Thewellbio应用3D培养技术可以实现体外研究细胞在体内的行为与对刺激的反应，如温度、pH变化、营养吸收、转运及分化等。公司研发供应的细胞体外3D培养体系采用无动物源成分的多糖凝胶材料，模拟出天然的细胞胞外基质环境，同时具有多用途、高精度、高性价比、操作简便和节省时间等特点。因此3D培养技术越来越多地被应用到药物筛选、组织工程、临床前研究、细胞治疗和基础研究等领域。

 

对于*次使用VitroGel 3D系统，请阅读这些常见问题，以确保*效果。

1.我应该选择哪种产品，VitroGel 3D或VitroGel 3D-RGD？

如果您使用贴壁细胞系，建议您使用VitroGel 3D-RGD。如果您使用非贴壁细胞系，或者您想要更灵活地控制生长因子/蛋白质，我们建议您使用VitroGel 3D。请support@thewellbio.com如果你需要一个定制的产品。

2.产品有多稳定？

VitroGel 3D在4-40°C之间是稳定的。请勿将产品冷冻或将水凝胶溶液加热至80°C以上。该产品在室温下4℃或6个月未开封未开封18个月。一旦打开，请密封盖子，保持在4°C，以防止1个月内污染和使用。

3.如何调整水凝胶形成时间并作为可注射水凝胶进行准备？

水凝胶形成时间高度取决于水凝胶溶液和触发溶液（细胞培养基/PBS）的混合比例。我们建议将水凝胶溶液和介质/ PBS以4：1（v / v）的比例混合成可注射的水凝胶。水凝胶在混合后30分钟内应稳定。较高的混合比（水凝胶溶液：介质> 4：1）会导致更长的水凝胶形成时间。低混合比（水凝胶溶液：介质<1：1）可能导致不可注射的水凝胶。

4.水凝胶形成速度太快，我该怎么办？

水凝胶形成时间取决于几个因素，如凝胶浓度，培养基的离子强度和混合比。如果水凝胶形成太快，我们建议用DI水稀释水凝胶溶液，然后与细胞培养基混合使其凝胶化。稀释后，尝试保持4：1的比例（稀释的水凝胶溶液：细胞培养基= 4：1）进行混合，因为这是我们用于我们的水凝胶系统的大多数培养基的*比例。

5.当将凝胶溶液与细胞培养基混合时，我可以做什么来保持气泡形成？

气泡问题与将凝胶溶液与细胞培养基混合后溶液粘度增加有关。这里有一些有助于减少气泡形成的建议：
1）将水凝胶溶液预热至37°C以降低凝胶溶液的粘度。
2）将凝胶溶液和细胞培养基轻轻混合，并沿着孔板的壁缓慢移液，不引入气泡。（有些用户喜欢使用涡流而不是移液管进行混合以避免气泡）
3）在与细胞培养基混合之前用DI水稀释凝胶溶液。
4）切割移液器吸头以获得更好的流量。
5）如果混合后仅形成小气泡，在水凝胶顶部加入一层培养基，孵育过夜。

6.如何调整zui终水凝胶的硬度？

通过在与细胞培养基/PBS混合之前稀释水凝胶溶液可以调节zui终水凝胶的硬度。请使用无菌去离子水稀释水凝胶溶液。不要使用PBS或其他离子溶液。如果您需要比原始产品更高的水凝胶刚度，请与我们。

