Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set4|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 4
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量文库构建专用配套试剂盒,共分为4个Set,每个Set中包含12种不同的Barcode接头,适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度保证了文库构建的稳定性和可重复性。
产品组分
编号 |
组分 |
产品规格 |
|
12×4T |
12×16 T |
||
12615 |
DNA Adapter 1-12 |
12 μL each |
48 uL each |
12616 |
DNA Adapter 13-24 |
12 μL each |
48 uL each |
12617 |
DNA Adapter 25-36 |
12 μL each |
48 uL each |
12618 |
DNA Adapter 37-48 |
12 μL each |
48 uL each |
运输和保存方法
冰袋运输,-20℃保存,有效期18个月。
注意事项
1)本试剂盒中DNA Adapter的浓度统一为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,可短暂存放于4℃。
3)小规格试剂盒(12×4 T)每种组分的DNA Adapter包装量足够进行4个DNA文库构建,共计足够进行48个DNA文库构建,大规格试剂盒(12×16 T)每种组分的DNA Adapter包装量足够进行16个DNA文库构建,共计足够进行192个DNA文库构建。
4)使用Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:
5’ – Universal Adapter – Insert DNA Sequence – DNA Barcode Adapter- 3’
5)试剂盒中提供的每种DNA Adapter中都包含Universal Adapter,且提供一种Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。
6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7)本产品仅作科研用途!
使用方法
DNA Adapter的序列如下:
Universal Adapter:5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’
Barcode Adapter:5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXX1ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
1XXXXXX表示接头的Barcode区域,其在每个接头中的序列见下表。测序前在Sample Sheet中只需输入这个Barcode序列(6 bp)即可。
名称 |
序列 |
名称 |
序列 |
|
DNA Adapter 1 |
CGATGT |
DNA Adapter 25 |
ACTGAT |
|
DNA Adapter 2 |
TGACCA |
DNA Adapter 26 |
ATGAGC |
|
DNA Adapter 3 |
ACAGTG |
DNA Adapter 27 |
ATTCCT |
|
DNA Adapter 4 |
GCCAAT |
DNA Adapter 28 |
CAAAAG |
|
DNA Adapter 5 |
CAGATC |
DNA Adapter 29 |
CAACTA |
|
DNA Adapter 6 |
CTTGTA |
DNA Adapter 30 |
CACCGG |
|
DNA Adapter 7 |
ATCACG |
DNA Adapter 31 |
CACGAT |
|
DNA Adapter 8 |
TTAGGC |
DNA Adapter 32 |
CACTCA |
|
DNA Adapter 9 |
ACTTGA |
DNA Adapter 33 |
CAGGCG |
|
DNA Adapter 10 |
GATCAG |
DNA Adapter 34 |
CATGGC |
|
DNA Adapter 11 |
TAGCTT |
DNA Adapter 35 |
CATTTT |
|
DNA Adapter 12 |
GGCTAC |
DNA Adapter 36 |
CCAACA |
|
DNA Adapter 13 |
AGTCAA |
DNA Adapter 37 |
CGGAAT |
|
DNA Adapter 14 |
AGTTCC |
DNA Adapter 38 |
CTAGCT |
|
DNA Adapter 15 |
ATGTCA |
DNA Adapter 39 |
CTATAC |
|
DNA Adapter 16 |
CCGTCC |
DNA Adapter 40 |
CTCAGA |
|
DNA Adapter 17 |
GTAGAG |
DNA Adapter 41 |
GCGCTA |
|
DNA Adapter 18 |
GTCCGC |
DNA Adapter 42 |
TAATCG |
|
DNA Adapter 19 |
GTGAAA |
DNA Adapter 43 |
TACAGC |
|
DNA Adapter 20 |
GTGGCC |
DNA Adapter 44 |
TATAAT |
|
DNA Adapter 21 |
GTTTCG |
DNA Adapter 45 |
TCATTC |
|
DNA Adapter 22 |
CGTACG |
DNA Adapter 46 |
TCCCGA |
|
DNA Adapter 23 |
GAGTGG |
DNA Adapter 47 |
TCGAAG |
|
DNA Adapter 24 |
GGTAGC |
DNA Adapter 48 |
TCGGCA |
推荐Barcode组合:
2个样本:可使用(4, 6)、或(3, 19)。
3个样本:可使用(4, 6, 其他任意1个barcode)、或(3, 19, 其他任意1个barcode)、或(1, 5, 19)、或(3, 12, 15)等。
