YeaCell^TM 1st Strand Synthesis kit for Single Cell 3ʹ RNA-seq利用Oligo (dT)18及TSO Primer引物对单细胞转录本基因进行逆转录，适用于微流控的微量体系。其产物可以经过通用引物进行PCR反应富集cDNA，然后使用翌圣的酶切建库试剂盒，构建测序文库。本产品采用了在M-MLV(RNase H-)Reverse Transcriptase基础上经过多点突变的全新逆转录酶，具有高逆转录效率，低错配率，高保真度等优势。

 

产品组分

组分编号	名称	13594ES04	13594ES08	13594ES95
13594-A	RT buffer	76 μL	152 μL	2×1130 μL
13594-B	RT Enzyme mix	36 μL	72 μL	1056 μL

 

运输与保存方法

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

适用范围

1.适用于哺乳动物或者没有细胞壁的真核生物细胞的高通量单细胞全长cDNA合成。

2.10 pg~1 μg带有poly（A）的总RNA。

3.本品不适合原核生物总RNA和有降解的RNA，如FFPE RNA。

 

注意事项

1.请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. 建库需要的其他试剂需自备或另外购买。

3.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法
方法1：若实验方案为高通量单细胞实验，根据不同的单细胞仪器进行适当调整

1）准备Reaction Buffer，提前将RT buffer，Template Switch Oligo（自备），Reducing Agent B（自备）室温解冻，颠倒混匀，微离心于管底，置于冰上备用。

表1 Reaction Buffer反应体系

组分/样品	体积（μL）
RT buffer	18.8
Template Switch Oligo	2.4
Reducing Agent B	2
RT Enzyme mix	8.8
Total	32

2）按照上表将各组分混合于8联排低吸附离心管中，枪头缓慢吹打瞬离，置于冰上。

3）后续使用参照Cat#12520ES（适配10x Genomics单细胞仪器）说明书进行后续操作。

方法2：若为逆转录实验，参考此步骤

Step 1 RNA变性

1.按照表2配置反应液：

表2 RNA预变性反应体系

名称	体积（μL）
Oligo (dT)18（20~50 mM）(自备)	1
已裂解的cell or RNA	12
Total	13

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖80℃ on）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一链cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 将第一链合成试剂从-20°C取出，室温解冻，颠倒混匀后瞬离。按表3所示，配制第一链cDNA合成的反应液。

表3 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积（μL）
上一步	13
5×RT Buffer	4
TSO Primer（需自行摸索浓度）(自备)	1
RT Enzyme mix	1
ddH2O	1
Total	20

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖105℃ on）42℃，90 min；70℃，15min；4℃，hold。

3.产物可直接用于二链cDNA合成或于-80℃暂存。

Ver. CN20230706