scarabgenomics C-0185-05K说明书

 

MDS™42ΔrecA化学感受态细胞试剂盒

：MDS™42ΔrecA化学感受态细胞试剂盒

 

产品

C-0185-05K – MDS™42ΔrecA化学感受态细胞

C-0185-10K-MDS™42ΔrecA化学感受态细胞

C-0185-20K-MDS™42ΔrecA化学感受态细胞

 

· 维持和繁殖不稳定的克隆和质粒 – 携带直接重复序列，反向重复序列或导致明显的二级“茎 – 环”结构的其他序列的pDNA载体在标准大肠杆菌宿主中通常是不稳定的。CleanGenome® 大肠杆菌菌株经常用于克隆在其他菌株中遭受不需要的重组事件的序列。

· 准确的质粒复制 – 从CleanGenome® 大肠杆菌菌株中删除了重组或移动DNA元件，如插入元件，以确保您的构建体的忠实复制。

· 克隆和表达“有害”基因 – 清除Genome® 大肠杆菌菌株的自然防御系统，例如IS变异“有害”基因以阻止对生物体的压力，已被删除，因此它们不会干扰您的实验。

· 更高的蛋白质产量 – 从CleanGenome® 大肠杆菌菌株中去除不必要的基因，重新定向细胞的能量，使更多的目标和隐藏的原噬菌体的清除，防止细胞裂解，因此您的蛋白质留在细胞内。

· 比标准T7表达菌株更低的背景诱导-T7 RNA聚合酶基因处于修饰的lac启动子/操纵子系统的控制之下，其增强了LacI阻遏蛋白赋予的灵敏度和抑制程度。

· 使用T7载体进行蛋白质表达 – 无需再克隆，使用CleanGenome® 大肠杆菌宿主中现有的T7克隆。

背景

使用合成生物学方法，通过进行一系列计划的，的缺失来减少大肠杆菌K-12基因组。多重缺失系列（MDS™）菌株（1），基因组减少高达15％，通过鉴定非必需基因和消除序列，包括重组或移动DNA和神秘毒力基因，同时保持强劲生长而设计和蛋白质生产。基因组减少还导致意想不到的有益特性，包括高电穿孔效率和重组基因和在其他菌株中不稳定的质粒的准确繁殖。随后的缺失和有用等位基因的引入产生适合于许多分子生物学应用的菌株。

数据

 

 

图1：多个缺失菌株耐受“有害”基因。 
由霍乱毒素B亚单位（CTX）融合的兔出血症病毒VP60组成的嵌合基因在大肠杆菌中非常不稳定。单独地，两个基因在E中都是稳定的。大肠杆菌HB101，C600和DH10B，但在相同宿主中携带融合基因的pCTXVP60不产生融合蛋白，并且以低产率回收。所有回收的质粒都含有CTXVP60开放阅读框中的突变，几乎全部来自IS插入。相反，重组质粒在MDS TM中*稳定; 获得了正常的质粒DNA产量。pCTXVP60的代表性限制性模式。（A）将来自MDS TM 42的质粒DNA转化并在的宿主中繁殖，然后用NcoI和EcoRI消化。纯化每个限制性模式的代表并测序。M，分子量标记，1 kbp阶梯; 1，MDS™41，无插入; 2，MDS™42，无插入; 3，DH10B，IS 10插入; 4，DH10B，IS 10插入/缺失; 5，C600，IS5插入; 6，C600，IS1插入; 7，C600，IS 1插入。（B）对于所呈现的五个实例确定的CTXVP60阅读框中IS元件插入位点的相对位置。
 

 

图2：不同宿主菌株中的质粒稳定性。 
左：在pT-ITR的四次传代培养期间，具有病毒LTR区段的质粒; 泳道0，传代培养前分离的质粒DNA，泳道1-4，连续传代培养。用限制酶消化质粒DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳分析。KpnI在单个位点切割质粒，但在MG1655中，两个条带表明质粒缺失。MscI在两个位置切割，但在MG1655中，第三个中间带确认质粒被删除。右图：慢病毒表达质粒的四种变体在MDS TM42ΔrecA和Stbl3 TM（Life Technologies）中的稳定性，显示含有完整质粒的转化体的比例（表2 BioTechniques 43：466-470（2007年10月））（2）。

产品规格

试剂盒组分 
MDS™42Δ 的recA化学感受态细胞
的pUC19对照DNA（10微克/微升）
的SOC培养基

基因型 
MG1655多缺失菌株（1），Δ 的recA 1819 
的recA基因 1819突变是Δ的*缺失的recA。

质量控制 
使用pUC19对照DNA测试转化效率，一式两份进行。将转化的细胞接种在含有50μg/ ml羧苄青霉素的LB平板上。转化效率= 1×10 ⁸ cfu /μgDNA。

储存条件将 
组分储存在-80°C。不要将细胞储存在液氮中。

 

 

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