货号：L6030-HC-L
品名：T4 DNA Ligase (Rapid) （T4 DNA连接酶（快速））
产品描述：
T4 DNA连接酶催化双链DNA或RNA的末端5'磷酸和3'羟基之间形成磷酸二酯键。该酶有效连接钝端和粘端，并修复双链DNA，RNA或DNA / RNA杂合体中的单链缺口（1）。
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规格： |
600,000 U/ml |
|
浓度： |
240,000 U |
|
保存： |
-25°C至-15°C |
|
纯度（SDS-PAGE） |
> 99％ |
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活性： |
300,000 U/mg |
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SS核酸外切酶 |
6,000 U< 1.0 % Released |
|
DS核酸外切酶 |
6,000 U< 1.0 % Released |
|
DS内切核酸酶 |
6,000 U=No Conversion |
|
大肠杆菌 DNA污染 |
6,000 U <10 copies |
蛋白质来源
携带克隆的T4 DNA连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。
提供：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C
随附：
B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)
2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C
10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C
单位定义
1单位定义为在23℃孵育30分钟后，在50μl1X DNA连接酶缓冲液中加入100ng具有粘性末端的DNA片段的50％所需的DNA连接酶的量。
使用说明：
1、反应设置
|
Amount |
Description |
Final Concentration |
|---|---|---|
|
10 uL |
2X Rapid Ligation Buffer |
1X |
|
X uL |
Vector |
1-10 ng/uL |
|
X uL |
Insert |
1-10 ng/uL |
|
1 uL |
T4 DNA Ligase (600 U/ uL) |
30 U/uL |
|
X uL |
Type I Water |
N/A |
|
20 uL |
Total Volume |
|
2、过程操作
1）将所有上述组分加入干净的反应容器中，通过移液充分混合。
2）25°C孵育10分钟。
3）使用PCR清洁柱立即纯化DNA并洗脱约50μL。
4）– 或 – 在TE或水中立即稀释（至少1:10，但足以使0.1-10ng连接产物转化）
5）将0.1-10ng连接产物转化为与载体相容的化学或电子感受态细胞系
3、其他
在1X T4 DNA连接酶反应缓冲液中用Lambda-Hind III DNA片段底物测量，一个酶酶T4 DNA连接酶粘性末端单位相当于约3个粘性末端单位。
一个Weiss单位大约相当于22个Enzymatics粘性末端单位。
T4 DNA连接酶是ATP依赖性的。建议在-20°C储存一年后丢弃反应缓冲液，并用新鲜缓冲液代替以确保*性能。当靶向插入片段：载体比率在2和6之间时，单插入连接是*的。高于6：1的比率将促进插入多个片段，而降至2：1以下将降低连接效率。
对于有问题的连接或DNA浓度未知的情况，可能需要改变比率并进行多次连接。
高浓度PEG的存在将显着降低电感受态细胞的转化效率。为了zui大限度地转化为电感受态细胞，建议采用以下方法：
*： 连接后，使用DNA纯化离心柱纯化产物并在50μLTE中洗脱。DNA现在已准备好转化。要转化的DNA的zui终数量应该在0.1-10ng范围内。
更好： 在ddH2O或TE中稀释连接产物以降低PEG浓度。要转化的DNA的zui终数量应该在0.1-10ng范围内。
Enzymatics的高浓度T4 DNA连接酶与2X快速连接缓冲液结合使用，极大地刺激了平端连接的速度和效率，因此不建议长时间孵育（> 10分钟），并可能大大降低连接产物的转化效率。为了使正确的插入/载体组合的转化效率zui大化，推荐使用以下方案。
酶学10X T4 DNA连接酶缓冲液不含PEG，并且与标准连接方案相兼容，该方案不规定使用快速/快速/快速格式缓冲液。
部分产品信息：
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货号 |
品名 |
规格 |
浓度 |
品牌 |
|---|---|---|---|---|
|
N2070-10-L |
ATP Solution |
50 µmol |
10 mM |
Enzymatics |
|
N2050-10-L |
10 mM dNTP Solution Mix |
100 µmol |
10 mM |
Enzymatics |
|
N2010L |
100 mM 75µmol dNTP Solution Set |
75 µmol |
100 mM |
Enzymatics |
|
N2010-A-L |
100 mM dATP Solution |
75 µmol |
100 mM |
Enzymatics |
|
N2050L |
100µmol dNTP Solution Mix |
100 µmol |
25 mM |
Enzymatics |
|
Y9180L |
10x Uracil Cleavage System |
750 Reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
P7670 |
2x HiFi PCR Master Mix |
1 rxn |
2x |
Enzymatics |
|
Y9420L |
5x ER/A-Tailing Enzyme Mix |
24 reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
Y9380L |
E. coli Pyrophosphatase |
50 U |
100 U/mL |
Enzymatics |
|
Y9030L |
E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein |
1.5 mg |
2.75 mg/ml |
Enzymatics |
|
Y9140-HC-L |
End-Repair Mix (High Concentration) |
75 Reactions |
1 Rxn/µL |
Enzymatics |
|
Y9140-LC-L |
End-Repair Mix (Low Concentration) |
200 Reactions |
1 Rxn/µL |
Enzymatics |
|
Y9080L |
Endonuclease VIII |
10,000 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7600L |
EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) |
10,000 U |
200,000 U/mL |
Enzymatics |
|
X8010L |
Exonuclease I |
30,000 U |
20,000 U/ml |
Enzymatics |
|
X8020L |
Exonuclease III |
50,000 U |
100,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7010-HC-L |
Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) |
10,000 U |
50,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7010-LC-L |
Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) |
