Enzymatics L6020L 说明书

 

货号:L6020L

品名:T7 DNA Ligase(T7 DNA连接酶)

产品描述:

T7 DNA连接酶催化双链DNA中5'磷酸和3'羟基末端之间形成磷酸二酯键。该酶将加入平端和粘性末端以及修复双链DNA中的单链缺口。

 

规格:

900,000 U

浓度

3,000,000 U/ml

保存

-25°C至-15°C

纯度(SDS-PAGE)

> 99%

活性:

3,000,000 U/mg

SS核酸外切酶

30,000 U <1.0% released

DS核酸外切酶

30,000 U <1.0% released

DS内切核酸酶

30,000 U = No conversion

大肠杆菌 DNA污染

30,000 U <10 copies

其他

1.在没有高浓度拥挤剂(例如20-30%PEG 6-8000)的情况下,T7 DNA连接酶的特异性活性在平末端片段上减少1000倍(1,2)。

2.T7 DNA连接酶不能连接单链DNA的片段(1)。

 

蛋白质来源

携带T7 DNA连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。

 

提供

20mM Tris-HCl 
50mM NaCl 
1mM DTT 
0.1mM EDTA 
50%甘油
pH 7.5在25℃

 

随附:

 

B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)

2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C

 

单位定义 
1单位定义为在23℃30分钟内连接50ng 100ng DNA的片段与粘性末端所需的T7 DNA连接酶的量。

 

质量控制分析

 

单位表征测定
单位活性使用2倍系列稀释法测量。在1X快速连接缓冲液中进行酶稀释,并加入到20μL含有双链DNA的片段和1X快速连接缓冲液的反应中。将反应在〜23℃(室温)孵育30分钟,在冰上沉降,并在用溴化乙锭染色的1%琼脂糖凝胶上分析。

 

蛋白质浓度(OD 280)测量使用使用2.0mg / ml BSA样品(Pierce Cat#23209)标准化的Nanodrop ND-1000分光光度计
在OD 280处分析2.0μL酶样品并用产品储存溶液冲切。观察到的3个重复样品的平均测量值使用67,850的消光系数和41,132道尔顿的分子量转换为mg / mL。

 

SDS-Page(物理纯度评估)

将2.0μL浓缩的酶溶液加载到变性的4-20%Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶上,该凝胶侧翼为宽范围的MW标记和2.0μL的样品的1:100稀释物。电泳后,将凝胶染色并比较​​样品以确定物理纯度。该测试的验收标准要求浓缩样品中污染带的总量不超过稀释样品中目的蛋白质条带的质量,确认浓缩样品的纯度大于99%。

 

污染测试

单链核酸外切酶活性
将含有10,000cpm放射性标记的单链DNA底物和10μL酶溶液的50μL反应物在37℃下温育4小时,导致TCA可溶性计数的释放小于1.0%。

 

双链切核酸酶活性将含有5,000cpm放射性标记的双链DNA底物和10μL酶溶液的50μL反应物在37℃下温育4小时,导致TCA可溶性计数的释放小于1.0%。

双链核酸内切酶活性将含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反应物在37℃下温育4小时,结果通过琼脂糖凝胶电泳确定没有肉眼可察觉地转化为带切口的环状DNA。

 

大肠杆菌  16S rDNA污染测试
复制酶溶液的5uL样品变性,并在TaqMan qPCR测定中筛选污染性大肠杆菌基因组DNA,使用对应于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。测试的验收标准是由3个重复的无模板对照样品的平均值产生的阈值循环计数(C t)。基于无模板对照 Ct  值与标准曲线数据之间的相关性,该测定的检测限为<10拷贝基因组/样品。

 

 

 

部分产品信息:

