btxonline PROTOCOL 0024说明书

PROTOCOL 0024

电解槽机械手ECM 600电穿孔协议
乳球菌亚种。乳酸菌LM0230
DNA:pGB301

ECM 630电协议

电解槽机械手ECM 600电穿孔协议
乳球菌亚种。乳酸菌LM0230
DNA:pGB301
细胞准备：
生长培养基：M17 Glu或M17 Lac
温度：37摄氏度
电池密度：5 x 1010 CFU/ml
温度：冰镇
洗涤程序：颗粒5500 x g，4oC，10分钟
洗涤1：再次洗涤，10毫升无菌冷dd-H2O
颗粒1200 x g至4oC，10分钟
洗涤2：再次洗涤，10毫升无菌冷dd-H2O
颗粒1200 x g至4oC 15分钟
洗涤3：再次洗涤，1毫升无菌冷dd-H2O
4oC下颗粒大速度3分钟
终稀释：再次使用1.25毫升无菌冷dd-H2O
（等份可在冰上保存不超过两小时）

电穿孔设置：
选择方式：T 2.5kV/电阻高压（HV）
设置电容：C高压时默认设置为50μF
设置电阻：R5（129欧姆）
腔室间隙：BTX一次性反应杯P/N 610（1mm间隙）
BTX扁平封装室P/N 486（0.56 mm间隙）
设置充电电压：S如果使用1毫米，设置1.70千伏
如果使用0.56毫米，设置0.95千伏
估计场强：17千伏/厘米
期望脉冲长度：t 5毫秒
电穿孔程序：
样品体积：70μl
转染体积：0.003-0.94μg
工作温度：0oC-电穿孔前在冰上冷却装满反应杯
脉冲：按A启动自动充电和脉冲序列
稀释介质：M17-葡萄糖肉汤系列稀释液1:5，1:10，1:100
孵育：30oC，2小时
选择方法：M17-Glu琼脂上的抗生素选择板
结果：1 x 103
转化子/μg DNA
参考文献：MyIntyre DA and Harlander SK，应用与环境微生物学，55（3）：604-610，1989（BTX ID#447）