labbioreagents REK-01-1215说明书
利妥昔单抗 （美罗华®）（人）ELISA试剂盒
Rituximab (Mabthera)
(Human) ELISA Kit
目录号：REK-01-1215规格：1板（96孔）
版本：02
仅供研究使用
一般描述
利妥昔单抗ELISA试剂盒是一种夹心酶联免疫分析法，用于定量测定血清和血浆中的利妥昔单抗，具有较高的灵敏度和特异性。
试剂盒性能
· 灵敏度：10 ng/mL
· 分析范围：10-250 ng/mL
· 交叉反应：与天然血清免疫球蛋白无交叉反应
· 回收率：已知浓度的正常人血清样品为80-120%。
· 精密度
（CV(%)= SD/平均值×100）
Ø 批内：CV < 20%
Ø 批间：CV < 20%
提供的材料
组件列表
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组件 |
数量 |
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共价结合ELISA板 |
1个平板 |
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利妥昔单抗 |
10 µg |
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捕获抗体(10X) |
700 µL |
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检测抗体(10X) |
700 µL |
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链霉亲和素(HRP)（避光） |
12 mL |
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平板包被缓冲液 |
15 mL |
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封闭缓冲液 |
15 mL |
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试验稀释剂 |
40 mL |
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TMB底物（避光） |
12 mL |
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终止液 |
12 mL |
储存说明
从运输之日起，整个试剂盒可在4 ℃下储存长达12个月。
试验方案
分析前，使所有试剂、微孔板和样品恢复至室温。
1. 使用平板包被缓冲液将捕获抗体（未结合的抗利妥昔单抗抗体）稀释10倍。用50µL/孔制备的捕获抗体包被96孔板，并在4 ℃下孵育过夜，同时振摇。
2. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。
3. 向各孔中加入100µL封闭缓冲液，封闭平板，并在室温下孵育1小时。
4. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。
- 用试验稀释剂稀释利妥昔单抗预加标血清或血浆，制备标准品(10–250 ng/mL)。向适当孔中加入50µL标准品、对照品和稀释样品。盖上微孔板，在室温下孵育1小时。
6. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。
- 用试验稀释剂将检测抗体（生物素偶联抗利妥昔单抗检测抗体）稀释10倍。向各孔中加入50µL制备的检测抗体溶液，并在室温下孵育1小时。
8. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。
9. 加入100µL链霉亲和素(HRP)，并在室温下于暗处孵育平板30 min。
10. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。
11. 加入100µL TMB底物溶液，并将平板在室温下避光孵育20 min。
12. 加入100µL终止液终止反应。
13. 在20 min内，在酶标仪中读取设定为450 nm的吸光度（参考波长为650 nm）。
技术提示
· 使用前将试剂恢复至室温
· 不同批次的试剂在使用时不得混合。
· 避免样本和试剂之间的任何污染。
· TMB保持无色直至加入平板。TMB避光保存。
- 加入终止液后，孔中的显色颜色将立即从蓝色变为黄色。显示绿色的孔表示终止液和TMB未充分混合。
- 绘制各标准品的OD450/650 nm作为Y轴，对应利妥昔单抗浓度作为X轴，构建四参数逻辑(4 pL)标准曲线。在OD450/650 nm与利妥昔单抗浓度不能很好匹配的情况下，请使用五参数逻辑(5 pL)或具有适当加权因子的点对点生成标准曲线。
安全要求
· 处理试剂和样本时，穿戴适当的PPE（例如手套、实验室工作服）。
- 本试剂盒含有人源性组分。发现这些材料对HBsAg、HCV抗体以及HIV 1/2抗原和抗体无反应性。然而，这些材料应被视为具有潜在传染性，因为没有试验可以保证*没有传染性因子。
- 避免直接接触TMB和终止液，这可能会引起皮肤/眼睛刺激。如果与终止液和底物溶液接触，请用水*清洗皮肤/眼睛，并在必要时就医。
· 根据适用的国家法规要求处置消耗材料和未使用的内容物。
平板布局
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12 |
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6 |
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4 |
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