D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid

D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后,导入研究动物如大、小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

 D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid 

D-荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析、报告基因分析、高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素钠盐,以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素(游离酸)水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

产品性质

中文别名(Chinese synonym)

D-萤火虫荧光素游离酸;

英文别名(English synonym)

S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid

CAS号(CAS NO.)

2591-17-5

分子式(Formula)

C11H8N2O3S2

分子量(Molecular weight)

280.33 g/mol

外观(Appearance)

类白色至浅黄色粉末

溶解性(Solubility)

本品难溶于水,可加入稀碱促进其溶解。

纯度(Purity)(HPLC)

≥95%

 

运输和保存方法

冰袋运输;-20℃干燥避光保存;有效期一年。

 

使用方法

1 体外生物发光检测

1)用稀碱(如NaOH,KOH溶液)溶解D-荧光素,游离酸,配制成30 mg/mL的储存液(200×),并调整pH至7.4。混匀

 

后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。

【注】:如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和,调整至pH7.4。

2)用预热好的组织培养基1:200稀释储存液,配制工作液(终浓度150 µg/mL)。

3)去除培养细胞的培养基直至无残留。

4)待图像分析前,向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)。

2 活体成像分析

1)用稀碱(如NaOH,KOH溶液)配制D-荧光素工作液(15 mg/mL),并调节pH至7.4,0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。

2)注射量取决于注射方式,具体如下:

注射方式

剂量

静脉注射(25-27gauge 针头)

按 10 µL/g 体重浓度,加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

腹腔注射(25-27gauge 针头)

按 10 µL/g 体重浓度,加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

肌肉注射(27gauge 针头)

50 µL,浓度为1-2 mg/mL 荧光素工作液

鼻内注射(pipette)

50 µL,浓度为3 mg/mL 荧光素工作液

3)注射入体内10-20 min(待光信号达到最强稳定平台期),再进行成像分析。

【注】:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

注意事项

1)本品(firefly luciferin)和甲虫荧光素(beetle luciferin)都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-

carboxylic acid,仅仅是不同公司在命名上的差异。

2)本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后,可以-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长,长达1年。

3)注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5)本产品仅作科研用途!

 

HB220209

 

Q: 怎么配置这个无菌的可注射动物体内且 ph=7.4 的稀碱?

A: 过滤,。

 

[1] Ji C, Zhao M, Wang C, et al. Biocompatible Tantalum Nanoparticles as Radiosensitizers for Enhancing Therapy Efficacy in Primary Tumor and Metastatic Sentinel Lymph Nodes [published online ahead of print, 2022 Jun 6]. ACS Nano. 2022;10.1021/acsnano.2c02314. doi:10.1021/acsnano.2c02314(IF:15.881)
[2] Miao Z, Tian W, Ye Y, et al. Hsp90 induces Acsl4-dependent glioma ferroptosis via dephosphorylating Ser637 at Drp1. Cell Death Dis. 2022;13(6):548. Published 2022 Jun 13. doi:10.1038/s41419-022-04997-1(IF:8.469)
[3] Zhang L, Sun Y, Zhang XX, et al. Comparison of CD146 +/- mesenchymal stem cells in improving premature ovarian failure. Stem Cell Res Ther. 2022;13(1):267. Published 2022 Jun 21. doi:10.1186/s13287-022-02916-x(IF:6.832)
[4] Fu RJ, He W, Wang XB, et al. DNMT1-maintained hypermethylation of Krüppel-like factor 5 involves in the progression of clear cell renal cell carcinoma. Cell Death Dis. 2017;8(7):e2952. Published 2017 Jul 27. doi:10.1038/cddis.2017.323(IF:5.965)
[5] Xu P, Wu L, Cao M, et al. Identification of MBW Complex Components Implicated in the Biosynthesis of Flavonoids in Woodland Strawberry. Front Plant Sci. 2021;12:774943. Published 2021 Nov 8. doi:10.3389/fpls.2021.774943(IF:5.754)
[6] Bai S, Tao R, Yin L, et al. Two B-box proteins, PpBBX18 and PpBBX21, antagonistically regulate anthocyanin biosynthesis via competitive association with Pyrus pyrifolia ELONGATED HYPOCOTYL 5 in the peel of pear fruit. Plant J. 2019;100(6):1208-1223. doi:10.1111/tpj.14510(IF:5.726)
[7] Yang SX, Wu TT, Ding CH, Zhou PC, Chen ZZ, Gou JY. SAHH and SAMS form a methyl donor complex with CCoAOMT7 for methylation of phenolic compounds. Biochem Biophys Res Commun. 2019;520(1):122-127. doi:10.1016/j.bbrc.2019.09.101(IF:2.705)

产品描述

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后,导入研究动物如大、小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

 D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid 

D-荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析、报告基因分析、高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素钠盐,以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素(游离酸)水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

产品性质

中文别名(Chinese synonym)

D-萤火虫荧光素游离酸;

英文别名(English synonym)

S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid

CAS号(CAS NO.)

