NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module

NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina®MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®MGI®测序平台适用的DNA接头,具有高效的连接能力,兼容各类样本,同时也适用于自动化平台,对于复杂结构核酸片段的连接更显优势,均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp MixCat#12605),2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library AmplificationCat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序已验证其有效性。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp MixCat#126052×Novel HF Amplification Mix for MGI®Cat#13344)共同用于DNA文库构建,通过MGI®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

产品编号/规格

12626ES24

12626ES96

12626-A

Novel T4 DNA Ligase

120 μL

480 μL

12626-B

5×Novel Ligation Buffer

480 μL

2×960 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存,效期18个月

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅用作科研用途!

 

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1

【注】:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。

2  Adapter Ligation体系

名称

体积(μL

dA-tailed DNA

60

5×Novel Ligation Buffer

20*

Novel T4 DNA Ligase

5

DNA Adapter

X**

ddH2O

To 100

【注】:*对于5×Novel Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时离心后使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】

Input DNA100 ngInput DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?

第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

Input DNA 摩尔数(pmol=100÷0.66×300=0.5 pmol

第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例;

根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol

第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);

接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol÷接头浓度(15 μmol/L=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL

综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL

HB220829

 

Q:12626 产品连接buffer 比较粘稠,如果不混匀会造成什么影响?

A:连接反应混合不当,可能导致文库产量低。为了保证合适的混合,反应可以上下颠倒 10 次,或者

漩涡 3 秒。

 

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Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina®MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块,采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®MGI®测序平台适用的DNA接头,具有高效的连接能力,兼容各类样本,同时也适用于自动化平台,对于复杂结构核酸片段的连接更显优势,均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp MixCat#12605),2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library AmplificationCat#12621)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序已验证其有效性。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp MixCat#126052×Novel HF Amplification Mix for MGI®Cat#13344)共同用于DNA文库构建,通过MGI®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分,都经过严格的质量与功能验证,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

产品编号/规格

12626ES24

12626ES96

12626-A

Novel T4 DNA Ligase

120 μL

480 μL

12626-B

5×Novel Ligation Buffer

480 μL

2×960 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存,效期18个月

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅用作科研用途!

 

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer;用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒,不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1

【注】:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒,其末端修复和加A处理后一般不纯化,直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容,进行接头连接。反应体系请参考如下配制,涡旋瞬离后置于20℃,反应15分钟即可。

2  Adapter Ligation体系

名称

体积(μL

dA-tailed DNA

60

5×Novel Ligation Buffer

20*

Novel T4 DNA Ligase

5

DNA Adapter

X**

ddH2O

To 100

【注】:*对于5×Novel Ligation Buffer,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时离心后使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】

Input DNA100 ngInput DNA长度为300 bp时,接头应该添加多少?

第一步,计算Input DNA摩尔数。公式:Input DNA摩尔数(pmol≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度(bp]

Input DNA 摩尔数(pmol=100÷0.66×300=0.5 pmol

第二步,计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例;

根据表2,查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1,则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol

第三步,计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L(如使用其他接头,浓度需要依据其他接头浓度参数);

接头添加体积=接头添加摩尔数(50 pmol÷接头浓度(15 μmol/L=3.34 μL(注:15 μmol/L=15 pmol/μL

综上,接头可添加3.4 μL,加1.6 μL水补齐至5 μL。(注:接头最大加入体积不超过5 μL

HB220829

 

Q:12626 产品连接buffer 比较粘稠,如果不混匀会造成什么影响?

A:连接反应混合不当,可能导致文库产量低。为了保证合适的混合,反应可以上下颠倒 10 次,或者

漩涡 3 秒。

 

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