MycAway™ Plus-Color一步法快速支原体检测试剂盒|MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit

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MycAway™ Plus-Color一步法快速支原体检测试剂盒|MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit是利用Yeasen独特的等温扩增技术开发的针对细胞培养液中支原体污染的快速检测产品，较以往支原体检测产品本试剂盒做了升级改善，在极大程度上降低了假阳性率，提高检测的准确度并增强了阴性和阳性的辨识度。在扩增结束后，可在室温放置一段时间且不会出现由阴性转变为阳性的现象，不影响阴、阳性判断。

主要原理是若细胞培养物被支原体污染，支原体DNA的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

翌圣MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit可以检测多种支原体，包括细胞培养过程中常见的8种支原体。传统巢式PCR支原体法检测法易受细胞培养上清中抑制物的影响，产生假阴性结果；反应后需开盖电泳检测，增加污染导致的假阳性风险。一步法支原体检测试剂盒完全没有上述缺点，且其检测灵敏度、准确性远远高于PCR法。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

40612ES25/25T

40612ES60/100T

40612-A

MycAwayTM -Color Lamp

425 μL

425 μL×4

40612-B

MycAwayTM -Color Lamp Primer

50 μL

50 μL×4

40612-C                             

Positive Control

10 μL

10 μL×4

40612-D

矿物油

500 μL

500 μL×4

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20 °C避光保存，保质期18个月。若较长时间不用，请注意避光保存。

 

注意事项

1）使用本试剂前请仔细阅读说明书。

2）整个实验，应在超净台规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

 

使用方法 

1. 支原体待检样本准备

贴壁细胞：直接吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上，且汇合度达到90%左右时取样，此时上清中支原体含量较高，便于检出。

悬浮细胞：500 g离心5 min后，吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上时取样，此时支原体含量较高，便于检出。

 

2. 反应体系

将MycAwayTM -Color从-20 °C取出，溶解后颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量，配制如下体系（通常实验需要设置阴性对照和阳性对照）：

 

单次反应体积 (μL)

  

总体积 (μL)

MycAwayTM -Color Lamp

17

× 样品数

_____

MycAwayTM -Color Lamp Primer

2

_____

3. 加样

待测样品：向其余反应管中加入1 μL待测培养上清；

阴性对照：第一支反应管中不加入任何样品，作为阴性对照；

阳性对照：向最后一个反应管中加入1 μL Positive Control，作为阳性对照。

【注】：1) 如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入20 μL矿物油，以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行，无需加矿物油。

2）实验室支原体污染十分常见，鉴于本试剂盒反应灵敏，建议用户在超净台中配制组分并减少反应后开盖次数，以免出现假阳性结果出现。

4. 反应条件

加完样后，先将样品在30 ℃放置5 min，再在水浴锅或PCR仪中，恒温63 °C孵育60 min。

【注】：本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用PCR仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2 °C，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内达到典型的天蓝色。

5. 结果判断

63 °C反应60 min后，立刻取出反应管，放于室温。在光线良好的环境中观察反应结果（建议以白纸为背景）。如果反应液仍为蓝紫色，则判定为阴性；若反应液为天蓝色，则判定为阳性。

【注】：在63 °C反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖，否则会出现气空气中支原体污染反应，出现假阳性的现象。

MycAway™ Plus-Color一步法快速支原体检测试剂盒|MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit

 

HB220324

 

Q：40612 一步法快速支原体检测试剂盒（防污染版）的检测原理？

A：本试剂盒中加入了UDG 酶，以便去除含 dU 的PCR 产物气溶胶污染，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。而且加入的 UDG 酶在室温下起作用，且对温度感、易于灭活，不影响实验结果。若细胞培养物被支原体污染，支原体 DNA 的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

Q：一步法快速支原体检测试剂盒使用方法（防污染版）？

A：本试剂盒使用更为简便，只需吸取 1μL 疑似支原体污染的细胞培养上清加入反应体系中，先将样品在 25~37 ℃放置 5 min，再在水浴锅或 PCR 仪中，恒温 63 °C 孵育 60 min。观察反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

Q：用 40612 一步法支原体检测试剂盒检测 DMSO、乙醇等有机溶剂中是否存在支原体污染，发现实验组均是天蓝色，是不是 DMSO、乙醇等时机中存在支原体污染？