4个样本:可使用(4, 6, 其他任意2个barcode)、或(3, 19, 其他任意2个barcode)、或(3, 4, 6, 19)、或(1, 2, 5, 16)等。
质量控制
图. 接头Agilent 2100检测图。
相关产品
接头类型 |
货号 |
名称 |
规格 |
价格(元) |
|
短接头 |
单端 96 Index |
12611ES02 |
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1(48种) |
48×2 T |
1493 |
12612ES02 |
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 2(48种) |
48×2 T |
1493 |
||
双端 384 Index |
12613ES02 |
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 1(96 种) |
96×2 T |
2753 |
|
12614ES02 |
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 2(96 种) |
96×2 T |
2753 |
||
完整接头 |
12615ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4526 |
|
12616ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4536 |
||
12617ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4536 |
||
12618ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4536 |
||
Tn5接头 |
12610ES96 |
Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®(96 Index) |
96 T |
1365 |
HB220530
产品描述
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量文库构建专用配套试剂盒,共分为4个Set,每个Set中包含12种不同的Barcode接头,适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度保证了文库构建的稳定性和可重复性。
产品组分
编号 |
组分 |
产品规格 |
|
12×4T |
12×16 T |
||
12615 |
DNA Adapter 1-12 |
12 μL each |
48 uL each |
12616 |
DNA Adapter 13-24 |
12 μL each |
48 uL each |
12617 |
DNA Adapter 25-36 |
12 μL each |
48 uL each |
12618 |
DNA Adapter 37-48 |
12 μL each |
48 uL each |
运输和保存方法
冰袋运输,-20℃保存,有效期18个月。
注意事项
1)本试剂盒中DNA Adapter的浓度统一为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,可短暂存放于4℃。
3)小规格试剂盒(12×4 T)每种组分的DNA Adapter包装量足够进行4个DNA文库构建,共计足够进行48个DNA文库构建,大规格试剂盒(12×16 T)每种组分的DNA Adapter包装量足够进行16个DNA文库构建,共计足够进行192个DNA文库构建。
4)使用Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:
5’ – Universal Adapter – Insert DNA Sequence – DNA Barcode Adapter- 3’
5)试剂盒中提供的每种DNA Adapter中都包含Universal Adapter,且提供一种Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。
6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7)本产品仅作科研用途!
使用方法
DNA Adapter的序列如下:
Universal Adapter:5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’
Barcode Adapter:5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXX1ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
1XXXXXX表示接头的Barcode区域,其在每个接头中的序列见下表。测序前在Sample Sheet中只需输入这个Barcode序列(6 bp)即可。
名称 |
序列 |
名称 |
序列 |
|
DNA Adapter 1 |
CGATGT |
DNA Adapter 25 |
ACTGAT |
|
DNA Adapter 2 |
TGACCA |
DNA Adapter 26 |
ATGAGC |
|
DNA Adapter 3 |
ACAGTG |
DNA Adapter 27 |
ATTCCT |
|
DNA Adapter 4 |
GCCAAT |
DNA Adapter 28 |
CAAAAG |
|
DNA Adapter 5 |
CAGATC |
DNA Adapter 29 |
CAACTA |
|
DNA Adapter 6 |
CTTGTA |
DNA Adapter 30 |
CACCGG |
|
DNA Adapter 7 |
ATCACG |
DNA Adapter 31 |
CACGAT |
|
DNA Adapter 8 |
TTAGGC |
DNA Adapter 32 |
CACTCA |
|
DNA Adapter 9 |
ACTTGA |
DNA Adapter 33 |
CAGGCG |
|
DNA Adapter 10 |
GATCAG |
DNA Adapter 34 |
