Mohs IHC 程序

莫氏冷冻组织的标本制备

1. 将标本嵌入 OCT 中的低温恒温器内。

2. 在 4-5 µm 处切割切片并安装在带正电的载玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 载玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 盖间隙载玻片 (BSB 7006) 的下三分之一处。

3. 在室温下风干载玻片 2 分钟，然后在培养箱或干浴中在 60°C 下孵育载玻片 3 分钟。

4. 在室温下用丙酮或 10% NBF 固定 2 分钟。如果使用 Bio SB Mohs ImmunoDigestor，使用 10% NBF 10% 会产生更好的形态。

5. 对于固定在丙酮中的载玻片，让它风干。对于 NBF 中的幻灯片，用蒸馏水冲洗并风干。

莫氏冷冻组织的预处理

1. 将载玻片转移到 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 缓冲液中。

2. 使用 Mohs ImmunoDigestor 进行 PIER、蛋白水解消化 1 分钟。在室温下。

3. 用 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 缓冲液冲洗。

IHC 检测程序

1. PIER 后，将载玻片转移至 ImmunoDNA 清洗机，静置 1-2 分钟。

2. 对于手动染色，在环境温度下进行抗体孵育。对于自动染色方法，请根据仪器制造商的说明进行抗体孵育。

3. 用 ImmunoDNA 洗涤器或去离子水清洗载玻片。

4. 继续 IHC 检测协议。用 ImmunoDNA 洗涤液在每个步骤之间清洗载玻片。

缩写 Mohs PolyDetector DAB HRP Brown of HRP Green 免疫组化方案

1. 用过氧化物酶阻滞剂孵育载玻片 30 秒

2. 用缓冲液（TBST 或 PBST）清洗

3. 与一抗孵育 4 分钟

4. 用缓冲液（TBST 或 PBST）清洗

5. 用 HRP 标签孵育 3 分钟

6. 用缓冲液（TBST 或 PBST）清洗

7. 准备

   • DAB Brown（在 1ml DAB 缓冲液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）

   • 或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）

8. 用 DAB 或 HRP Green 孵育 2 分钟

9. 用缓冲液（TBST 或 PBST）清洗

10. 用苏木精或核固红复染 30 秒

11. 用缓冲液（TBST 或 PBST）清洗

12. 使用 AquaMounter 安装或使用 Fast ChromoProtector 使组织脱水，然后使用 PermaMounter 安装

此协议也可用于使用柠檬酸盐或 EDTA 检索的 FFPE 组织。