Parr Instrument Company是一家私人控股公司,位于伊利诺伊州莫林市211-53rd街,从事设计,制造和销售用于测试燃料以及在热和压力下进行化学反应和测试的实验室仪器和设备。
Parr反应器和压力容器包括标准设计和实验室到小型试验工厂规模的定制设备。这种压力设备的用途广泛应用于化学,石化,制药和生物技术研究,开发和控制实验室。
Parr量热计用于测试各种固体和液体燃料,食品和其他可燃材料。许多*的设计和高度自动化的仪表已经添加到其不断扩展的燃料测试仪器系列中。
parrinst 4635说明书
4635 Cell Disruption Vessel
4635细胞破裂血管
4635细胞破裂血管
4635,920 mL容器是通用型号,具有处理大小从几毫升到600毫升的样品的能力。
包括氮气填充连接
每个容器配备一个1831氮气填充连接,提供从商用氮气瓶填充容器所需的所有配件。1831连接包括一个带标准CGA-580联轴器的控制阀,用于连接氮气瓶,罐压力计和用于连接容器入口阀的柔性尼龙压力软管。每个容器都包括用于容器头的额外O形环。
4635细胞破裂血管应用
许多应用
氮减压方法特别适用于治疗哺乳动物和其他膜结合细胞。它还成功地用于处理植物细胞,从受精卵释放病毒和治疗脆弱的细菌。不建议用于未经处理的细菌细胞,但可以通过使用各种预处理程序来削弱细胞壁来消除这种限制。酵母,真菌,孢子和其他具有坚硬壁的材料对这种方法反应不佳。
应用和技术
哺乳动物细胞
Hunter和Commerford(1)于1961年发表了一篇论文,该论文已成为通过氮减压方法破坏哺乳动物组织的基本“烹饪手册”。尽管这些作者报道的大部分工作都是用大鼠组织完成的,但他们也治疗了脾脏,白细胞,淋巴结,肿瘤,胸腺和其他组织,以确定该方法的一般适用性。他们的结果清楚地表明,通过这种方法可以破坏细胞,对组分的物理和化学损害小。
H&C在1300psi及以上的压力下获得*破坏,而低于700psi的压力使全细胞和匀浆中的细胞团块离开。在800和1000psi之间的压力下,产生细胞完整的无细胞匀浆。在容器中处理之前,使用手压机预先切碎组织。发现细胞核的状态取决于悬浮缓冲溶液的组成。使用等渗溶液获得了良好的结果,而在悬浮于非常稀的溶液中的细胞中观察到核膨胀和破裂。这归因于渗透膨胀,H&C发现可以通过添加无机盐(例如氯化钠)或有机溶质(例如蔗糖或甘油)来控制渗透膨胀。当悬浮介质不含钙时,细胞核非常脆弱,但发现存在少至0.0002M的氯化钙可稳定核。乙酸镁也可用于此目的。
为了确定对不稳定细胞的损害程度,H&C研究了脱氧核糖核蛋白DNP,因为它易受化学和物理应力的影响,从核部分中获得超过90%的DNP回收率,并且具有优异的材料保存性。他们还比较了通过氮减压方法制备的线粒体悬浮液与PotterElvehjem匀浆器中产生的悬浮液的酶活性。没有检测到酶活性的差异。
Dowben,Gaffey和Lynch(2)使用氮减压技术从L细胞,成纤维细胞,羊水中的人类胎儿细胞,大鼠肝脏和鸡胚肌肉制备多聚核糖体。使用600psi压力,它们获得优于99.9%的破裂并且回收超过95%的原子核。多聚体产率比在Dounce组织研磨机中均质化细胞时高两到三倍。此外,它们具有更好的定义和更可重复的配置文件。还报道了通过氨基酸掺入测量的显着更高的活性。
Short,Maines和Davis(4)将氮减压方法与Potter-Elvehjem类型的PTFE研杵和玻璃管均质器进行比较,以制备用于药物代谢研究的微粒体级分。减压方法一致地产生超过杵和管分馏的每克组织的微粒体蛋白质的两倍。发现每毫克微粒体蛋白的酶活性对于两种方法基本相同,但必须记住,氮减压产生的微粒体蛋白质是每克原料的两倍多。
在显微镜检查下,发现通过减压方法产生的匀浆是无细胞的,而在研杵和管匀浆中观察到许多细胞团块。微粒体颗粒的电子显微镜显示,对于减压方法,颗粒更小并且尺寸更均匀。总之,这些作者指出,氮气减压方法比PTFE杵和玻璃管方法更有效,可能变化更小。