CATGGC |
|
DNA Adapter 11 |
TAGCTT |
DNA Adapter 35 |
CATTTT |
|
DNA Adapter 12 |
GGCTAC |
DNA Adapter 36 |
CCAACA |
|
DNA Adapter 13 |
AGTCAA |
DNA Adapter 37 |
CGGAAT |
|
DNA Adapter 14 |
AGTTCC |
DNA Adapter 38 |
CTAGCT |
|
DNA Adapter 15 |
ATGTCA |
DNA Adapter 39 |
CTATAC |
|
DNA Adapter 16 |
CCGTCC |
DNA Adapter 40 |
CTCAGA |
|
DNA Adapter 17 |
GTAGAG |
DNA Adapter 41 |
GCGCTA |
|
DNA Adapter 18 |
GTCCGC |
DNA Adapter 42 |
TAATCG |
|
DNA Adapter 19 |
GTGAAA |
DNA Adapter 43 |
TACAGC |
|
DNA Adapter 20 |
GTGGCC |
DNA Adapter 44 |
TATAAT |
|
DNA Adapter 21 |
GTTTCG |
DNA Adapter 45 |
TCATTC |
|
DNA Adapter 22 |
CGTACG |
DNA Adapter 46 |
TCCCGA |
|
DNA Adapter 23 |
GAGTGG |
DNA Adapter 47 |
TCGAAG |
|
DNA Adapter 24 |
GGTAGC |
DNA Adapter 48 |
TCGGCA |
推荐Barcode组合:
2个样本:可使用(4, 6)、或(3, 19)。
3个样本:可使用(4, 6, 其他任意1个barcode)、或(3, 19, 其他任意1个barcode)、或(1, 5, 19)、或(3, 12, 15)等。
4个样本:可使用(4, 6, 其他任意2个barcode)、或(3, 19, 其他任意2个barcode)、或(3, 4, 6, 19)、或(1, 2, 5, 16)等。
质量控制
图. 接头Agilent 2100检测图。
相关产品
接头类型 |
货号 |
名称 |
规格 |
价格(元) |
|
短接头 |
单端 96 Index |
12611ES02 |
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 1(48种) |
48×2 T |
1493 |
12612ES02 |
Hieff NGS® 96 Single Index Primer Kit for Illumina® , Set 2(48种) |
48×2 T |
1493 |
||
双端 384 Index |
12613ES02 |
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 1(96 种) |
96×2 T |
2753 |
|
12614ES02 |
Hieff NGS® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina® ,Set 2(96 种) |
96×2 T |
2753 |
||
完整接头 |
12615ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4526 |
|
12616ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4536 |
||
12617ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4536 |
||
12618ES04/16 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4 |
12×4/ 12×16 T |
1256/4536 |
||
Tn5接头 |
12610ES96 |
Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®(96 Index) |
96 T |
1365 |
HB220530
Q:构建得到的文库产量低的原因?
A:1、DNA 质量低,样本中含抑制物(抑制酶活性等)
Input DNA 制备过程中带入的高浓度金属离子螯合剂或者其他盐,可能会影响末端修复以及 A 尾添加等步骤的反应效率,DNA 在TE 溶液中进行片段化,不要在无菌超纯水中进行。
2、RNA 污染
样本中存在RNA 污染会导致DNA 定量不准确,使文库构建时DNA 上样量不足。
3、PCR free 的时候上样量不足
当使用完整接头且Input DNA 大于 200 ng 时候,不用 PCR 扩增。如果文库拷贝数过低不能进行直接测序,可在接头连接完成后对DNA 文库进行PCR 扩增。
4、接头出现降解:接头存储不当会出现降解,影响连接效率。一般稀释过的接头可在室温放置 48h。
判断接头是否降解的方法:
a.用安捷伦 2100 毛细血管电泳检测,通过电泳条带大小判断;如果未发生降解,则条带大小大概为 62bp(complete adapter),如果发生降解,则无条带或条带很小。
b.用Qubit、酶标仪等检测仪器进行浓度测量,粗略判断接头是否降解。
检测方法:取 1uL,15uM 的complete 接头(12615ES-12618ES)若 Qubit 检测浓度 600ng/ul 左右,则接头正常,反之若小于 600ng/ul,则接头可能降解成单链或小片段。酶标仪检测同理。
Q:最后一步扩增,短接头中Primer 和长接头的Primer 是否一致?
A:不一致。短接头建库:接头连接时候是连接一样的双端接头 PE Adapter,后期进行文库扩增再利用不同的 Index Primer 扩增出完整携带不同的DNA 文库。长接头建库:接头连接时候的连接的是带有不同Index 的完整接头,后期扩增的时候再用两端的通用引物 Primer Mix 扩增完整的文库,使用长接头时,若在PCR 扩增之前文库浓度就达到上机要求,则无需进行PCR 文库扩增。
Q:接头中index/Barcode 组合原则是什么?
A:碱基平衡,荧光平衡(详情可查看翊圣生物公众号微信软文 一文全面解析 NGS 接头的奥秘 )
暂无内容