arcticzymes Cod UNG说明书
Cod Uracil-DNA Glycosylase
鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶
来自大西洋鳕鱼的鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶（Cod UNG）是通过中度热处理*不可逆地灭活的UNG酶。该酶在含有修饰的Cod UNG基因的重组大肠杆菌（ung-）菌株中产生。
高鲁棒性
不耐热，在55°C时*不可逆转地失活
污染控制
RT-PCR，RT-qPCR，qPCR和kPCR中污染控制的理想选择
PCR后分析
启用PCR后分析
真正的不耐热尿嘧啶DNA糖基化酶
当今市场上有几种可商购的尿嘧啶-DNA糖基化酶。如果您不打算在PCR后进一步分析PCR产物，则其中大多数是细菌来源的，效果很好。但是，如果要存储PCR产物用于下游分析（例如克隆和测序），则UNG的重新激活和随后PCR产物的降解是大多数商用UNG的问题。来自ArcticZymes的Cod UNG是当今一种可*加热且不可逆地失活的UNG。
图1.*，不可逆地热灭活的UNG是Cod UNG。
如图1所示，其中测试了各种UNG在热灭活后的残留活性。用dUTP和1个单位的5种不同的市售UNGs进行PCR。PCR后，将PCR产物在室温下孵育各种时间间隔，然后加热并随后冷却。PCR产物的凝胶电泳显示UNG重新活化，因此，除了Cod UNG外，所有测试的所有UNG的PCR产物都严重降解。
图2.用1 U Cod UNG（A）或1 U E.coli UNG（B）预处理并在室温下孵育3小时的测序PCR产物的色谱图。只有Cod UNG保留序列质量不变。
通过对PCR产物进行测序，进一步评估了PCR后序列的质量和完整性。用添加到预混物中的四种不同的市售UNG之一进行PCR。PCR后，将PCR产物在室温或4°C下以不同的时间间隔孵育。随后将样品纯化并测序。*分析了序列数据，重点是由于UNG重新激活而降低了序列质量。如图2和图3所示，用UNG处理的样品，除用Cod UNG处理的样品外，由于UNG的再活化而显示出严重的PCR产物降解。
0h6h24hControlCod UNGSupplier ASupplier BSupplier C0100200300400500600700800900Amplicon length (bp)
| 0小时 | 6小时 | 24小时 | |
|---|---|---|---|
| 控制 | 789 | 779 | 774 |
| 鳕鱼 | 781 | 785 | 785 |
| 供应商A | 784 | 786 | 66 |
| 供应商B | 792 | 48 | |
| 供应商C | 801 | 221 |
图3. UNG重新激活导致序列降解。经各种UNG预处理并在室温下孵育的PCR产物的序列数据。除与Cod UNG一起温育的样品外，所有样品均显示UNG的重新活化和PCR产物的严重降解。
聚合酶链反应
Cod UNG适用于所有市售的预混料。确保在先前的PCR实验中使用了包含dNTP混合物的dUTP。
- 将0.25 U Cod UNG直接添加到25 µl PCR反应中
- 在室温下预孵育5分钟
- 运行PCR
在分析之前，将PCR产物在-20°C或4°C的温度下保存尽可能长的时间。
一站式RT-PCR
- 将0.2 U Cod UNG直接添加到您的20 µl RT-PCR反应中
- 在室温下预孵育5分钟
- 在50- 55°C下逆转录您的RNA
- 运行PCR
物产
Cod UNG适用于所有市售的预混料。确保在先前的PCR实验中使用了包含dNTP混合物的dUTP。
- 将0.25 U Cod UNG直接添加到25 µl PCR反应中
- 在室温下预孵育5分钟
- 运行PCR
在分析之前，将PCR产物在-20°C或4°C的温度下保存尽可能长的时间。