2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 以热启动多重PCR酶制剂 与 2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因扩增,快速便捷地用于多重PCR反应,具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求, 可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物,也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。
组分信息
产品编号 |
组分名称 |
13283 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix |
储存条件
2~8℃保存,有效期2年。
注意事项
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
2.本产品仅用作科研用途!
参考反应体系
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix |
15 |
1× |
Primer mix |
x |
0.1 μM-0.5 μM |
模板 DNA |
1 ng -400 ng |
– |
无菌超纯水 |
up to 30 |
– |
【注】:1)上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。
2)参考建议:每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。
3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。
第一轮扩增程序
循环步骤 |
温度(℃) |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
3 min |
1 |
变性 |
95℃ |
20 sec |
15-45 |
退火延伸 |
60℃ |
4-10 min |
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】:在 PCR 仪上设置上表中的反应程序进行多重 PCR 反应(设置热盖温度至 105℃左右)。 退火延伸时间:100 重 PCR 推荐 4 min;1000 重推荐 8-10 min 需要自己根据引物情况摸索。
PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。
第二轮扩增程序
循环步骤 |
温度(℃) |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
3 min |
1 |
变性 |
95℃ |
20 sec |
15-45 |
退火 |
60℃ |
1 min |
|
延伸 |
72℃ |
30 sec |
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】:退火温度和时间上推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min,可以在30 s-1 min 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。
Ver.CN20230816
本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 以热启动多重PCR酶制剂 与 2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因扩增,快速便捷地用于多重PCR反应,具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求, 可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物,也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。
组分信息
产品编号 |
组分名称 |
13283 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix |
储存条件
2~8℃保存,有效期2年。
注意事项
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
2.本产品仅用作科研用途!
参考反应体系
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix |
15 |
1× |
Primer mix |
x |
0.1 μM-0.5 μM |
模板 DNA |
1 ng -400 ng |
– |
无菌超纯水 |
up to 30 |
– |
【注】:1)上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。
2)参考建议:每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。
3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。
第一轮扩增程序
循环步骤 |
温度(℃) |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
3 min |
1 |
变性 |
95℃ |
20 sec |
15-45 |
退火延伸 |
60℃ |
4-10 min |
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】:在 PCR 仪上设置上表中的反应程序进行多重 PCR 反应(设置热盖温度至 105℃左右)。 退火延伸时间:100 重 PCR 推荐 4 min;1000 重推荐 8-10 min 需要自己根据引物情况摸索。
PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。
第二轮扩增程序
循环步骤 |
温度(℃) |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
3 min |
1 |
变性 |
95℃ |
20 sec |
15-45 |
退火 |
60℃ |
1 min |
|
延伸 |
72℃ |
30 sec |
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】:退火温度和时间上推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min,可以在30 s-1 min 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。
Ver.CN20230816
Q:主要有哪些应用?
A:多基因分型、食品病原微生物检测等。
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