systembio PB513B-1说明书

发表于由

 

 

 

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro PiggyBac cDNA Cloning and Expression Vector

systembio PB513B-1说明书

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-PiggyBac cDNA克隆及表达载体
使用PiggyBac轻松传递你感兴趣的基因-这个载体包括GFP和puro报告者，并用强CMV启动子驱动你的cDNA
单次转染制备转基因细胞系
一次转染整合多个PiggyBac载体
将表达盒插入人、小鼠和大鼠细胞
提供几乎任何大小的DNA插入，从10-100 kb
从PiggyBac载体中选择，这些载体从组成性或诱导性启动子中表达你感兴趣的基因，并包括多种标记

PB513B-1

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro cDNA cloning and expression vector

10 µg

 

概述
轻松一致地进行转基因
SBI的PiggyBac转座子系统具有一致性和易用性，包括克隆和表达载体，这些载体带有一系列标记以及组成性和诱导性启动子。PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-PiggyBac cDNA克隆和表达载体（Cat.#PB513B-1）可从CMV强启动子中表达你感兴趣的基因，并从EF1α启动子中表达GFP报告子和嘌呤霉素抗性。

 

 

 

为什么要使用PiggyBac转座子系统？

简单，一致的转基因，不受货物大小的限制 -对于简单，一致且不受货物大小限制的转基因，SBI的PiggyBac转座子系统是的选择。该系统由PiggyBac载体和Super PiggyBac转座酶组成，后者识别转座子特异的反向末端重复序列（ITR），并有效地将ITR和插入的DNA整合到TTAA位点的基因组中。超级PiggyBac转座酶通过Super PiggyBac转座酶表达载体传递到细胞中，该载体与一种或多种PiggyBac载体共转染。

无占用空间的清除方法，不留下任何PiggyBac序列 -除了易于使用，一致性和对DNA插入片段大小的限制之外，该系统与众不同的是它能够在无占用空间的情况下逆转整合反应方式—仅使用Exhibition PiggyBac转座酶（目录号PB220PA-1），即可去除Super PiggyBac转座酶整合到基因组中的ITR和货物，而无需保留原始的基因组序列。

  • 一次转染即可制作转基因细胞系
  • 在单个转染中整合多个PiggyBac载体
  • 将表达盒插入人，小鼠和大鼠细胞
  • 提供几乎任何大小的10 – 100 kb DNA插入片段
  • 从PiggyBac载体中进行选择，这些载体可从组成型或诱导型启动子表达您的目标基因，并包含多种标记
  • 使用PiggyBac qPCR拷贝数试剂盒（＃PBC100A-1）确定整合事件的数量

客户协议
学术客户可以购买PiggyBac转座子系统组件进行内部研究，以无限期使用，而商业客户必须签署客户协议，获得为期四个月的有限使用许可，以评估该技术。

 

 

PiggyBac转座子系统的剪切和粘贴机制

高效的PiggyBac转座子系统使用剪切粘贴机制将DNA从PiggyBac载体转移到基因组中。如果只需要临时的基因组整合，则可以将Excision的PiggyBac转座酶瞬时表达，以无污染地去除插入片段，从而重建原始的基因组序列。

 

图1. PiggyBac转座子系统的剪切和粘贴机制。

  • 超级PiggyBac转座酶与PiggyBac克隆和表达载体中的特定反向末端重复序列（ITR）结合，并切除ITR和插入的DNA。
  • 超级PiggyBac转座酶将ITR表达盒式ITR片段插入TTAA位点的基因组中。
  • 仅用于Excision的Super PiggyBac转座酶可用于从基因组中去除ITR表达盒式ITR片段，从而实现无足迹去除

支持数据

一种转染可以整合一个或多个可以精确去除的基因

 

图2.用超级PiggyBac转座酶和单启动子和双启动子PiggyBac载体进行高效转基因。（前四幅图）将超级PiggyBac转座酶表达载体（目录号PB210PA-1）和双重启动子PiggyBac克隆和表达载体（目录号PB513B-1 ）共转染HeLa细胞证明了SBI的高效整合PiggyBac转座子系统。选择嘌呤霉素十天后，仅用Super PiggyBac转座酶（+ PB，右两幅图）共转染的细胞显示出强劲的生长和GFP荧光。（底部四个图）与Super PiggyBac转座酶表达载体（Cat。＃PB210PA-1）和单个启动子PiggyBac克隆和表达载体（-Cat。＃PB531A-2）进入HEK293细胞进一步证明了SBI的PiggyBac转座子系统可实现高效整合。生长7天后，接受Super PiggyBac转座酶表达载体（+ PB，右两幅图）的大多数细胞均为RFP阳性。

 

图3.同时集成多个PiggyBac Vector也是高效的。方法：将三种不同的PiggyBac转座子载体（Cat。＃PB513B-1，Cat。＃PB533A-2和Cat。＃PB531A-2）与Super PiggyBac转座酶表达（左图）或不与（右图）一起共转染。矢量（货号PB210PA-1）进入人类HT1080细胞。选择嘌呤霉素和新霉素持续7天。用Super PiggyBac转座酶表达载体共转染的细胞是puro和neo耐药的，GFP阳性，RFP阳性。嘌呤抗性的背景GFP阳性细胞源于嘌呤霉素选择过程中的随机PB513B-1整合。这些细胞中非PiggyBac介导的整合率极低，并且未鉴定出RFP阳性细胞。