NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®与MGI®测序平台适用的DNA接头,具有高效的连接能力,兼容各类样本,同时也适用于自动化平台,对于复杂结构核酸片段的连接更显优势,均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix(Cat#12605),2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序已验证其有效性。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix(Cat#12605),2×Novel HF Amplification Mix for MGI®(Cat#13344)共同用于DNA文库构建,通过MGI®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
产品编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
12626ES24 |
12626ES96 |
||
12626-A |
Novel T4 DNA Ligase |
120 μL |
480 μL |
12626-B |
5×Novel Ligation Buffer |
480 μL |
2×960 μL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存,效期18个月。
注意事项
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅用作科研用途!
使用方法
1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表1 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
1 μg |
10:1 |
50 ng |
100:1 |
500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
250 ng |
40:1 |
1 ng |
200:1 |
100 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。
2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。
表2 Adapter Ligation体系
名称 |
体积(μL) |
dA-tailed DNA |
60 |
5×Novel Ligation Buffer |
20* |
Novel T4 DNA Ligase |
5 |
DNA Adapter |
X** |
ddH2O |
To 100 |
【注】:*对于5×Novel Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时离心后使用。
**根据自身需求加入适量的接头。
【接头添加计算举例】:
当Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?
第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];
Input DNA 摩尔数(pmol)=100÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例;
根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);
接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)
HB220829
Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®与MGI®测序平台适用的DNA接头,具有高效的连接能力,兼容各类样本,同时也适用于自动化平台,对于复杂结构核酸片段的连接更显优势,均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix(Cat#12605),2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序已验证其有效性。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix(Cat#12605),2×Novel HF Amplification Mix for MGI®(Cat#13344)共同用于DNA文库构建,通过MGI®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品组分
产品编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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12626ES24 |
12626ES96 |
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12626-A |
Novel T4 DNA Ligase |
120 μL |
480 μL |
12626-B |
5×Novel Ligation Buffer |
480 μL |
2×960 μL |
运输与保存方法
冰袋运输。
-20℃保存,效期18个月。
注意事项
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅用作科研用途!
使用方法
1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表1 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
1 μg |
10:1 |
50 ng |
100:1 |
500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
250 ng |
40:1 |
1 ng |
200:1 |
100 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)]。
2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。
表2 Adapter Ligation体系
名称 |
体积(μL) |
dA-tailed DNA |
60 |
5×Novel Ligation Buffer |
20* |
Novel T4 DNA Ligase |
5 |
DNA Adapter |
X** |
ddH2O |
To 100 |
【注】:*对于5×Novel Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时离心后使用。
**根据自身需求加入适量的接头。
【接头添加计算举例】:
当Input DNA为100 ng,Input DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?
第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol)≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp)];
Input DNA 摩尔数(pmol)=100÷(0.66×300)=0.5 pmol;
第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例;
根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol;
第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);
接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol)÷接头浓度(15 μmol/L)=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL)
综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL)
HB220829
Q:12626 产品连接buffer 比较粘稠,如果不混匀会造成什么影响?
A:连接反应混合不当,可能导致文库产量低。为了保证合适的混合,反应可以上下颠倒 10 次,或者
漩涡 3 秒。
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