A：支原体试剂盒在乙醇、DMSO 有机溶剂，以及强酸强碱环境中，不稳定易变性，导致颜色变色为天蓝色。这款试剂盒只能用于细胞检测，不可用于有机溶剂、强酸强碱环境下检测。

Q：我检测的是这个里面的液体，加入之后PCR管里的颜色立马变成了天蓝色？是什么原因呢？检测胰酶-EDTA，加入样品之后，直接变色了？

A：40612原理：Mg2++HNB=蓝紫色，随着PCR增加，焦磷酸不断增多，焦磷酸与Mg2+结合，HNB游离，显示天蓝色。这个试剂里面有磷酸二氢钠可能是这个离子与Mg2+结合而立马产生化学反应导致的，EDTA可以螯合钙镁离子，从而导致反应加速发生变色反应。

Q：阳性对照的浓度时多少？

A：10的5次方copies/ul。

Q：阳性对照里的是支原体吗？

A：不是的，是线性化的片段。

[1] Shi N, Yang Q, Zhang H, et al. Restoration of dystrophin expression in mice by suppressing a nonsense mutation through the incorporation of unnatural amino acids. Nat Biomed Eng. 2022;6(2):195-206. doi:10.1038/s41551-021-00774-1(IF:25.671)
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[4] Wu L, Xu Y, Zhao H, et al. FcγRIIB potentiates differentiation of myeloid-derived suppressor cells to mediate tumor immunoescape. Theranostics. 2022;12(2):842-858. Published 2022 Jan 1. doi:10.7150/thno.66575(IF:11.556)
[5] Tan B, Shi X, Zhang J, et al. Inhibition of Rspo-Lgr4 Facilitates Checkpoint Blockade Therapy by Switching Macrophage Polarization. Cancer Res. 2018;78(17):4929-4942. doi:10.1158/0008-5472.CAN-18-0152(IF:9.130)
[6] Yan G, Zhao H, Zhang Q, et al. A RIPK3-PGE2 Circuit Mediates Myeloid-Derived Suppressor Cell-Potentiated Colorectal Carcinogenesis. Cancer Res. 2018;78(19):5586-5599. doi:10.1158/0008-5472.CAN-17-3962(IF:9.130)
[7] Gu Z, Shi C, Li J, et al. Palbociclib-based high-throughput combination drug screening identifies synergistic therapeutic options in HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma. BMC Med. 2022;20(1):175. Published 2022 May 12. doi:10.1186/s12916-022-02373-6(IF:8.775)
[8] Wu L, Zhang X, Zheng L, et al. RIPK3 Orchestrates Fatty Acid Metabolism in Tumor-Associated Macrophages and Hepatocarcinogenesis. Cancer Immunol Res. 2020;8(5):710-721. doi:10.1158/2326-6066.CIR-19-0261(IF:8.728)
[9] Qin J, Zhang X, Tan B, et al. Blocking P2X7-Mediated Macrophage Polarization Overcomes Treatment Resistance in Lung Cancer. Cancer Immunol Res. 2020;8(11):1426-1439. doi:10.1158/2326-6066.CIR-20-0123(IF:8.728)
[10] Cao M, Huang W, Chen Y, et al. Chronic restraint stress promotes the mobilization and recruitment of myeloid-derived suppressor cells through β-adrenergic-activated CXCL5-CXCR2-Erk signaling cascades. Int J Cancer. 2021;149(2):460-472. doi:10.1002/ijc.33552(IF:7.396)
[11] Yao R, Alkhawtani AYF, Chen R, Luan J, Xu M. Rapid and efficient in vivo angiogenesis directed by electro-assisted bioprinting of alginate/collagen microspheres with human umbilical vein endothelial cell coating layer [published correction appears in Int J Bioprint. 2020 Sep 17;6(4):309]. Int J Bioprint. 2019;5(2.1):194. Published 2019 Jun 24. doi:10.18063/ijb.v5i2.1.194(IF:6.638)
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[25] Chen L, Chen L, Wan L, et al. Matrine improves skeletal muscle atrophy by inhibiting E3 ubiquitin ligases and activating the Akt/mTOR/FoxO3α signaling pathway in C2C12 myotubes and mice. Oncol Rep. 2019;42(2):479-494. doi:10.3892/or.2019.7205(IF:3.041)
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MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit是利用Yeasen独特的等温扩增技术开发的针对细胞培养液中支原体污染的快速检测产品，较以往支原体检测产品本试剂盒做了升级改善，在极大程度上降低了假阳性率，提高检测的准确度并增强了阴性和阳性的辨识度。在扩增结束后，可在室温放置一段时间且不会出现由阴性转变为阳性的现象，不影响阴、阳性判断。

