encapsula IMD-1011说明书
Immunodox®-Folate (PEGylated)
SKU# IMD-1011
| SIZE | PRICE |
|---|---|
| 2-ml | $850.00 |
| 5-ml | $1,900.00 |
描述
在过去的五十年中，已经使用各种类型的化学方法将诸如抗体，肽，蛋白质或其他反应性配体的分子缀合到脂质体的表面。通常，可以通过N端，C端或可利用的硫（例如， Fab'级分或硫醇化抗体）来实现缀合。并非所有化学方法都具有相同的结合收率和效率，经常要生产生物相容性批次可能是一个挑战。
叶酸结合蛋白（FBP）是一种内源性蛋白，对叶酸具有很高的亲和力。抗体可以通过FBP标记，免疫脂质体可以通过FBP与脂质体表面的叶酸脂质之间的非共价和高亲和力相互作用形成。在这种方法中，已经通过硫醚键与FBP共价连接的抗体与叶酸衍生物脂质体偶联。具有相对较低的分子量（MW〜40 kDa）和单个结合位点可防止脂质体交联。
配方信息
叶酸Immunodox®（聚乙二醇化）
| 脂质组成 | 浓度（mg / ml） | 浓度（mM） | 摩尔比百分比 |
|---|---|---|---|
| 氢化大豆PC | 9.58 | 12.22 | 57 |
| 胆固醇 | 3.19 | 8.25 | 38 |
| DSPE-聚乙二醇（2000） | 2.7 | 0.96 | 4.5 |
| DSPE-PEG（2000）-叶酸盐 |
0.39 | 0.12 | 0.5 |
| 全部的 | 15.86毫克/毫升 | 21.55毫米 | 100 |
| 缓冲液，脂质体大小和封装的药物浓度 | 规格 |
|---|---|
| 内部缓冲区 | 硫酸铵 |
| 外部缓冲区 | 磷酸盐缓冲溶液 |
| pH值 | 7.4 |
| 脂质体大小 | 100纳米 |
| 封装的阿霉素 | 2毫克/毫升（3.45毫米） |
结合方案
材料和设备
为了将用FBP标记的抗体或蛋白质与Immunodox®-叶酸脂质体偶联，您需要：
- 建议使用实验室涡旋混合器。
- 透析需要实验室磁力搅拌器。
- 具有适当MWCO的Float-A-Lyzer®可以轻松清除游离和非结合蛋白/肽/配体的脂质体结合配体。您需要确保MWCO低于1,000,000道尔顿。在1,000,000道尔顿时，透析膜上的孔径接近100 nm，因此可以透析您的脂质体。您不能盲目使用透析盒。在使用离心柱或透析盒之前，请先了解该技术。如果未使用正确的MWCO，则可能会失去全部准备。对于此协议，我们建议MWCO为300,000道尔顿。
制备方法
- 叶酸中的总脂质浓度为21.55 mM。脂质体中0.5％mol的脂质包含PEG-叶酸酯基团，并且只有一半暴露于脂质体的外部，这等于0.053 mM的反应性结合脂质。对于2ml体积的脂质体，其等于1.08×10 -7 mol，对于5ml体积的脂质体，其等于2.69×10 -7 mol的PEG-叶酸酯。 将FBP标记的抗体与PEG-叶酸酯脂质的摩尔比添加为1:20。
- 在室温下将Immunodox®-Folate与抗体-FBP一起孵育1小时。
- 透析除去非结合的抗体，蛋白质，肽或配体。与尺寸排阻色谱柱相比，我们更喜欢透析。透析的过程要慢得多，但是从非结合蛋白/多肽/配体中清除了制备物后，免疫脂质体的损失将降低。旋转柱要快得多，但您很容易损失掉旋转柱上50％以上的脂质体。我们建议使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根据蛋白质，配体，抗体或抗体片段的分子量选择合适的MWCO盒。 笔记：如果决定使用透析盒，则需要确保MWCO低于1,000,000道尔顿。在1,000,000道尔顿时，透析膜上的孔径接近100 nm，因此可以透析您的脂质体。您不能盲目使用透析盒和离心柱。它们有各种尺寸，您需要明智地选择正确的尺寸。在1升pH 7.4的PBS中透析免疫脂质体溶液8小时。用新鲜的1升PBS更换透析缓冲液，再透析8小时。完成此步骤后，即可使用旋转柱或透析盒来使用已清理的免疫脂质体。如果未使用正确的MWCO，则可能会失去全部准备。
脂质体颗粒计算器
Immunodox®脂质体是单层的，尺寸为100 nm。脂质体的摩尔浓度为21.55mM。通过具有 脂质体直径（nm）和脂质浓度（µM），您可以计算出一个脂质体中脂质的总数和一毫升脂质体溶液中脂质体的数目。要使用计算器，请单击 此处。
技术说明
- 阿霉素是具有λex 470 nm和λem 585 nm的荧光分子。如果您在抗体或配体上使用荧光标签，则需要确保它们不会互相干扰。
- 请记住，表面含有叶酸的脂质体的主要用途是靶向细胞上的叶酸受体。使用标记有FBP的抗体/蛋白质或配体制备免疫脂质体是非常利基的应用。
- 由于暴露于低pH下叶酸和FBP之间的亲和力降低，免疫脂质体在暴露于内体小室的低pH环境后通过内吞作用而被内在化后可能会解体。通过允许将内化的脂质体分选到适当的亚细胞区室和/或促进药物分子从脂质体的细胞内释放，这种内化触发的解偶联可能有益于在细胞水平上递送脂质体药物。
- 可以使用尺寸排阻旋转柱（例如Sepharose®CL-4B）代替Float-A-Lyzer®透析盒。但是，在纯化过程中，大量的脂质体会粘在色谱柱上，因此我们强烈建议使用透析法，而不是使用大小排他的珠子。
- 如果您使用的是疏水的配体或肽，则建议将其溶解在DMSO或DMF中，然后向其中添加缓冲液。建议溶液中使用的DMSO或DMF量不超过5％。DMF和DMSO均与脂质体相容，并且也可与水混溶。其他有机溶剂（例如乙醇和氯方）与脂质体不相容，会导致脂质体裂解。如果终使用DMSO或DMF，那么在完成偶联反应后，您需要从脂质体中除去DMSO和DMF。为此，您需要使用由再生纤维素膜制成的透析盒。注意：并非所有膜都与DMF和DMSO兼容。我们建议使用Slide-A-Lyzer™MINI透析设备 由ThermoFisher生产的再生纤维素膜制成的MWCO为2K。去除DMSO或DMF后，您可以使用Float-A-Lyzer®透析设备进行清理准备的后一步。
- 脂质体应保持在4°C且切勿冷冻。