7.应该使用什么种子密度？

我们建议对该水凝胶系统使用200,000-1,000,000个细胞/ mL。您可能需要相应地每1-2天更换一次覆盖的培养基。

8.细胞在VitroGel 3D水凝胶中生长多长时间？

我们已经测试了水凝胶系统中细胞的生长长达两周。依靠细胞系，3D细胞培养可以持续更长时间。一旦单元格的数量和大小增加，您可能需要更频繁地更换封面介质。

10.球形形成前多久？

通常，球形体形成在水凝胶体系中培养约5-10天。形成时间可以根据细胞系而变化。

11.3D文化后，我能从水凝胶中收获细胞么？

是的，通过使用简单的移液和离心方案，可以在3D培养后收获细胞。请下载完整的使用手册，并阅读从水凝胶收集细胞的细节。

12.为什么水凝胶松散地粘到未处理的组织培养板上？

未处理的组织培养板具有更疏水的表面，其减少了孔板表面上的水凝胶/细胞的附着。为了更好的表现，我们建议使用经过处理的组织培养板与VitroGel 3D系统。

13.胶凝是否可逆？

是。如果水凝胶以适当的混合比制备，例如 4：1（水凝胶溶液：细胞培养基= 4：1），水凝胶将进行特殊的可逆机械性能 – 剪切稀化和自愈，这意味着水凝胶可以在剪切力下转移到液体中，例如移液或一旦剪切力停止，再次注入和恢复为水凝胶。除了这种机制，我们还可以操纵水凝胶对温度变化或其他方法是可逆的。请support@thewellbio.com获取定制解决方案。

14.在VitroGel 3D中生长的细胞是否可以分化？

是。通过使用新鲜的VitroGel 3D或其他2D或3D培养方法，可以从VitroGel 3D水凝胶系统和亚培养物中再次收获细胞一段时间。

15如何使用VitroGel 3D进行共培养或夹心培养（逐层）？

可以使用VitroGel 3D水凝胶系统进行两种或多种不同细胞类型的共培养。除了添加不同的细胞类型与水凝胶溶液共同培养，每种细胞类型也可以与水凝胶溶液混合并逐层加入。在*层水凝胶变得稳定后，仔细地将第二层细胞/水凝胶混合物覆盖在*层细胞/水凝胶的顶部。

16.我可以将细胞外基质蛋白或其他分子化合物添加到VitroGel 3D水凝胶中吗？

是。细胞外基质蛋白或其他分子化合物可以在水凝胶形成之前或之后加入到VitroGel 3D水凝胶体系中。在水凝胶形成之前，将蛋白质或分子化合物加入细胞培养基中，然后与VitroGel 3D水凝胶溶液混合。在形成水凝胶之后，可以将蛋白质或分子化合物加入渗透到纳米纤维基质中的水凝胶的顶部。请注意，由于蛋白质或化学化合物中含有的盐，水凝胶形成时间和zui终凝胶硬度可能会发生变化。如果改变水凝胶性质，我们建议在与VitroGel 3D水凝胶溶液混合之前用蔗糖溶液洗涤蛋白质或化合物以除去盐。

17.VitroGel 3D是否与共焦显微镜或其他成像技术的染色和免疫荧光方案相兼容？

是。细胞可以在水凝胶内染色或从水凝胶中收获，然后染色。大多数荧光染料和免疫试剂可以用于标准方案。请阅读VitroGel 3D的完整使用手册了解更多详情。此外，VitroGel 3D水凝胶在不同的成像系统中是透明和兼容的，用于细胞观察。

18.我可以对在VitroGel 3D中培养的细胞的蛋白质和核酸进行分子分析吗？

是。在VitroGel 3D水凝胶中培养后，可以从水凝胶中收获细胞，并根据标准程序进行分子分析。

19.水凝胶是否可以从组织培养中撤出，以进行切片？

是的，一旦水凝胶变得稳定，你可以把它从文化中分离出来。添加*培养基后30-60分钟内水凝胶应稳定。

20.我可以使用VitroGel 3D进行体内研究吗？

是。可以在水凝胶形成之前或之后注射VitroGel 3D用于体内研究。在水凝胶形成之前，可以将VitroGel 3D溶液直接注射到动物中，后者随着其与生理环境的离子化合物接触而变成水凝胶。此外，VitroGel 3D水凝胶在水凝胶形成后具有先进的注射性能。以适当的比例混合水凝胶溶液和细胞培养基/PBS（我们推荐水凝胶溶液：培养基/PBS = 4:1v / v），zui终的水凝胶变得可注射用于体内研究。使用这种方法，细胞或​​其他化合物可以在注射前在水凝胶中很好地混合。

 

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