主要原理是若细胞培养物被支原体污染，支原体DNA的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

翌圣MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit可以检测多种支原体，包括细胞培养过程中常见的8种支原体。传统巢式PCR支原体法检测法易受细胞培养上清中抑制物的影响，产生假阴性结果；反应后需开盖电泳检测，增加污染导致的假阳性风险。一步法支原体检测试剂盒完全没有上述缺点，且其检测灵敏度、准确性远远高于PCR法。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

40612ES25/25T

40612ES60/100T

40612-A

MycAwayTM -Color Lamp

425 μL

425 μL×4

40612-B

MycAwayTM -Color Lamp Primer

50 μL

50 μL×4

40612-C                             

Positive Control

10 μL

10 μL×4

40612-D

矿物油

500 μL

500 μL×4

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20 °C避光保存，保质期18个月。若较长时间不用，请注意避光保存。

 

注意事项

1）使用本试剂前请仔细阅读说明书。

2）整个实验，应在超净台规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

 

使用方法 

1. 支原体待检样本准备

贴壁细胞：直接吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上，且汇合度达到90%左右时取样，此时上清中支原体含量较高，便于检出。

悬浮细胞：500 g离心5 min后，吸取上清。建议在细胞传代或换液3天以上时取样，此时支原体含量较高，便于检出。

 

2. 反应体系

将MycAwayTM -Color从-20 °C取出，溶解后颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量，配制如下体系（通常实验需要设置阴性对照和阳性对照）：

 

单次反应体积 (μL)

  

总体积 (μL)

MycAwayTM -Color Lamp

17

× 样品数

_____

MycAwayTM -Color Lamp Primer

2

_____

3. 加样

待测样品：向其余反应管中加入1 μL待测培养上清；

阴性对照：第一支反应管中不加入任何样品，作为阴性对照；

阳性对照：向最后一个反应管中加入1 μL Positive Control，作为阳性对照。

【注】：1) 如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入20 μL矿物油，以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行，无需加矿物油。

2）实验室支原体污染十分常见，鉴于本试剂盒反应灵敏，建议用户在超净台中配制组分并减少反应后开盖次数，以免出现假阳性结果出现。

4. 反应条件

加完样后，先将样品在30 ℃放置5 min，再在水浴锅或PCR仪中，恒温63 °C孵育60 min。

【注】：本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用PCR仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2 °C，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内达到典型的天蓝色。

5. 结果判断

63 °C反应60 min后，立刻取出反应管，放于室温。在光线良好的环境中观察反应结果（建议以白纸为背景）。如果反应液仍为蓝紫色，则判定为阴性；若反应液为天蓝色，则判定为阳性。

【注】：在63 °C反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖，否则会出现气空气中支原体污染反应，出现假阳性的现象。

MycAway™ Plus-Color一步法快速支原体检测试剂盒|MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit

 

HB220324

 

Q：40612 一步法快速支原体检测试剂盒（防污染版）的检测原理？

A：本试剂盒中加入了UDG 酶，以便去除含 dU 的PCR 产物气溶胶污染，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。而且加入的 UDG 酶在室温下起作用，且对温度感、易于灭活，不影响实验结果。若细胞培养物被支原体污染，支原体 DNA 的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

Q：一步法快速支原体检测试剂盒使用方法（防污染版）？

A：本试剂盒使用更为简便，只需吸取 1μL 疑似支原体污染的细胞培养上清加入反应体系中，先将样品在 25~37 ℃放置 5 min，再在水浴锅或 PCR 仪中，恒温 63 °C 孵育 60 min。观察反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

