一步法恒温支原体检测试剂盒-上海金畔生物现货
品牌:yisemed
货号:MD001
规格:48Reaction
细胞《一步法恒温支原体检测试剂盒》详细介绍
《一步法恒温支原体检测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品中是否含有支原体污染,该试剂盒仅用于基础科研。
《一步法恒温支原体检测试剂盒》采用*的恒温基因扩增技术和显色技术,对样品的支原体基因组DNA进行恒温扩增,反应完后,通过反应管的颜色即可对结果进行判断。
《一步法恒温支原体检测试剂盒》八大优点
(1) 方便,整个检测过程只需一步即可完成。
(2) 省时,整个检测过程只需1小时,而PCR法通常需要2-3小时。
(3)灵敏度良好,一般比30个循环普通PCR灵敏度高。
(4)无需样品的前处理。由于细胞培养数天后,培养液中经常含有严重抑制PCR扩增的代谢物,所以样品的前处理一般是PCR法*的环节。而RD-RCA扩增不受抑制,无需样品的前处理。
(5)无需样品的离心浓缩,检测只需1微升培养液即可。
(6)无需用到PCR仪、电泳槽、凝胶成像仪、离心机等仪器,整个检测只需一个水浴锅即可完成。
(7)无需电泳,无需接触EB等诱癌物质。根据反应管的指示剂,肉眼即可判断反应结果。
(8)产品稳定性好,冻干型产品可以在室温至少放置2个月,-20 ℃至少可以放置2年。
将有支原体污染的细胞培养液上清用水做系列稀释(RD-RCA做10倍系列稀释、PCR做5倍系列稀释),而后分别用《一步法恒温支原体检测试剂盒》和普通PCR进行支原体检测。
如右图所示,采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》在稀释10000倍后仍呈明显的阳性而普通PCR(30 cycles)在稀释125倍后呈勉强的弱阳性,二者灵敏度至少相差80倍。
另外一个值得高度注意的是:用细胞培养上清原液进行PCR检测居然呈明显的阴性!而原液用水稀释5倍后,PCR却呈阳性。说明:细胞培养上清原液含有强烈抑制PCR的代谢物!
与此形成鲜明对比的是:采用RD-RCA法的《一步法恒温支原体检测试剂盒》却能在细胞培养上清原液中检测出支原体污染!说明:同样的代谢产物虽然强烈抑制PCR却不会抑制RD-RCA的正常扩增。
这是RD-RCA法的巨大优势!如此,RD-RCA就不需要进行样品的稀释或者进行支原体DNA的抽提等的前处理。
特别提醒:
该实验也说明:如果使用的PCR法支原体检测试剂盒没有内参对照,而直接使用细胞培养上清原液进行PCR检测,检测结果即使为阴性,也不能说明其没有支原体污染,极有可能是PCR的扩增被细胞的代谢产物抑制了!这个问题绝大部分进行支原体检测的人员都不会注意,这是利用无内参对照的PCR法进行支原体检测的致命弱点!
【注:由于本公司现在生产的《PCR法支原体检测试剂盒》(货号:PM008),含内参对照,已经可以区分真阴性样品(样品无支原体污染。电泳结果:有内参条带,无支原体特异条带)和假阴性样品(PCR被代谢产物抑制。电泳结果:内参条带和支原体特异条带都没有)。详情请参考本公司生产的《PCR法支原体检测试剂盒》说明书】
有关PCR的扩增会被细胞的代谢产物抑制的问题,Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit(货号MP0035-1 kit)的PCR法支原体检测试剂盒说明书中也特别提到了这点,其强烈建议用试剂盒进行DNA提取后再进行检测。可见这是利用PCR法进行支原体检测过程中普遍遇到的问题,应该引起科研工作者的高度重视!否则,由此引起的假阴性(培养时间越久,概率越高),将使无内参对照的PCR法进行的支原体检测变得毫无意义!
本公司所有恒温基因检测产品主要以冻干品的形式提供(如右图所示)。《一步法恒温支原体检测试剂盒》同样以冻干品的形式提供。
采用先进的冻干技术,将所有扩增成分都冻干在一个0.2 mL的PCR管中,使用时只需加入水化液和待测样品,整个检测过程一步即可完成,非常简单。
此外,由于冻干品的稳定性非常好,可以在室温保存至少2个月,这样非常方便运输和储存,也非常适合在野外或者污染点进行即时检测。该工艺的创新极大的扩展了相关产品的市场应用前景。