invitek-molecular 土壤微生物dna提取试剂盒说明书

Instructions for useInvisorb® Spin Soil DNA Kit

该产品用于使用旋转柱技术手动分离土壤样品中微生物的DNA。

用户实验室设备提供的试剂和设备：

•微型离心机（所有方案均通过5415 D Eppendorf离心机验证）

•可选：离心15或50 ml

•热振动器（37°C-95°C）

•量筒（250 ml）

•一次性手套

•移液管和移液管尖

•涡流混合器

•反应管（1.5 ml、2.0 ml）

液体和溶剂：

•DNase/RNase游离水

•96-100%乙醇（非变性）

•异丙醇*

*用2-丙醇验证试剂盒；Carl Roth的Rotipuran®>99.7%，p.a.，ACS，ISO（订单号6752）

预期用途

Invisorb®旋转土壤DNA试剂盒是一种基于旋转柱技术的核酸提取试剂盒，用于从土壤样品中分离和纯化微生物DNA。相关的样品材料，如降解的植物材料或沙子也可用于样品提取。

该产品仅供专业人员使用，如实验室技术人员、医生和受过分子生物学技术培训的生物学家。

纯化DNA的产量和质量取决于细菌含量、样品来源和储存。土壤样品的性质和成分差异很大。腐殖酸含量、植物降解产物的比例和许多其他参数影响微生物组成，从而影响DNA产量。典型产率为1–10µg。

下游应用：

分离的核酸的产量和质量通常适用于大量分子诊断应用，如PCR技术、微生物组分析（NGS）和杂交方法。下游应用应根据各自制造商的规范进行。

原则和程序

1.溶解样品

土壤样品在高温变性条件下在裂解缓冲液P中裂解。

植物或动物源的生物材料在室温下裂解，细菌细胞和其他微生物的生物材料通过在90°C下孵育而有效裂解，建议对难以裂解的细胞（如革兰氏阳性菌）采用加热步骤。此外，添加氧化锆珠以提高裂解效率。

2.去除PCR抑制剂和蛋白质消化

裂解后，土壤中存在的DNA降解物质和PCR抑制剂被吸附到InviAdsorb基质上。InviAdsorb位于预先填充的安全锁定管中，必须将裂解液放入其中。结合的污染物和细胞碎片通过离心法造粒。上清液含有预纯化的DNA。

将蛋白酶K添加到上清液中以在高温下消化和降解蛋白质。

3.结合核酸

通过向裂解液中加入结合缓冲液A，调节最佳结合条件。然后将每种裂解物应用于RTA旋转过滤器，并将核酸吸附到膜上。

4.清洗以去除残留污染物

使用洗涤缓冲液I和洗涤缓冲液II有效地洗涤污染物，同时核酸仍与膜结合。

5.洗脱DNA

使用50-100µl洗脱缓冲液从RTA旋转过滤器中洗脱核酸。