sinobiological STF02说明书

发表于由

 

sinobiological STF02说明书

Sinofection Transfection Reagent

Cat: STF02

中转简介

Sinofection是一种基于阳离子聚合物的优异转染试剂。它已成功应用于各种细胞系的各种规模的转染。与市场上*的转染试剂相比，Sinfection具有更高的蛋白表达水平和更低的细胞毒性。它是用于瞬时和稳定转染的重组蛋白生产的理想选择。它与血清，细胞类型，规模和储存温度的广泛兼容性为您提供了研究和生产的便捷和保证。

 

 

特征

 

  • 出色的蛋白质表达
  • 粘附细胞和悬浮细胞的出色转染，可用于多种细胞系
  • 从微量滴定板到生物反应器，DNA转染（瞬时/稳定）的显着应用
  • 简单快速的程序
  • 低细胞毒性

 

-优质的蛋白表达

事实证明，与*竞争对手的产品相比，Sinfection的转染可在多种细胞系中提供更高水平的蛋白质表达。对于大规模生产重组蛋白，Sinfection是实现适产量的宜选择。此外，Sinfection还具有很高的转染效率，可确保成功进行转染。

图1在9个细胞系中比较了使用Sinfection和其他竞争者进行瞬时转染的蛋白表达水平，其中6个显示出被Sinfection（A〜F）转染的优异结果。通过ELISA测定法确定蛋白质表达水平。竞争对手转染试剂的转染遵循制造商的规程。

 

-贴壁细胞和悬浮细胞的出色转染，适用于多种细胞系

 

-从微量滴定板到生物反应器的规模上，DNA转染（瞬时/稳定）的显着应用

通过Sinfection在96孔板中的0.1mL到生物反应器中的50L的各种规模的瞬时或稳定转染，已经成功表达了数百种重组抗体和蛋白质。在所有规模的转染应用中使用Sinofection，将在很大程度上节省研究和生产成本。

 

-操作简便快捷

1，转染规程（35mm培养皿）：

（1）细胞的制备

  • 贴壁细胞
    • 转染前一天，每35毫米培养皿将0.2–2×10 6个细胞置于培养基中。在37°C（5％CO 2）下孵育过夜。转染前细胞的融合度应为50–80％。
  • 悬浮细胞
    • 在35毫米培养皿中以5×10 4 / mL到1×10 6 / mL 的密度将2 mL新鲜传代的细胞平板接种。转染时，悬浮细胞应处于对数生长期。在37°C（5％CO 2）下孵育细胞过夜。细胞数取决于您的需要和要转染的细胞类型。

（2）Sinfection＆DNA复合物的制备

用适当的稀释剂（如PBS，NaCl溶液，葡萄糖溶液，DMEM，有或无血清的等渗溶液）稀释DNA，以等渗形式稀释至浓度为20μg/ mL（建议优化），总体积为250μL。

在250μL培养基中稀释适量的Sinofection。

将稀释的DNA与稀释的Sinofection混合（总体积= 500μL）。轻轻混合并在室温下孵育20分钟（溶液可能看起来混浊）。

（3）转染

将500μL复合物逐滴添加至细胞和培养基中。轻轻晃动培养皿或孔，以确保均匀分布。

在蛋白质表达测定之前，将细胞在37°C的CO 2培养箱中培养18-48小时（通常在72小时后达到高表达）。

2，转染方案（瓶）：

转染细胞以表达蛋白质此协议通常用于将DNA转染到培养在烧瓶中的293 EBNA或CHO细胞中。使用前使用无菌DNA或对DNA进行过滤灭菌（过滤后重新定量DNA）。

所有量均以每瓶为基础，在125 mL摇瓶中培养30 mL；有关其他格式，请参见表2。按比例放大或缩小转染。

 

表2.使用Sinfection扩大或缩小转染。注意：实际条件应通过实验优化。

  1. 以0.3×10 5细胞/ mL的速率通过293细胞，以175 rpm的速度摇动。72小时后，将细胞稀释至1.0×10 6细胞/ mL，以175 rpm摇动。4小时后转染。
  2. 以0.3×10 5细胞/ mL的速度通过CHO细胞，以175 rpm的速度摇动。48小时后，将细胞稀释至1.0×10 6细胞/ mL，以175 rpm摇动。4小时后转染。
  3. 用适当的稀释剂（例如含Mg 2+的 PBS ，150 mM NaCl，300 mM葡萄糖，有或无血清的DMEM培养基）稀释稀释所需的质粒DNA量。在室温下孵育5分钟。将所需的Sinfection体积添加到稀释的DNA中，并轻轻混合以确保总体积为1.5〜3 mL。
  4. 在室温下将混合物孵育10-20分钟，以形成复合物。孵育时间不要超过20分钟。
  5. 向装有细胞的125mL烧瓶中缓慢加入1.5〜3 mL DNA-脂质混合物，同时缓慢摇动烧瓶。
  6. 对于293细胞和CHO细胞，将转染的细胞培养物在设置为175 rpm的定轨振荡器上于37°C，8％CO 2孵育。

 

 

-低细胞毒性

Sinofection显示出极低的细胞毒性，该毒性已通过内部WST-8测定法针对每批进行测试和验证。WST-8测定基于线粒体脱氢酶对水溶性四氮唑（WST）的比色还原

甲dye染料溶液的吸光度与活细胞数成正比。与常用的WST-1方法相比，WST-8测定的灵敏度更高，而甲dye染料的溶解度和稳定性更好。

图3.分别用L2K和Sinfection转染的HeLa细胞和DG44细胞的显微镜比较。按照制造商的建议进行转染。

图4. Sinofection和L2K对4种细胞系的细胞毒性比较。按照制造商的建议进行转染。

 

 

质量控制

 

  • 转染效率：
    • Sinofection已针对293E细胞株进行了大量测试，以确保一致性和有效性。使用2.8μL的Sinofection，用0.6μg的rhFc表达质粒转染24孔板中的85％融合293E细胞。
  • 无菌性：
    • Sinofection在无菌条件下生产和包装，并通过0.22μm无菌过滤器过滤，用于后一步。
  • 细胞毒性：
    • 通过内部WST-8分析评估Sinfection的细胞毒性。

 

使用指南

 

  • 应用：
    • 重组蛋白/抗体的表达与纯化
    • 功能基因研究
    • 功能蛋白研究
    • 基因治疗
    • 转基因动物模型
  • 存储：
    • Sinofection可以在2℃-8℃下保存两个月，而没有发现活性下降。抗体产品自收到之日起在-20℃至-70℃下保存可稳定十二个月。耐受冻融循环。