货号

品名

规格

浓度

品牌

N2070-10-L

 ATP Solution 

50 µmol

10 mM

Enzymatics

N2050-10-L

10 mM dNTP Solution Mix

100 µmol

10 mM

Enzymatics

N2010L

100 mM 75µmol dNTP Solution Set 

75 µmol

100 mM

Enzymatics

N2010-A-L

100 mM dATP Solution 

75 µmol

100 mM

Enzymatics

N2050L

100µmol dNTP Solution Mix 

100 µmol

25 mM

Enzymatics

Y9180L

10x Uracil Cleavage System 

750 Reactions

N/A

Enzymatics

P7670

2x HiFi PCR Master Mix 

1 rxn

2x

Enzymatics

Y9420L

5x ER/A-Tailing Enzyme Mix 

24 reactions

N/A

Enzymatics

Y9380L

E. coli Pyrophosphatase 

50 U

100 U/mL

Enzymatics

Y9030L

E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein 

1.5 mg

2.75 mg/ml

Enzymatics

Y9140-HC-L

End-Repair Mix (High Concentration) 

75 Reactions

1 Rxn/µL

Enzymatics

Y9140-LC-L

End-Repair Mix (Low Concentration) 

200 Reactions

1 Rxn/µL

Enzymatics

Y9080L

Endonuclease VIII 

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7600L

EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) 

10,000 U

200,000 U/mL

Enzymatics

X8010L

Exonuclease I 

30,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

X8020L

Exonuclease III 

50,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7010-HC-L

Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) 

10,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

P7010-LC-L

Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7060L

Klenow Fragment 

2,500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

X8030L

Lambda Exonuclease 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7040L

M-MuLV Reverse Transcriptase 

100,000 U

200,000 U/ml

Enzymatics

P7090L

Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) 

3,000 U

30,000 U/ml

Enzymatics

P7140-HC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) 

100,000 U

400,000 U/ml

Enzymatics

P7140-LC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) 

100,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7610L

NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions 

250 Reactions

2X

Enzymatics

P7590L

Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase 

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7460L

Poly(A) Polymerase 

1,000 U

5,000 U/mL

Enzymatics

Y9260L

RecA 

1.5 mg

2.0 mg/mL

Enzymatics

Y9220L

RNAse H 

5,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

Y9240L

RNAse Inhibitor 

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

L6010L

T3 DNA Ligase 

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

L6030-LC-L

T4 DNA Ligase 

150,000 U

120,000 U/ml

Enzymatics

L6030-HC-L

T4 DNA Ligase (Rapid) 

240,000 U

600,000 U/ml

Enzymatics

P7080L

T4 DNA Polymerase 

2,000 U

3,000 U/ml

Enzymatics

Y9130L

T4 Gene 32 Protein 

1.0 mg

10 mg/mL

Enzymatics

Y9040L

T4 Polynucleotide Kinase 

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

L6050L

T4 RNA Ligase 1 

10,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

L6080L

T4 RNA Ligase 2 

4,500 U

30,000 U/ml

Enzymatics

L6070L

T4 RNA Ligase 2 Truncated 

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

L6020L

T7 DNA Ligase 

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

P7260L

T7 DNA Polymerase 

3,500 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7180L

T7 RNA Polymerase 

50,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

L6060L

Taq DNA Ligase 

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7110L

Taq DSC 2.0 DNA Polymerase 

1,250 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7250L

Taq-B DNA Polymerase 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7620L

TaqIT 

5,000 U

50,000 U/mL

Enzymatics

P7070L

Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 

6,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

G5020L

Thermolabile UDG 

500 U

1,000 U/ml

Enzymatics

Y9370L

Thermostable Pyrophosphatase 

1,250 U

2,000 U/ml

Enzymatics

G5010L

Uracil DNA Glycosylase 

10,000 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7511L

VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase 

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7520L

VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase 

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

L6030-W-L

WGS Ligase 

24 Reactions

N/A

Enzymatics

P7640L

ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit 

1000 Reactions

N/A

Enzymatics

P7020-HC-L

φ29 DNA Polymerase (High Concentration) 

2,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7020-LC-L

φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) 

2,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

 

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