LenioBio GmbH是一家专注于蛋白质表达解决方案的生物技术公司。LenioBio总部位于德国杜塞尔多夫，由商业资深人士和蛋白质表达专家于2016年成立。2018年三月，LenioBio签署了陶氏益农的许可协议，以推出自己专有的无细胞蛋白质表达技术下LenioBio品牌爱丽丝®。LenioBio目前正在进一步开发该技术，通过智能设计进行创新，以利用自然的力量来加速合成生物学。历史和背后的爱丽丝技术的特点®在技术部分描述。
在LenioBio，我们所做的一切都始于我们的使命：为客户提供创新的解决方案，以的轻松，快速和的方式应对严峻的挑战。这种深切的承诺是我们的名字Lenio的核心，它源自拉丁语“缓解，减轻，改善”。
LenioBio –应用性更好的科学。
leniobio AL0103500说明书
Buy ALiCE® Cell Free Protein Expression Kits
| PRODUCT | SIZE | PRICE |
|---|---|---|
| ALiCE® Cell-Free Protein Expression Maxi Kit AL0103500 |
6 x 500µl | € 3470 |
| ALiCE® Cell-Free Protein Expression Midi Kit AL0103200 |
6 x 200µl | € 1520 |
| ALiCE® Cell-Free Protein Expression Mini Kit AL0103050 |
6 x 50µl | € 395 |
描述
“爱丽丝®是一个*的真核无细胞系统，可以生成一个的3毫克/毫升在批处理模式的蛋白质，与市场上的其它真核无细胞系统，它仅产生0.1毫克/毫升或更小进行比较。即使是通常只能处理易于表达的蛋白质的原核无细胞系统，也只能以批处理方式产生1 mg / mL的蛋白质。”
技术指标
规格信息
套件组件
来源于植物细胞的细胞裂解液
保质期
12个月
贮存温度
-70°C至-80°C
活动验证
至少3毫克的表达/以下爱丽丝的手动时毫升增强黄色荧光蛋白的®
用户提供的设备和材料：
手套
•吸管过滤头（无核糖核酸酶）
•无核糖核酸酶的水（例如来自微孔过滤装置的水）
•轨道振动筛
o当在试管中进行反应时：
桌面摇床（2毫升容器插入物），摇床直径：3毫米或0，当在平板中进行反应时：
湿度控制（高达80%）的振动筛，振动直径：25 mm，带固定板和96个半孔板（无RNase）
运输和储存
Alice®套件采用干冰运输。到达后，立即按上表所示存放部件。在这些条件下，反应混合物至少稳定12个月。
产品使用限制
这个工具包仅供研究之用。不得用于疾病的诊断、预防或治疗，也不得用于人类。请参阅我们网站上的有限使用标签许可证（LULL）：
产品保修
工具包是用干冰冷冻运输的。如果交货时包装内没有干冰，或者包装损坏，则可能会影响套件的质量。如果交货有任何问题，请立即与我们联系。保修有效期至产品标签上注明的到期日。
质量管理
高质量的化学品和材料已被用于制造该套件的组件。每批产品都经过仔细的测试，以确保所有部件都符合规定的规格（见分析证书）。
安全
使用者应遵守处理化学品和重组DNA的所有适用法规。处理套件组件时，应穿戴实验室工作服、安全眼镜和手套。处理超冷材料时，请戴上额外的防护手套，以免冻伤。使用过的部件应按照当地法规进行处理。
免责声明
对于因使用、误用或因使用本工具包而造成的任何直接或间接损害或损失，我们不承担任何责任。
介绍
从粗细胞提取液中提取的无细胞蛋白表达（cfpe）系统作为一种研究工具已经应用了几十年，并在蛋白表达技术中引入了许多诱人的优势。
然而，采用cfpe系统替代细胞法的一个关键障碍是蛋白质产量相对较低的问题。
为了解决这个问题，Leniobio利用植物细胞生物学的优势，引入了一种新的真核细胞自由表达系统：Alice。Alice®在批处理模式下提供的高达3毫克/毫升的蛋白质产量。因此，它能让你克服活体宿主系统的限制，在数小时内而不是数周内获得“难以产生”的蛋白质。系统的优点
