kainos FGF-23 ELISA试剂盒说明书
FGF-23 ELISA试剂盒是两点酶联免疫吸附测定试剂盒，用于测量血清中的FGF-23。两种特异性鼠单克隆抗体与全长FGF-23结合。一种抗体固定在微量滴定板孔上以进行捕获。另一抗体与HRP（辣根过氧化物酶）缀合以进行检测。
在反应中，将含有FGF-23的样品与固定的抗体在微量滴定孔中孵育。样品中的FGF-23被抗体捕获。在该反应结束时，将孔洗涤以除去未结合的FGF-23和其他组分。
在第二次反应中，将这种固定化的FGF-23与HRP标记的抗体孵育，形成“三明治”复合物：
抗FGF-23抗体-N末端FGF-23 C末端-HRP标记的抗FGF-23抗体
在该反应结束时，将孔洗涤以除去未结合的组分。
在酶反应中，将固定在孔上的三明治复合物与底物溶液一起孵育，然后通过分光光度滴定板读数器进行测量。与孔结合的复合物的酶促活性与样品中FGF-23的量成正比。
通过将吸光度与FGF-23标准品的每种浓度作图来绘制标准曲线。从该曲线确定样品中FGF-23的浓度。
问答环节
A.产品信息
1）FGF-23 ELISA试剂盒中包含的测试数量/价格
| 产品名称 | 货号＃ | 包装尺寸 | 价钱 |
|---|---|---|---|
| FGF-23 ELISA试剂盒 | CY-4000 | 96次测试 | 100,000日圆 |
| FGF-23标准1 | CY-4053 | 80 mL×1 | 5,000日圆 |
注意：此价格不包括运输和手续费
2）FGF-23 ELISA试剂盒规格
该试剂盒使用“夹心” ELISA和抗人FGF-23小鼠单克隆抗体来测量血清FGF-23的水平。该试剂盒具有高灵敏度，低检测限为3 pg / mL，定量范围为3-800 pg / mL。
包装尺寸
| 数量 | 包装尺寸（长x宽x高） | 大约 重量 |
|---|---|---|
| 1套 | 25x37x29厘米 | 6.0公斤 |
| 2套 | 25x37x29厘米 | 6.5公斤 |
| 3套 | 35x42x30厘米 | 7.5公斤 |
| 4套 | 35x42x30厘米 | 8.0公斤 |
| 5套 | 35x42x30厘米 | 9.0公斤 |
| 10套 | 37x66x32厘米 | 15.0公斤 |
C.使用注意事项
1）测试样品的储存条件是什么？
使用新鲜的血清样品。如果您不能立即测试样品，请将其保存在-70°C以下。避免解冻/重新冻结周期。
在我们的实验室测试中，在冰箱中放置13天后，给定样品的活性降至86.6％。样品可以在-80°C下保持稳定约三年，但在-20°C下不能保证稳定性。
我们已经确认多六个融化/重新冻结周期可能不会影响活性，但是我们建议小批量冷冻样品以大程度地减少融化/重新冻结周期。
2）我可以使用血浆样品吗？
虽然可以使用FGF-23 ELISA试剂盒测试血浆和血清，但我们建议使用血清。
3）我可以使用试剂盒测试动物样本吗？
FGF-23 ELISA试剂盒可用于测量小鼠，大鼠或猴子的血液FGF-23水平。
4）试剂盒中是否包含任何基于汞的防腐剂？
FGF-23 ELISA试剂盒不使用硫柳汞等基于汞的防腐剂。标准溶液，稀释溶液，酶标抗体溶液和浓缩洗涤溶液均使用Kathon™CG作为防腐剂。
5）操作注意事项
必须为每次测试准备校准曲线。
如果测试了多个样品，则反应时间必须保持一致。
一级反应必须在搅拌板的同时进行。搅拌前应将板密封。
在洗涤过程中必须遵守以下预防措施：
请勿在板上放置洗涤液。
一旦从孔中充分去除了清洗溶液，请立即进行下一步。
试剂
- 1）FGF-23抗体包被的微孔板（FGF-23微孔板）
96孔微孔板（12条，每条8孔）被FGF-23鼠单克隆抗体包被。
- 2）HRP标记的FGF-23抗体（FGF-23结合物）
12 mL鼠抗辣根过氧化物酶结合的FGF-23单克隆抗体，带有防腐剂。
该试剂应在2-10℃下保存并避光。
- 3）FGF-23标准品（Std1〜Std7）
12 mL（Std1）和0.5 mL（Std2〜Std7）缓冲的FGF-23含防腐剂。
7瓶FGF-23在具有防腐剂的缓冲碱中。
- 4）分析稀释剂（Assay Diluent）
12 mL缓冲液。
- 5）显色剂（底物）
12 mL的过氧化氢尿素四甲基联苯胺TMBZ。
- 6）FGF-23洗涤缓冲液（10倍浓缩液）
53 mL含防腐剂的缓冲表面活性剂10倍浓缩液。
使用前，用去离子水将内容物稀释至10倍并充分混合。
- 7）终止溶液（停止溶液）
12 mL 0.5 mol / L硫酸。
- 8）
套件中包括三个平板封口机。
＊这些试剂应在2－10℃黑暗条件下保存。
使用前，将所有试剂置于室温下。
测定方法
- 1）在所有要使用的孔中加入50μL分析稀释剂。
- 2）在每个孔中加入50μLFGF-23标准品或样品，并用板密封剂覆盖板。
- 3）在平板混合器上于室温下孵育平板120分钟。
- 4）拆下平板封口机。
除去反应溶液后，向每个孔中加入300μL洗涤缓冲液，然后丢弃洗涤缓冲液。
重复此过程4次。轻拍纸巾或类似吸收材料上的孔板，以除去孔中残留的水滴。
- [注1]
为了避免在添加洗涤缓冲液时孔变干，请使用多通道移液器或类似设备快速工作。
- [注2]
确保移液器吸头不会划伤孔底部，以尝试从孔中除去溶液。
- 5）在每个孔中加入100μLFGF-23偶联物，并用板密封剂覆盖板。
在平板混合器上于室温下孵育平板60分钟。
- 6）以相同的方式重复4）。
- 7）将100μL底物添加到每个孔中，并用板密封剂覆盖板。
在黑暗中于室温下孵育平板30分钟。
- 8）拆下平板封口机。
立即将100μL终止溶液添加到每个孔中。
用微量滴定板读数器在10分钟内读取450 nm（第二波长600-650 nm）的吸光度。
加入50μL分析稀释液。
加入50μLFGF-23标准品或样品。
在平板混合器上于室温下孵育120分钟。
抽吸并清洗4次。
加入100μLFGF-23偶联物。
在平板混合器上于室温孵育60分钟。
抽吸并清洗4次。
在每个孔中添加100μL底物。
在黑暗中于室温下孵育30分钟。
加入100μL终止溶液。
在10分钟内读取吸光度。
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