微量样本DNA提取试剂盒|MolPure® Micro DNA Kit
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已发表文献
MolPure® Micro DNA Kit采用MolPure® DNA Column M3和新型的溶液体系,适用于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中快速地提取基因组DNA。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的乙醇沉淀。操作简便,可在30 min内完成单个样品的DNA提取和纯化工作。试剂盒内的MolPure® DNA Column M3可选择性吸附核酸,不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质,得到的DNA纯度高,可直接用于PCR、qPCR等实验。
试剂盒组分
类别 |
编号 |
组分名称 |
18780ES50 (50 T) |
18780ES70 (200 T) |
Part I |
18780-A |
Proteinase K (20 mg/mL) |
1 mL |
1 mL× 4 |
18780-B |
Carrier RNA |
200 μL |
800 μL |
|
Part II |
18780-C |
DNA吸附柱M3 (MolPure® DNA Column M3) |
50个 |
200个 |
18780-D |
2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3) |
50个 |
200个 |
|
18780-E |
裂解液LB (LB Buffer M3) |
11 mL |
44 mL |
|
18780-F |
结合液BD (BD Buffer M3) |
15 mL |
60 mL |
|
18780-G |
去蛋白液PL (PL Buffer M3) |
25 mL |
100 mL |
|
18780-H |
漂洗液W* (Wash Buffer*) |
13 mL |
50 mL |
|
18780-I |
洗脱液 (Elution Buffer) |
10 mL |
20 mL |
运输与保存方法
Part I组分冰袋运输,-20℃保存。Part II组分常温运输,常温保存。产品有效期12个月。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 结合液BD和去蛋白液PL低温时可能析出,可37℃温浴复溶至溶液澄清,不影响使用效果。
3. 结合液BD和去蛋白液PL中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途!
实验前准备
1. 自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,100%无水乙醇,液氮(组织研磨用),1.5 mL离心管等。
2. 所有的离心步骤均在室温完成,使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。
3. 首次使用前,在漂洗液W*瓶中加入4倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。如果发现由于运输或保管不当造成容量严重不准,请用量筒定容后再加入指定体积的无水乙醇。每次使用后盖紧瓶盖,保持瓶中的乙醇含量。
4. Carrier RNA使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用Carrier RNA,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液BD中加入4 μL Carrier RNA储存溶液, 将结合液BD与Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可(结合液BD容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的结合液BD中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。
操作方法
一、样本预处理:
1. 血液样本
1)取10-100 μL血液至1.5 mL离心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
【注】:不足100 μL时,需用裂解液LB补足。
2)加入100 µL结合液BD,充分混匀,70℃放置10 min。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在100 μL结合液BD中加入1 μL Carrier RNA储存溶液。
3)冷却后,加50 µL无水乙醇(自备,预冷),立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。
4)室温(15-25℃)放置3 min。
2. 血卡类样本
1)打孔机取2-3个3 mm直径的血卡纸片至1.5 mL离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
4)放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇10 min。
【注】:亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中10 min,期间每隔3 min涡旋振荡10 sec。
3. 微量组织
1)取微量组织(< 10 mg)至1.5 mL 离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃水浴锅或金属浴中 1 h至溶液变清亮,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。
4)冷却后,加200 µL无水乙醇(自备,预冷),立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。
5)室温(15-25℃)放置5 min。
4. 口香糖
1)取30 mg 口香糖至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇3 h。
【注】:亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中3 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。
4)放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
5)冷却后,加200 µL无水乙醇(自备,预冷),立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。
6)1,2000 rpm离心5 min,收集上清液。
5. 法医检材
1)烟头:取1 cm2 烟头,切成6块转移至1.5 mL离心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
毛发:剪取靠近毛囊部位0.5-1 cm的毛发,转移至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB、20 µL Proteinase K (20 mg/mL)和20 µL 1 M DTT溶液(自备),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。
4)放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
5)1,2000 rpm离心5 min,收集上清液。
二、DNA提取:
1. 将DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中,备用。
2. 将上述样本预处理液加入DNA吸附柱M3中,12,000 rpm离心1 min,弃掉废液。
【注】:混合液每次最大加入体积650 μL,可分多次离心。
3. 加入500 µL去蛋白液PL,12,000 rpm离心30 sec,弃废液。
4. 加入600 µL漂洗液W*,12,000 rpm室温离心30 sec,弃废液。
【注】:确保漂洗液W*已添加无水乙醇。
5. 重复一遍步骤4。
6. 将DNA吸附柱M3放回收集管,空柱12,000 rpm室温离心2 min,以除去残留的漂洗液W*。
7. 将DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL离心管中,在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脱液,室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液,即为DNA溶液。
【注】:可通过以下方式提高回收产量:①70℃预热洗脱液;②将DNA滤液再次上柱,室温放置2 min后,洗脱。
8. DNA溶液可置于-20℃长期保存。
HB220812
MolPure® Micro DNA Kit采用MolPure® DNA Column M3和新型的溶液体系,适用于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中快速地提取基因组DNA。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的乙醇沉淀。操作简便,可在30 min内完成单个样品的DNA提取和纯化工作。试剂盒内的MolPure® DNA Column M3可选择性吸附核酸,不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质,得到的DNA纯度高,可直接用于PCR、qPCR等实验。
试剂盒组分
类别 |
编号 |
组分名称 |
18780ES50 (50 T) |
18780ES70 (200 T) |
Part I |
18780-A |
Proteinase K (20 mg/mL) |
1 mL |
1 mL× 4 |
18780-B |
Carrier RNA |
200 μL |
800 μL |
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Part II |
18780-C |
DNA吸附柱M3 (MolPure® DNA Column M3) |
50个 |
200个 |
18780-D |
2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3) |
50个 |
200个 |
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18780-E |
裂解液LB (LB Buffer M3) |
11 mL |
44 mL |
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18780-F |
结合液BD (BD Buffer M3) |
15 mL |
60 mL |
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18780-G |
去蛋白液PL (PL Buffer M3) |
25 mL |
100 mL |
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18780-H |
漂洗液W* (Wash Buffer*) |
13 mL |
50 mL |
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18780-I |
洗脱液 (Elution Buffer) |
10 mL |
20 mL |
运输与保存方法
Part I组分冰袋运输,-20℃保存。Part II组分常温运输,常温保存。产品有效期12个月。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 结合液BD和去蛋白液PL低温时可能析出,可37℃温浴复溶至溶液澄清,不影响使用效果。
3. 结合液BD和去蛋白液PL中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途!