10,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7060L |
Klenow Fragment |
2,500 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
X8030L |
Lambda Exonuclease |
10,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7040L |
M-MuLV Reverse Transcriptase |
100,000 U |
200,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7090L |
Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) |
3,000 U |
30,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7140-HC-L |
Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) |
100,000 U |
400,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7140-LC-L |
Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) |
100,000 U |
40,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7610L |
NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions |
250 Reactions |
2X |
Enzymatics |
|
P7590L |
Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase |
500 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7460L |
Poly(A) Polymerase |
1,000 U |
5,000 U/mL |
Enzymatics |
|
Y9260L |
RecA |
1.5 mg |
2.0 mg/mL |
Enzymatics |
|
Y9220L |
RNAse H |
5,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
Y9240L |
RNAse Inhibitor |
20,000 U |
40,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6010L |
T3 DNA Ligase |
900,000 U |
3,000,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6030-LC-L |
T4 DNA Ligase |
150,000 U |
120,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6030-HC-L |
T4 DNA Ligase (Rapid) |
240,000 U |
600,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7080L |
T4 DNA Polymerase |
2,000 U |
3,000 U/ml |
Enzymatics |
|
Y9130L |
T4 Gene 32 Protein |
1.0 mg |
10 mg/mL |
Enzymatics |
|
Y9040L |
T4 Polynucleotide Kinase |
10,000 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6050L |
T4 RNA Ligase 1 |
10,000 U |
20,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6080L |
T4 RNA Ligase 2 |
4,500 U |
30,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6070L |
T4 RNA Ligase 2 Truncated |
500 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6020L |
T7 DNA Ligase |
900,000 U |
3,000,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7260L |
T7 DNA Polymerase |
3,500 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7180L |
T7 RNA Polymerase |
50,000 U |
50,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6060L |
Taq DNA Ligase |
20,000 U |
40,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7110L |
Taq DSC 2.0 DNA Polymerase |
1,250 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7250L |
Taq-B DNA Polymerase |
10,000 U |
5,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7620L |
TaqIT |
5,000 U |
50,000 U/mL |
Enzymatics |
|
P7070L |
Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) |
6,000 U |
20,000 U/ml |
Enzymatics |
|
G5020L |
Thermolabile UDG |
500 U |
1,000 U/ml |
Enzymatics |
|
Y9370L |
Thermostable Pyrophosphatase |
1,250 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
G5010L |
Uracil DNA Glycosylase |
10,000 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7511L |
VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase |
500 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7520L |
VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase |
500 U |
2,000 U/ml |
Enzymatics |
|
L6030-W-L |
WGS Ligase |
24 Reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
P7640L |
ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit |
1000 Reactions |
N/A |
Enzymatics |
|
P7020-HC-L |
φ29 DNA Polymerase (High Concentration) |
2,000 U |
100,000 U/ml |
Enzymatics |
|
P7020-LC-L |
φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) |
2,000 U |
10,000 U/ml |
Enzymatics |
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