MolPure^® Micro DNA Kit采用MolPure^® DNA Column M3和新型的溶液体系，适用于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中快速地提取基因组DNA。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的乙醇沉淀。操作简便，可在30 min内完成单个样品的DNA提取和纯化工作。试剂盒内的MolPure^® DNA Column M3可选择性吸附核酸，不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质，得到的DNA纯度高，可直接用于PCR、qPCR等实验。

 

试剂盒组分

类别	编号	组分名称	18780ES50 (50 T)	18780ES70 (200 T)
Part I	18780-A	Proteinase K (20 mg/mL)	1 mL	1 mL× 4
	18780-B	Carrier RNA	200 μL	800 μL
Part II	18780-C	DNA吸附柱M3 (MolPure® DNA Column M3)	50个	200个
	18780-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3)	50个	200个
	18780-E	裂解液LB (LB Buffer M3)	11 mL	44 mL
	18780-F	结合液BD (BD Buffer M3)	15 mL	60 mL
	18780-G	去蛋白液PL (PL Buffer M3)	25 mL	100 mL
	18780-H	漂洗液W* (Wash Buffer*)	13 mL	50 mL
	18780-I	洗脱液 (Elution Buffer)	10 mL	20 mL

 

运输与保存方法

Part I组分冰袋运输，-20℃保存。Part II组分常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

 

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 结合液BD和去蛋白液PL低温时可能析出，可37℃温浴复溶至溶液澄清，不影响使用效果。

3. 结合液BD和去蛋白液PL中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途！

 

实验前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，100%无水乙醇，液氮（组织研磨用），1.5 mL离心管等。

2. 所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. 首次使用前，在漂洗液W^*瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入指定体积的无水乙醇。每次使用后盖紧瓶盖，保持瓶中的乙醇含量。

4. Carrier RNA使用方法：如果起始处理量很少，我们推荐使用Carrier RNA，如果预期有较大量核酸产量，用户可以根据需要选择是否加入Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液BD中加入4 μL Carrier RNA储存溶液， 将结合液BD与Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可（结合液BD容易起泡沫，请勿使用涡旋振荡混匀）。也可根据样品数量，在总共需要的结合液BD中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

 

操作方法

 

一、样本预处理：

1. 血液样本

1）取10-100 μL血液至1.5 mL离心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

【注】：不足100 μL时，需用裂解液LB补足。

2）加入100 µL结合液BD，充分混匀，70℃放置10 min。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在100 μL结合液BD中加入1 μL Carrier RNA储存溶液。

3）冷却后，加50 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

4）室温（15-25℃）放置3 min。

 

2. 血卡类样本

1）打孔机取2-3个3 mm直径的血卡纸片至1.5 mL离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇10 min。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中10 min，期间每隔3 min涡旋振荡10 sec。

 

3. 微量组织

1）取微量组织（< 10 mg）至1.5 mL 离心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃水浴锅或金属浴中 1 h至溶液变清亮，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）冷却后，加200 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

5）室温（15-25℃）放置5 min。

 

4. 口香糖

1）取30 mg 口香糖至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇3 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中3 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

5）冷却后，加200 µL无水乙醇（自备，预冷），立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心收集管盖内壁液滴。

6）1,2000 rpm离心5 min，收集上清液。

 

5. 法医检材

1）烟头：取1 cm² 烟头，切成6块转移至1.5 mL离心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

毛发：剪取靠近毛囊部位0.5-1 cm的毛发，转移至1.5 mL离心管中。加入280 µL 裂解液LB、20 µL Proteinase K (20 mg/mL)和20 µL 1 M DTT溶液（自备），立刻涡旋振荡充分混匀。

2）放置于56℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

3）加入200 µL结合液BD，充分混匀。

【注】：若预期DNA含量较低，建议在200 μL结合液BD中加入2 μL Carrier RNA储存溶液。

4）放置于70℃轨道摇床上面900 rpm振摇1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴锅或金属浴中1 h，期间每隔10 min涡旋振荡10 sec。

5）1,2000 rpm离心5 min，收集上清液。

 

二、DNA提取：

1. 将DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中，备用。

2. 将上述样本预处理液加入DNA吸附柱M3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

3. 加入500 µL去蛋白液PL，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。

4. 加入600 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室温离心30 sec，弃废液。

【注】：确保漂洗液W^*已添加无水乙醇。

5. 重复一遍步骤4。

6. 将DNA吸附柱M3放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W^*。

7. 将DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL离心管中，在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液，即为DNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

8. DNA溶液可置于-20℃长期保存。

 

HB220812

Q:试剂盒中的蛋白酶 K 没有了，有替代的吗？

A:盒子里的浓度是 20 mg/mL 的蛋白酶 K，客户可以自行购买。

Q:组织必须要用液氮研磨吗？

A:建议使用液氮研磨成细碎粉末后再加入裂解液(LB Buffer)和蛋白酶 K(Proteinase K)匀浆处理。研磨不充分将会降低DNA 产量。

Q：可以提取细菌样本吗？

A:细菌有细胞壁，用这个可能效果不太好，建议用专门用作于细菌提取核酸的 18806 来提。