鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。

鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1 µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品为iFluorTM 555标记的鬼笔环肽，可发出橘红色的荧光，具有高亮度和光稳定性，且染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM 555 鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他iFluorTM偶联物（包含iFluorTM偶联二抗）。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。本品以1 mg/mL浓度提供。

 

产品性质 

分子量（Molecular Weight）	～1300
最大激发/发射波长（Ex/Em）	556/574 nm
溶解性（Solubility）	溶于DMSO
结构式（Structure）

 

运输与保存方法

冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。

 

注意事项

1）鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD50约2 mg/kg）。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

 

需要自备材料

1）1×PBS缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别（货号：60145ES76）

2）固定液4%多聚甲醛（不含甲醇）（溶于PBS缓冲液）（货号：36314ES60）

3）透化液Triton X-100（溶于PBS缓冲液）

4）BSA，标准级别（货号：36101ES25）

5）DAPI染液（即用型）（货号：40728ES50）

 

操作步骤

1. 1×工作液准备

吸取1µL 1000×iFluorTM 555标记鬼笔环肽（溶于DMSO）到1 mL 含有1%BSA的PBS缓冲液中即可得到1×工作液。

注：1）使用前需将1000×DMSO iFluorTM 555鬼笔环肽储存液分装并于-20℃避光干燥保存。

2）不同的细胞染色情况不同，相应iFluorTM 555鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

2. 染色步骤

1）细胞培养过夜或更长，使其密度达到50-60%汇合度。

2）吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10-30 min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10 min。

5）（可选）：室温条件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化处理3-5 min，从而增加其通透性。

6）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10 min。

7）取足够量新鲜配好的 iFluorTM 555标记鬼笔环肽工作液以覆盖住细胞，如：100 µL/孔（96孔板），室温避光染色20-90 min。

8）用PBS清洗细胞3次，每次5 min。

9）（可选）：加入足量的即用型DAPI溶液对细胞核进行复染，如：100 µl/孔（96孔板），室温3~5 min。用PBS清洗细胞2次，每次5 min。

10）于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择iFluorTM 555激发/发射滤片（Ex/Em=556/574 nm）和/或DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454 nm）。

 

相关产品

产品名称	货号	规格
Amino-Phalloidin 氨基鬼笔环肽	40733ES03	1 mg
TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽	40734ES75/80	300 T/1 mg
FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽	40735ES75/80	300 T/1 mg
iFluor™ 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽（绿色）	40736ES75	300 T
iFluor™ 555 phalloidin iFluor™ 555标记鬼笔环肽（橘色）	40737ES75	300 T
iFluor™ 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽（远红）	40762ES75	300 T

 

HB211213

 

Q: 为什么我激发后荧光很快就猝灭了？

A:1.可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应（例：EDU） 共染色，否则鬼笔环肽没荧光信号。

Q: 每次是添加多少试剂量（工作液）进行荧光显微镜检测？

A: 建议添加的量是能够完全浸没细胞即可，不同的细胞染色情况不同，相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

Q: 可以用哪些溶液来固定细胞，要注意什么？

A: 可以用溶于 PBS 的 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，固定时避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。

Q: 为什么用鬼笔环肽结合 F-actin 标记石蜡切片，没有看到信号？

A:  当细胞和组织经由二甲苯或丙酮之类的溶剂处理时（例如组织切片脱石蜡期间），它通过阻止鬼笔环肽结合的方式来影响F-actin。可以使用通常不用有机溶剂洗涤的冷冻切片代替石蜡切片，或者可以使用抗肌动蛋白抗体。

Q: 鬼笔环肽染色 F-Actin, 有的染上，有的没染上，并且染色信号较弱？

A: 1. 摸索鬼笔环肽最佳染色工作液浓度及染色时间。2. 细胞未固定好，建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定。3. 细胞未透化彻底，透化时间可相应延长。

[1] Wang D, Zhao C, Xu F, et al. Cisplatin-resistant NSCLC cells induced by hypoxia transmit resistance to sensitive cells through exosomal PKM2. Theranostics. 2021;11(6):2860-2875. Published 2021 Jan 1. doi:10.7150/thno.51797(IF:11.556)
[2] Guo J, Li Y, Gao Z, et al. 3D printed controllable microporous scaffolds support embryonic development in vitro [published online ahead of print, 2022 Jun 14]. J Cell Physiol. 2022;10.1002/jcp.30810. doi:10.1002/jcp.30810(IF:6.384)
[3] Yang Y, Chen HY, Hao H, Wang KJ. The Anticancer Activity Conferred by the Mud Crab Antimicrobial Peptide Scyreprocin through Apoptosis and Membrane Disruption. Int J Mol Sci. 2022;23(10):5500. Published 2022 May 14. doi:10.3390/ijms23105500(IF:5.924)
[4] Ji Q, Ma J, Wang S, Liu Q. Systematic identification of a panel of strong promoter regions from Listeria monocytogenes for fine-tuning gene expression. Microb Cell Fact. 2021;20(1):132. Published 2021 Jul 12. doi:10.1186/s12934-021-01628-w(IF:5.328)
[5] Hou Y, Wu Z, Zhang Y, et al. Functional Analysis of Hydrolethalus Syndrome Protein HYLS1 in Ciliogenesis and Spermatogenesis in Drosophila. Front Cell Dev Biol. 2020;8:301. Published 2020 May 21. doi:10.3389/fcell.2020.00301(IF:5.186)
[6] Xiong X, Yang X, Dai H, et al. Extracellular matrix derived from human urine-derived stem cells enhances the expansion, adhesion, spreading, and differentiation of human periodontal ligament stem cells. Stem Cell Res Ther. 2019;10(1):396. Published 2019 Dec 18. doi:10.1186/s13287-019-1483-7(IF:4.627)
[7] Wang X, Huang S, Zheng C, Ge W, Wu C, Tse YC. RSU-1 Maintains Integrity of Caenorhabditis elegans Vulval Muscles by Regulating α-Actinin. G3 (Bethesda). 2020;10(7):2507-2517. Published 2020 Jul 7. doi:10.1534/g3.120.401185(IF:2.781)
[8] Sheng K, Li Y, Wang Z, Hang K, Ye Z. p-Coumaric acid suppresses reactive oxygen species-induced senescence in nucleus pulposus cells. Exp Ther Med. 2022;23(2):183. doi:10.3892/etm.2021.11106(IF:2.447)
[9] Yang Z, Gao X, Zhou M, et al. Effect of metformin on human periodontal ligament stem cells cultured with polydopamine-templated hydroxyapatite [published correction appears in Eur J Oral Sci. 2021 Aug;129(4):e12816]. Eur J Oral Sci. 2019;127(3):210-221. doi:10.1111/eos.12616(IF:1.810)