2591-17-5

分子式(Formula)

C11H8N2O3S2

分子量(Molecular weight)

280.33 g/mol

外观(Appearance)

类白色至浅黄色粉末

溶解性(Solubility)

本品难溶于水,可加入稀碱促进其溶解。

纯度(Purity)(HPLC)

≥95%

 

运输和保存方法

冰袋运输;-20℃干燥避光保存;有效期一年。

 

使用方法

1 体外生物发光检测

1)用稀碱(如NaOH,KOH溶液)溶解D-荧光素,游离酸,配制成30 mg/mL的储存液(200×),并调整pH至7.4。混匀

 

后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。

【注】:如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和,调整至pH7.4。

2)用预热好的组织培养基1:200稀释储存液,配制工作液(终浓度150 µg/mL)。

3)去除培养细胞的培养基直至无残留。

4)待图像分析前,向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)。

2 活体成像分析

1)用稀碱(如NaOH,KOH溶液)配制D-荧光素工作液(15 mg/mL),并调节pH至7.4,0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。

2)注射量取决于注射方式,具体如下:

注射方式

剂量

静脉注射(25-27gauge 针头)

按 10 µL/g 体重浓度,加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

腹腔注射(25-27gauge 针头)

按 10 µL/g 体重浓度,加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

肌肉注射(27gauge 针头)

50 µL,浓度为1-2 mg/mL 荧光素工作液

鼻内注射(pipette)

50 µL,浓度为3 mg/mL 荧光素工作液

3)注射入体内10-20 min(待光信号达到最强稳定平台期),再进行成像分析。

【注】:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

注意事项

1)本品(firefly luciferin)和甲虫荧光素(beetle luciferin)都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-

carboxylic acid,仅仅是不同公司在命名上的差异。

2)本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后,可以-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长,长达1年。

3)注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5)本产品仅作科研用途!

 

HB220209

 

Q: 怎么配置这个无菌的可注射动物体内且 ph=7.4 的稀碱?

A: 过滤,。

 

[1] Ji C, Zhao M, Wang C, et al. Biocompatible Tantalum Nanoparticles as Radiosensitizers for Enhancing Therapy Efficacy in Primary Tumor and Metastatic Sentinel Lymph Nodes [published online ahead of print, 2022 Jun 6]. ACS Nano. 2022;10.1021/acsnano.2c02314. doi:10.1021/acsnano.2c02314(IF:15.881)
[2] Miao Z, Tian W, Ye Y, et al. Hsp90 induces Acsl4-dependent glioma ferroptosis via dephosphorylating Ser637 at Drp1. Cell Death Dis. 2022;13(6):548. Published 2022 Jun 13. doi:10.1038/s41419-022-04997-1(IF:8.469)
[3] Zhang L, Sun Y, Zhang XX, et al. Comparison of CD146 +/- mesenchymal stem cells in improving premature ovarian failure. Stem Cell Res Ther. 2022;13(1):267. Published 2022 Jun 21. doi:10.1186/s13287-022-02916-x(IF:6.832)
[4] Fu RJ, He W, Wang XB, et al. DNMT1-maintained hypermethylation of Krüppel-like factor 5 involves in the progression of clear cell renal cell carcinoma. Cell Death Dis. 2017;8(7):e2952. Published 2017 Jul 27. doi:10.1038/cddis.2017.323(IF:5.965)
[5] Xu P, Wu L, Cao M, et al. Identification of MBW Complex Components Implicated in the Biosynthesis of Flavonoids in Woodland Strawberry. Front Plant Sci. 2021;12:774943. Published 2021 Nov 8. doi:10.3389/fpls.2021.774943(IF:5.754)
[6] Bai S, Tao R, Yin L, et al. Two B-box proteins, PpBBX18 and PpBBX21, antagonistically regulate anthocyanin biosynthesis via competitive association with Pyrus pyrifolia ELONGATED HYPOCOTYL 5 in the peel of pear fruit. Plant J. 2019;100(6):1208-1223. doi:10.1111/tpj.14510(IF:5.726)
[7] Yang SX, Wu TT, Ding CH, Zhou PC, Chen ZZ, Gou JY. SAHH and SAMS form a methyl donor complex with CCoAOMT7 for methylation of phenolic compounds. Biochem Biophys Res Commun. 2019;520(1):122-127. doi:10.1016/j.bbrc.2019.09.101(IF:2.705)