Q：用 40612 一步法支原体检测试剂盒检测 DMSO、乙醇等有机溶剂中是否存在支原体污染，发现实验组均是天蓝色，是不是 DMSO、乙醇等时机中存在支原体污染？

A：支原体试剂盒在乙醇、DMSO 有机溶剂，以及强酸强碱环境中，不稳定易变性，导致颜色变色为天蓝色。这款试剂盒只能用于细胞检测，不可用于有机溶剂、强酸强碱环境下检测。

Q：我检测的是这个里面的液体，加入之后PCR管里的颜色立马变成了天蓝色？是什么原因呢？检测胰酶-EDTA，加入样品之后，直接变色了？

A：40612原理：Mg2++HNB=蓝紫色，随着PCR增加，焦磷酸不断增多，焦磷酸与Mg2+结合，HNB游离，显示天蓝色。这个试剂里面有磷酸二氢钠可能是这个离子与Mg2+结合而立马产生化学反应导致的，EDTA可以螯合钙镁离子，从而导致反应加速发生变色反应。

Q：阳性对照的浓度时多少？

A：10的5次方copies/ul。

Q：阳性对照里的是支原体吗？

A：不是的，是线性化的片段。

[1] Shi N, Yang Q, Zhang H, et al. Restoration of dystrophin expression in mice by suppressing a nonsense mutation through the incorporation of unnatural amino acids. Nat Biomed Eng. 2022;6(2):195-206. doi:10.1038/s41551-021-00774-1(IF:25.671)
[2] Zhang S, Yu F, Che A, et al. Neuroendocrine Regulation of Stress-Induced T Cell Dysfunction during Lung Cancer Immunosurveillance via the Kisspeptin/GPR54 Signaling Pathway. Adv Sci (Weinh). 2022;9(13):e2104132. doi:10.1002/advs.202104132(IF:16.806)
[3] Li Y, Xue B, Zhang M, et al. Transcription-coupled structural dynamics of topologically associating domains regulate replication origin efficiency. Genome Biol. 2021;22(1):206. Published 2021 Jul 12. doi:10.1186/s13059-021-02424-w(IF:13.583)
[4] Wu L, Xu Y, Zhao H, et al. FcγRIIB potentiates differentiation of myeloid-derived suppressor cells to mediate tumor immunoescape. Theranostics. 2022;12(2):842-858. Published 2022 Jan 1. doi:10.7150/thno.66575(IF:11.556)
[5] Tan B, Shi X, Zhang J, et al. Inhibition of Rspo-Lgr4 Facilitates Checkpoint Blockade Therapy by Switching Macrophage Polarization. Cancer Res. 2018;78(17):4929-4942. doi:10.1158/0008-5472.CAN-18-0152(IF:9.130)
[6] Yan G, Zhao H, Zhang Q, et al. A RIPK3-PGE2 Circuit Mediates Myeloid-Derived Suppressor Cell-Potentiated Colorectal Carcinogenesis. Cancer Res. 2018;78(19):5586-5599. doi:10.1158/0008-5472.CAN-17-3962(IF:9.130)
[7] Gu Z, Shi C, Li J, et al. Palbociclib-based high-throughput combination drug screening identifies synergistic therapeutic options in HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma. BMC Med. 2022;20(1):175. Published 2022 May 12. doi:10.1186/s12916-022-02373-6(IF:8.775)
[8] Wu L, Zhang X, Zheng L, et al. RIPK3 Orchestrates Fatty Acid Metabolism in Tumor-Associated Macrophages and Hepatocarcinogenesis. Cancer Immunol Res. 2020;8(5):710-721. doi:10.1158/2326-6066.CIR-19-0261(IF:8.728)
[9] Qin J, Zhang X, Tan B, et al. Blocking P2X7-Mediated Macrophage Polarization Overcomes Treatment Resistance in Lung Cancer. Cancer Immunol Res. 2020;8(11):1426-1439. doi:10.1158/2326-6066.CIR-20-0123(IF:8.728)
[10] Cao M, Huang W, Chen Y, et al. Chronic restraint stress promotes the mobilization and recruitment of myeloid-derived suppressor cells through β-adrenergic-activated CXCL5-CXCR2-Erk signaling cascades. Int J Cancer. 2021;149(2):460-472. doi:10.1002/ijc.33552(IF:7.396)
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