实验前准备
1. 自备设备和试剂:台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴,100%无水乙醇,液氮(组织研磨用),1.5 mL离心管等。
2. 所有的离心步骤均在室温完成,使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。
3. 首次使用前,在漂洗液W*瓶中加入4倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。如果发现由于运输或保管不当造成容量严重不准,请用量筒定容后再加入指定体积的无水乙醇。每次使用后盖紧瓶盖,保持瓶中的乙醇含量。
4. Carrier RNA使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用Carrier RNA,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液BD中加入4 μL Carrier RNA储存溶液, 将结合液BD与Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可(结合液BD容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在总共需要的结合液BD中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。
操作方法
一、样本预处理:
1. 血液样本
1)取10-100 μL血液至1.5 mL离心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
【注】:不足100 μL时,需用裂解液LB补足。
2)加入100 µL结合液BD,充分混匀,70℃放置10 min。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在100 μL结合液BD中加入1 μL Carrier RNA储存溶液。
3)冷却后,加50 µL无水乙醇(自备,预冷),立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。
4)室温(15-25℃)放置3 min。
2. 血卡类样本
1)打孔机取2-3个3 mm直径的血卡纸片至1.5 mL离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
4)放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇10 min。
【注】:亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中10 min,期间每隔3 min涡旋振荡10 sec。
3. 微量组织
1)取微量组织(< 10 mg)至1.5 mL 离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃水浴锅或金属浴中 1 h至溶液变清亮,期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。
4)冷却后,加200 µL无水乙醇(自备,预冷),立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。
5)室温(15-25℃)放置5 min。
4. 口香糖
1)取30 mg 口香糖至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇3 h。
【注】:亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中3 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。
4)放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
5)冷却后,加200 µL无水乙醇(自备,预冷),立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。
6)1,2000 rpm离心5 min,收集上清液。
5. 法医检材
1)烟头:取1 cm2 烟头,切成6块转移至1.5 mL离心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。
毛发:剪取靠近毛囊部位0.5-1 cm的毛发,转移至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB、20 µL Proteinase K (20 mg/mL)和20 µL 1 M DTT溶液(自备),立刻涡旋振荡充分混匀。
2)放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
3)加入200 µL结合液BD,充分混匀。
【注】:若预期DNA含量较低,建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。
4)放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。
【注】:亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h,期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。
5)1,2000 rpm离心5 min,收集上清液。
二、DNA提取:
1. 将DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中,备用。
2. 将上述样本预处理液加入DNA吸附柱M3中,12,000 rpm离心1 min,弃掉废液。
【注】:混合液每次最大加入体积650 μL,可分多次离心。
3. 加入500 µL去蛋白液PL,12,000 rpm离心30 sec,弃废液。
4. 加入600 µL漂洗液W*,12,000 rpm室温离心30 sec,弃废液。
【注】:确保漂洗液W*已添加无水乙醇。
5. 重复一遍步骤4。
6. 将DNA吸附柱M3放回收集管,空柱12,000 rpm室温离心2 min,以除去残留的漂洗液W*。
7. 将DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL离心管中,在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脱液,室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液,即为DNA溶液。
【注】:可通过以下方式提高回收产量:①70℃预热洗脱液;②将DNA滤液再次上柱,室温放置2 min后,洗脱。
8. DNA溶液可置于-20℃长期保存。
HB220812
Q:试剂盒中的蛋白酶 K 没有了,有替代的吗?
A:盒子里的浓度是 20 mg/mL 的蛋白酶 K,客户可以自行购买。
Q:组织必须要用液氮研磨吗?
A:建议使用液氮研磨成细碎粉末后再加入裂解液(LB Buffer)和蛋白酶 K(Proteinase K)匀浆处理。研磨不充分将会降低DNA 产量。
Q:可以提取细菌样本吗?
A:细菌有细胞壁,用这个可能效果不太好,建议用专门用作于细菌提取核酸的 18806 来提。
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