其中包括：
•高产：高达3 mg/ml的表达蛋白
•易于使用：一步反应方案
•快速：仅需48小时即可获得高产量
灵活：表示“难以生产”蛋白质、细胞毒性蛋白等。爱丽丝®利用烟草细胞裂解物，耗尽空泡。该系统包含体外转录所需的所有因子（rna聚合酶，ntps）和翻译反应（核糖体，翻译起始/延伸因子，trna等）。使用一个简单的协议，rna转录和翻译都发生在一个单管（耦合转录/翻译）。
反应是通过简单地混合质粒DNA与爱丽丝®反应混合物开始的。Alice®的蛋白质产量基于反应期间的蛋白质表达。因此，我们建议反应持续时间为48小时。Alice®提供了两种表达载体，即PALICE01和PALICE02，它们是根据感兴趣蛋白质的靶向性而使用的（见第5页）。当与Alice®表达系统一起使用时，它们被特别定制以提供的蛋白质产量。PALICE01用于在ALICE®胞质部分中的表达。以palice02为靶向微粒体提供了通过翻译后修饰如二硫键来表达蛋白质的机会。
除筛选外，alice®系统还可用于大规模表达靶蛋白。
Alice®系统的潜在附加应用包括：
•目标蛋白特性
•蛋白质优化
•突变筛选
•蛋白质-蛋白质相互作用
•表达分析
•蛋白质定位分析
•蛋白质结构分析
•翻译后修饰分析
•代谢组学
•除草剂筛选
Alice®表达式向量
Alice®提供了两个不同的表达式向量：palice01和palice02。palice01作为细胞溶质表达载体，而palice02使用信号肽作为微粒体靶向。
微粒体是在Alice®反应混合物的制造过程中，由部分内质网形成的类似细胞器的结构。利用蜂毒素信号肽，蛋白质可以转运到这些细胞器中（Buntru等人，2014），在那里进行翻译后修饰。随后，微粒体可以被破坏以恢复表达的蛋白质（见第9页）。palice01和palice02也可以作为表达的阳性对照，分别在细胞溶胶和微粒体中加入alice®反应混合物时表达eyfp。
克隆成栅栏载体制备模板
下面提供了包含PALICE01和PALICE02载体特征的地图（图1），以及感兴趣基因5'和3'方向克隆侧的扩展视图（图2和图3）。
克隆位点允许在t7启动子和5'未翻译区后面插入感兴趣的基因。克隆你感兴趣的基因既可以从现有的载体中分离出来，也可以通过PCR扩增其编码区域来引入适当的限制酶位点。
细胞溶质表达质粒palice01的推荐限制位点为ncoⅠ和kpn i，而微粒体表达质粒推荐限制位点为ncoⅠ/noti或ncoⅠ/kpni。如果使用kpn i进行克隆，请确保打开的阅读框包含一个停止密码子。
dna的纯化
为了促进的转录-翻译反应，需要高纯度的质粒dna制备。因此，强烈建议使用基于阴离子交换色谱法的质粒制备程序（例如Macherey Nagel的Nucleobond®Xtra Midi）。对于基于二氧化硅基质的质粒dna制备试剂盒，我们建议在转录-翻译反应之前添加rnase抑制剂或苯酚氯方纯化模板。根据插入物的大小，通过添加适当体积的5 mm Tris缓冲液（pH8.5），将终质粒DNA调整到所需浓度。反应混合物中的终浓度应为5nm。在-20℃下分批储存。耦合转录/翻译反应设置耦合转录-翻译反应的典型反应体积为50微升。
1）选择反应容器：
•Alice®试管=每次反应52微升
•96个半孔板，每个反应的Lid1=50微升
2）准备DNA
从仓库中取出质粒dna模板，并在室温（20-25°C）下解冻。轻轻搅拌，翻转并快速向下旋转，收集试管底部的内容物，然后放在冰上。稀释或浓缩质粒，组装反应的终浓度应为5nm。dna浓度对蛋白质产量有显著影响。
3）解冻Alice®反应混合物
从仓库中取出Alice®反应混合物，并在室温（20-25°C）水浴中解冻。通过倒置试管轻轻混合。不要旋涡！解冻后直接放在冰上。解冻后30分钟内开始反应。将剩余的裂解液直接冷冻在-80°C。不要使用液氮！避免一次以上的冻融循环！