一步法多重定量PCR试剂盒|C58P1 nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit
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COA
已发表文献
Hieff Unicon® C58P1 nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
||
|
13173ES60 (100 T) |
13173ES80 (1000 T) |
13173ES92 (10000 T) |
||
|
13173-A |
2×Hifair® V MP Buffer |
1.25 mL |
12.5 mL |
125 mL |
|
13173-B |
Hifair® V Enzyme Mix |
100 μL |
1 mL |
10 mL |
【注】1) 2×Hifair® V MP Buffer为C58P1 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
2) Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
适用机型
需添加High Rox适用机型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
需添加Low Rox 适用机型： ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
不需要Rox校正的仪器型号：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
反应体系（以25 μL为例）
|
组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
2×Hifair® V MP Buffer |
12.5 |
1× |
|
Hifair® V Enzyme Mix |
1 |
– |
|
Primer Mix (10 μM) |
各1 |
0.25 μM |
|
Probe Mix (10 μM) |
各0.25 |
0.1 μM |
|
模板RNA |
1-10 μL |
– |
|
RNase Free H2O |
to 25 μL |
– |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.25 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制CT在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25-50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
|
反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
|
1 |
逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
|
2 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
3 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
|
58℃b |
30 secc |
【注】
a) 逆转录：42℃或者50℃均可。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
相关产品
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit |
11213ES60 |
100 T |
|
11213ES80 |
1000 T |
|
|
11213ES92 |
10000 T |
|
|
Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus) |
11214ES60 |
100 T |
|
11214ES80 |
1000 T |
|
|
11214ES92 |
10000 T |
|
|
Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶 |
10717ES72 |
250 U |
|
Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体 |
31303ES60 |
100 μg |
|
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶 |
11300ES92 |
10000 U |
|
11300ES93 |
5×10000 U |
|
|
Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free) |
10703ES10 |
10 KU |
|
10703ES60 |
100 KU |
|
|
10703ES70 |
200 KU |
|
|
Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂 |
10603ES05 |
2 KU |
|
10603ES10 |
10 KU |
|
|
10603ES20 |
100 KU |
|
|
10603ES60 |
200 KU |
|
|
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG |
10303ES60 |
100 U |
|
10303ES76 |
500 U |
|
|
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） |
10128ES72 |
250 μL |
|
10128ES80 |
1 mL |
|
|
COVID-19-pseudovirus（2019-nCOV假病毒） |
11900ES03 |
1 mL |
|
SARS-pseudovirus（SARS假病毒） |
11903ES70 |
1 mL |
|
MERS-pseudovirus（MERS假病毒） |
11904ES70 |
1 mL |
HB200903
Hieff Unicon® C58P1 nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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13173ES60 (100 T) |
13173ES80 (1000 T) |
13173ES92 (10000 T) |
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13173-A |
2×Hifair® V MP Buffer |
1.25 mL |
12.5 mL |
125 mL |
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13173-B |
Hifair® V Enzyme Mix |
100 μL |
1 mL |
10 mL |
【注】1) 2×Hifair® V MP Buffer为C58P1 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
2) Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
适用机型
需添加High Rox适用机型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
需添加Low Rox 适用机型： ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
不需要Rox校正的仪器型号：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
反应体系（以25 μL为例）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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2×Hifair® V MP Buffer |
12.5 |
1× |
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Hifair® V Enzyme Mix |
1 |
– |
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Primer Mix (10 μM) |
各1 |
0.25 μM |
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Probe Mix (10 μM) |
各0.25 |
0.1 μM |
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模板RNA |
1-10 μL |
– |
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RNase Free H2O |
to 25 μL |
– |
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.25 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制CT在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25-50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
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反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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1 |
逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
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2 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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3 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
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58℃b |
30 secc |
【注】
a) 逆转录：42℃或者50℃均可。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit |
11213ES60 |
100 T |
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11213ES80 |
1000 T |
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11213ES92 |
10000 T |
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Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus) |
11214ES60 |
100 T |
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11214ES80 |
1000 T |
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11214ES92 |
10000 T |
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Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶 |
10717ES72 |
250 U |
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Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体 |
31303ES60 |
100 μg |
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Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶 |
11300ES92 |
10000 U |
|
11300ES93 |
5×10000 U |
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Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free) |
10703ES10 |
10 KU |
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10703ES60 |
100 KU |
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10703ES70 |
200 KU |
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Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂 |
10603ES05 |
2 KU |
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10603ES10 |
10 KU |
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10603ES20 |
100 KU |
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10603ES60 |
200 KU |
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Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG |
10303ES60 |
100 U |
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10303ES76 |
500 U |
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dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） |
10128ES72 |
250 μL |
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10128ES80 |
1 mL |
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COVID-19-pseudovirus（2019-nCOV假病毒） |
11900ES03 |
1 mL |
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SARS-pseudovirus（SARS假病毒） |
11903ES70 |
1 mL |
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MERS-pseudovirus（MERS假病毒） |
11904ES70 |
1 mL |
HB200903
暂无内容
暂无内容