T4 RNA连接酶1(T4 RNA Ligase 1)
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COA
已发表文献
T4 RNA Ligase 1，即T4 RNA连接酶1，是一种ATP-依赖的可催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 1可进行RNA之间的连接（效率最高），单链DNA与单链RNA之间的连接（效率不高），也可用于单链DNA之间的连接（效率很低）。适用于单链RNA分子的连接、NGS中miRNA文库构建的 5'端接头连接。
产品信息
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货号 |
14651ES80/ 14651ES90 |
|
规格 |
1,000 U / 5,000 U |
|
单位定义 |
在37℃条件下，30分钟内将1 nmol 的5 -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量定义为1 U。 |
|
来源 |
大肠杆菌表达的来源为T4嗜菌体的重组蛋白 |
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推荐反应条件 |
10×T4 RL1 Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25℃)，100 mM MgCl2，20 mM DTT；最适37℃孵育。 |
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失活条件 |
65℃加热15 min或煮沸2 min可使T4 RNA Ligase 1失活/加入终浓度50 mM EDTA pH 8.0可使T4 RNA Ligase 1反应终止。 |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
14651ES80 |
14651ES90 |
|
14651-A |
T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
|
14651-B |
10×T4 RL1 Reaction Buffer |
200 μL |
1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用说明
1. 单链RNA的环化连接反应参考下表在冰浴中配制如下反应体系
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组分 |
使用量（μL） |
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10×T4 RL1 Reaction Buffer |
2 |
|
1 mM ATP |
1 |
|
单链RNA (20 μM) |
0.5 |
|
PEG-8000 (50%) |
8 |
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T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL) |
1 |
|
DEPC水 |
Up to 20 |
2. 单链RNA或DNA的分子间连接反应，参考下表在冰浴中配制如下反应体系
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组分 |
使用量（μL） |
|
10×T4 RL1 Reaction Buffer |
2 |
|
10 mM ATP |
2 |
|
单链RNA (10 μM) |
2 |
|
单链DNA (10 μM) |
2 |
|
PEG-8000 (50%) |
8 |
|
T4 RNA Ligase 1 |
2 |
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DEPC水 |
Up to 20 |
3. 连接反应：37℃孵育30 min*。
*如果发现效果欠佳可以适当延长连接反应时间或尝试25℃孵育2 h或16℃孵育16 h。
4. 终止反应：65℃孵育15 min或煮沸2 min，即可终止反应。
注意事项
1. 本品连接的底物无论是单链RNA还是单链DNA，都需要确保5'末端磷酸化或腺苷酰化，同时3'末端是羟基。
2. 可根据具体应用选择合适的操作方法，需准备额外的试剂，如RNase inhibitor、DEPC水等。
3. 根据连接反应的类型，推荐在反应体系中加入适量的PEG-8000。建议连接单链RNA或DNA的分之间连接反应体系中PEG-8000的终浓度为15%-25%，这样可以显著提高酶活性，同时不影响反应特性。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230419
T4 RNA Ligase 1，即T4 RNA连接酶1，是一种ATP-依赖的可催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 1可进行RNA之间的连接（效率最高），单链DNA与单链RNA之间的连接（效率不高），也可用于单链DNA之间的连接（效率很低）。适用于单链RNA分子的连接、NGS中miRNA文库构建的 5'端接头连接。
产品信息
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货号 |
14651ES80/ 14651ES90 |
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规格 |
1,000 U / 5,000 U |
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单位定义 |
在37℃条件下，30分钟内将1 nmol 的5 -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量定义为1 U。 |
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来源 |
大肠杆菌表达的来源为T4嗜菌体的重组蛋白 |
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推荐反应条件 |
10×T4 RL1 Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25℃)，100 mM MgCl2，20 mM DTT；最适37℃孵育。 |
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失活条件 |
65℃加热15 min或煮沸2 min可使T4 RNA Ligase 1失活/加入终浓度50 mM EDTA pH 8.0可使T4 RNA Ligase 1反应终止。 |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
14651ES80 |
14651ES90 |
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14651-A |
T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
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14651-B |
10×T4 RL1 Reaction Buffer |
200 μL |
1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用说明
1. 单链RNA的环化连接反应参考下表在冰浴中配制如下反应体系
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组分 |
使用量（μL） |
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10×T4 RL1 Reaction Buffer |
2 |
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1 mM ATP |
1 |
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单链RNA (20 μM) |
0.5 |
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PEG-8000 (50%) |
8 |
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T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL) |
1 |
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DEPC水 |
Up to 20 |
2. 单链RNA或DNA的分子间连接反应，参考下表在冰浴中配制如下反应体系
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组分 |
使用量（μL） |
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10×T4 RL1 Reaction Buffer |
2 |
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10 mM ATP |
2 |
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单链RNA (10 μM) |
2 |
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单链DNA (10 μM) |
2 |
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PEG-8000 (50%) |
8 |
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T4 RNA Ligase 1 |
2 |
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DEPC水 |
Up to 20 |
3. 连接反应：37℃孵育30 min*。
*如果发现效果欠佳可以适当延长连接反应时间或尝试25℃孵育2 h或16℃孵育16 h。
4. 终止反应：65℃孵育15 min或煮沸2 min，即可终止反应。
注意事项
1. 本品连接的底物无论是单链RNA还是单链DNA，都需要确保5'末端磷酸化或腺苷酰化，同时3'末端是羟基。
2. 可根据具体应用选择合适的操作方法，需准备额外的试剂，如RNase inhibitor、DEPC水等。
3. 根据连接反应的类型，推荐在反应体系中加入适量的PEG-8000。建议连接单链RNA或DNA的分之间连接反应体系中PEG-8000的终浓度为15%-25%，这样可以显著提高酶活性，同时不影响反应特性。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230419
暂无内容
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