Hieff Trans<sup>® </sup>悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂 脂质体转染试剂
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产品描述
Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！
注意事项
1. 为得到最优的转染效率，请先用无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下简称Hieff Trans®），之后与DNA或RNA做混合。
2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“Hieff Trans®–复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。
3. 转染时培养基中不能添加抗生素。
4. 阳离子脂质体应该在2-8℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff Trans®的比例，通常推荐是1:2 或1:3
推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）
最终转染体积：30 mL
转染细胞数目：3×107 cell（最终细胞密度：1×106 cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。
质粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)
转染试剂量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans® per 1 μg of plasmid DNA transfected.
操作步骤（293悬浮细胞）
使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组（无DNA，无Hieff Trans®）。
【注】对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。
1. 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件，即28 mL 生长培养基内加入3×107 cell，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】【注】：为了达到最优效率，确保单细胞悬液。
2. 按照以下方法配制Hieff Trans®-DNA复合物，
a, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释30 μg质粒DNA，使其终体积为1 mL；
b, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释60 μL Hieff Trans®，使其终体积为1 mL；轻轻混匀，于室温孵育5 min；【注意】：过长时间孵育会降低效率。
c, 孵育5 min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的Hieff Trans®，使其总体积为2 mL。轻轻混匀。
d, 室温孵育20-30 min，使得DNA-Hieff Trans®复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5 h。
3. 孵育完全后，将2 mL DNA-Hieff Trans®复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×106 cell/mL。对于阴性对照，用2 mL无血清培养基（如OPTI-MEM I）替换。
4. 37℃，5% CO2轨道摇床培养，转速125 rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
HB230503
产品描述
Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！
注意事项
1. 为得到最优的转染效率，请先用无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下简称Hieff Trans®），之后与DNA或RNA做混合。
2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“Hieff Trans®–复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。
3. 转染时培养基中不能添加抗生素。
4. 阳离子脂质体应该在2-8℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff Trans®的比例，通常推荐是1:2 或1:3
推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）
最终转染体积：30 mL
转染细胞数目：3×107 cell（最终细胞密度：1×106 cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。
质粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)
转染试剂量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans® per 1 μg of plasmid DNA transfected.
操作步骤（293悬浮细胞）
使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组（无DNA，无Hieff Trans®）。
【注】对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。
1. 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件，即28 mL 生长培养基内加入3×107 cell，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】【注】：为了达到最优效率，确保单细胞悬液。
2. 按照以下方法配制Hieff Trans®-DNA复合物，
a, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释30 μg质粒DNA，使其终体积为1 mL；
b, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释60 μL Hieff Trans®，使其终体积为1 mL；轻轻混匀，于室温孵育5 min；【注意】：过长时间孵育会降低效率。
c, 孵育5 min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的Hieff Trans®，使其总体积为2 mL。轻轻混匀。
d, 室温孵育20-30 min，使得DNA-Hieff Trans®复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5 h。
3. 孵育完全后，将2 mL DNA-Hieff Trans®复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×106 cell/mL。对于阴性对照，用2 mL无血清培养基（如OPTI-MEM I）替换。
4. 37℃，5% CO2轨道摇床培养，转速125 rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
HB230503
Q:我们转染试剂转染后需要换液吗？
A:对于换液可以区分两种情况；1、转染之前如果没有换液应在转染 6 小时左右后换液，以保证细胞生长所需营养，2、如果转染之前如果有换液，可以按照平时等到培养基出现营养不足时换液。
Q:转染试剂转单个质粒和多质粒共转的效率如何？
A:单转效率对于验证过的细胞效率都是很好，可以参考 FAQ-验证过的细胞系，对于共转由于要涉及到质粒的混合比例和质粒与转染试剂的添加比例问题，因此具体的效率需要客户做相应的验证方可。
Q:转染试剂可以冻存吗？
A:不可以冻存，因为转染试剂是一种脂质体阳离子转染试剂，由于脂质体是不能在低温下冻存， 因此转染试剂最好是 4 度储存，保持最好的转染效能。
[1] Cheng Y, Liu Y, Shi S, et al. Functional Characterization of Duck STING in IFN-β Induction and Anti-H9N2 Avian Influenza Viruses Infections. Front Immunol. 2019;10:2224. Published 2019 Sep 18. doi:10.3389/fimmu.2019.02224(IF:4.716)
[2] Li J, Peng S, Zhong L, et al. Identification and validation of a regulatory mutation upstream of the BMP2 gene associated with carcass length in pigs. Genet Sel Evol. 2021;53(1):94. Published 2021 Dec 14. doi:10.1186/s12711-021-00689-0(IF:4.297)