上测量。然后鸡IgY的浓度是
根据标准曲线计算。
试剂
供应材料：
微孔板（1 x 96孔）：12 x 8孔条，涂有山羊抗鸡IgY
鸡IgY检测抗体（12 ml）：含有HRP结合山羊抗鸡IgY（Fc片段特异性）
鸡IgY标准品（7 ml）：在分析稀释剂中含有125 ng/ml鸡IgY。
分析稀释剂（100 ml）：含有PBS、阻断蛋白、Triton X-100®
以及2-氯乙酰胺作为防腐剂。
10x洗板缓冲液（125 ml）：含PBS、Tween 20？
和2-氯乙酰胺作为防腐剂
基质（12 ml）：含有四甲基联苯胺（TMB）
停止溶液（12毫升）：专有配方
微孔板封口机（1 PK）：每包10封
可密封塑料袋（1袋）：用于存放未使用的微孔板条。
Triton X-100是陶氏化学公司的注册商标。
Tween 20是ICI Americas，Inc.的注册商标。
所需材料但不提供：
个人防护用品（一次性手套、实验室外套、安全眼镜等）
蒸馏水或去离子水
汽缸和烧杯
准备样品和IGG标准稀释液的试管和试管架
经验证的可调节微量移液管和，单通道和/或多通道
计时器
在18-25摄氏度下验证的培养箱或温控室
吸水纸巾
经验证的可在450nm处测量光密度的微型板阅读器
自动微孔板清洗机或手动真空吸尘设备
绘图纸或计算机绘图软件
存储
在2-8°C下储存所有试剂盒。不要冷冻。未使用过的微孔板条应保存在密封袋中，并使用干燥剂
尽量减少受潮。所有储存和正确处理的试剂至少在打印的有效期之前是稳定的。
工具箱标签。
注意事项
在进行分析之前，仔细阅读所有说明。
处理套件组件和试样时，应采取通用预防措施。**
为避免交叉污染，对每个样品使用单独的移液管。
当测试潜在感染性样本时，遵守所有适用的地方、州和联邦法规
生物危险品的处置。
停止溶液含有盐酸，可能导致严重烧伤。如果接触到眼睛或皮肤，请冲洗
立即用水并寻求医疗救助。穿防护服和护目镜。
**MMWR，1988年6月24日，第37卷，第24号，第377-382、387-388页
试剂的制备
洗板缓冲器：
使用前，在蒸馏水或去离子水中稀释10倍1:10的洗板缓冲液。*混合。准备1X洗板缓冲液
可在2-8℃下储存一周。如有以下情况，可订购额外的10x洗板缓冲液（ZMC目录：0801060）
需要。
鸡肉标准曲线：
鸡IgY标准为125 ng/ml，应在分析稀释剂中稀释，以制备标准曲线，如
如下表所示。
试样稀释：
鸡血清或血浆估计有7毫克/毫升的IgY。蛋黄约有6～13mg/ml的IgY。因为
我们建议在试验稀释液中制备1:2500～3000倍稀释液进行初步试验。为了减少稀释误差，
建议采用三个稀释步骤。例如，三个1:65倍的串联稀释液，其中10μL添加到640μL的分析中。
稀释剂，是一种方便的稀释方案。其他样本可能含有或多或少的IgY，需要稀释。
适当地。10倍稀释液通常足以避免可能的基质干扰。
试验程序
使用前让所有试剂达到室温。如上所述制备试剂。将要使用的试管贴上标签
用于制备标准品和样品。如果整个微孔板不用于测试，去除多余的
从板架上剥开并用干燥剂放入可密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下储存。
步骤1：在其端部凸耳上标记每个板条，以确保板条在
化验。
第2步：用移液管将200μl标准1-6移到重复的孔中。
第3步：用移液管将每个样品200μl移到重复孔中。
第四步：用封板器盖住微孔板，在室温（18-25摄氏度）下培养30分钟。
第5步：抽取每口井的内容物，用1X洗板缓冲液清洗4次（见试剂制备）
第节）。冲洗时，用至少300μl的1X洗板缓冲液填充井内，然后抽吸。执行4个加注/吸气循环。
在后一次清洗循环后，小心地敲击吸水纸巾垫，*吸干盘子。继续
敲击直到没有观察到明显的洗板缓冲液滴。
步骤6：用移液管将100μL鸡IgY检测抗体移到每个孔中。
第7步：用封板器盖上封板，在室温（18-25摄氏度）下培养30分钟。
步骤8：如步骤5所述，用1X版洗涤缓冲液洗涤4次。
步骤9：将吸液管100 L的基片注入每个孔中。
步骤10：在室温（18-25摄氏度）下培养皿30分钟，不带盖子。蓝色会在
水井里装着鸡。
步骤11：用移液管将100μL的停止溶液移到每个孔中。颜色将从蓝色变为黄色。轻敲微孔板至
混合。
第12步：在15分钟内，用微型板阅读器读取450纳米处每个孔的光密度。
预期结果
下面是一个标准曲线的示例，不应用于计算实际样本。可以观察到变化
由于移液管、培养箱温度、读板器等原因，从实验室到实验室。
计算结果
测试有效性：
0 ng/ml标准的平均光密度必须低于0.200。
125 ng/ml的平均光密度必须高于1.000。
当平均光学浓度为
密度值不在标准曲线内。
计算：
1。计算每组标准和稀释样品的平均光密度（OD）值。
2。使用线性图纸或绘图软件，在Y轴上绘制每个标准的平均OD值与
X轴上相应的标准浓度。
三。通过这些点绘制适合拟合曲线以构建标准曲线。一个点对点的结构将是
准确。
4。用标准曲线插值法测定各稀释样品的IgY浓度。
5。乘以用于稀释每个样品的稀释系数，以确定原始样品的IgY浓度。
样本。
性能特点
特异性：
免疫电泳和/或酶联免疫吸附试验表明，该试剂盒中的鸡IgY检测抗体仅与Fc反应。
鸡免疫球蛋白重链的一部分，但不含鸡免疫球蛋白的Fab部分。对其他非免疫球蛋白无反应
检测血清蛋白。
羊、兔、大鼠、驴、山羊、马、牛、鼠和人血清均与ELISA反应无反应。
精度：