与杵和管方法的比较。在芝加哥退伍军人管理研究医院的近申请中,用细胞破碎容器在15分钟内制备了用杵和管生产需要8小时的匀浆。在另一个实验室中,每天使用细胞破碎容器将高达12千克的大脑均质化。
Wallach及其同事(5)使用氮减压方法获得完整的细胞分离,核损伤小。使用0.0002M醋酸镁缓冲液与Ehrlich Ascites Carcinoma细胞一起工作,他们研究了磷脂的细胞分布。Wallach发表了许多其他论文,其中减压技术已被用于制备细胞膜。
疫苗准备
许多商业实验室发现氮减压技术对于从受精卵中释放病毒非常有效。该方法可以使用Parr为此目的提供的较大破碎容器按比例放大用于商业生产。
细菌细胞
弗雷泽(7)于1951年发表了一些关于氮减压及其对大肠杆菌影响的早研究。弗雷泽的工作受到限制,因为他的船只被限制在900 psi的工作压力下。然而,使用在对数生长期收获的大肠杆菌,他能够在一次通过中获得75%的破裂并且在连续两次通过中获得超过90%的破裂。与其他具有坚韧细胞壁的细菌和生物体的结果混合在一起。
有几种方法可以处理具有坚韧壁的细菌细胞以通过氮减压方法促进破坏。这些措施包括:(1)在整个墙壁发育之前的早期生长阶段收获细胞; (2)在抑制细胞壁形成的试剂存在下培养细胞; (3)在加工前使用溶菌酶削弱壁,或(4)在应用氮气减压法之前使用机械预处理来削弱细胞壁。尽管这些技术已成功应用于许多具有重细胞壁的细菌,但它们对酵母,真菌,孢子和具有非常重或坚硬壁的类似细胞不是同样有效的。
植物细胞
Loewus和Loewus(10)发表了许多论文,其中描述了氮破坏程序在植物细胞和组织培养植物细胞中的应用。他们还报告说通过这种方法打破硅藻取得了相当大的成功。
参考
(1) | Hunter,MJ和Commerford,SL,1961,“哺乳动物组织的压力均质化。”Biochim。生物物理学。Acta,47:580-6。 |
(2) | Dowben,RM,Gaffey,TA和Lynch,PA,1968。“通过氮气蚀破坏细胞后高产率地分离肝肌多聚核糖体。”FEBS Letters,Vol。2,,第1-3页。 |
(3) | Dowben,RM,Lynch,PM,Nadler,HC和Hsia,DY,1969。“来自L. Cells的Polyribosomes。”Exp。细胞研究,58:167-9。 |
(4) | 简,CR,Maines,MD和Davis,LE,1972。“通过快速减压均质化制备用于药物代谢研究的肝微粒体部分。”Proc。SOC。EXPER。生物学。Med。,140:58-65。 |
(5) | Wallach,DFH,Soderberg,J。和Bricker,L.,1960。“Ehrlich和腹水癌细胞的磷脂组成和intracelfular distribution。”Cancer Research,20:397-402。 |
(6) | Manson,LA,Foshi,GV和Palm,J.,1963。“移植抗原与正常和恶性小鼠组织的微粒体pipoprotein的关联。”J. Cell and ComD。生理学,61:109-18。 |
(7) | 弗雷泽,D.,1951年。“通过释放气体压力来破灭细菌。”自然,167:33-4。 |
(8) | Avis,PJG,1967。“在亚细胞成分,制备和分馏中。”(Ed.Birnie,GD和Fox,SM)Chapt。1,哺乳动物细胞的压力均质化。由纽约Plenum出版社出版。 |
(9) | Manson,LA,1972“通过压力均质化提取膜性移植抗原。”(Ed.Kahan,BD和Reiifeld,RA)。9,移植抗原。由纽约Academic Press出版。 |
(10) | Loewus,MW和Loewus,F.,1971。“从acer pseudoplatanus L.细胞培养物中分离和表征d-葡萄糖6-磷酸环化酶(NDA依赖性)。植物生理学。(1971)48:255-260。 |