操作指南

8. 凝胶取出：

1) 电泳完成后关断电源、拔出电源插头；

2) 移开上盖，小心取出电泳芯，倒出电泳缓冲液。为防止缓冲液漏洒，请在打开夹子前倒掉缓冲液；

3) 打开夹子，取出凝胶板；

4) 轻轻分离两块玻璃板，从凝胶板中取出凝胶；

5) 采用胶面向下，将胶与玻璃板浸泡在转移缓冲液中，使凝胶与玻璃板分离；

6) 用蒸馏去离子水清洗PET 4迷你垂直电泳槽的电泳芯、缓冲液槽等.

质量保证

翌圣 PET 4 迷你垂直电泳槽为用户提供为期2年的质量保证。凡由产品的原料及制作工艺造成的产品缺陷，在产品的质量保证期内均负责免费维修或更换。

如有下列情况发生，则产品不在质量保证范围之内：

1. 由不正确的操作引起的损坏；

2. 由非我公司指定维修人员的维修改造引起的损坏；

3. 一般性易损部件，如：铂金丝、玻璃板、橡胶垫等；

4. 使用有机溶剂造成的损坏；

附表1蛋白胶每孔最大上样量

HB221026

翌圣 PET4迷你垂直电泳槽操作手册可运行市场多个品牌的预制胶和手灌胶，最多可4块凝胶同时运行；兼容1-D垂直和2-D双向电泳应用。配件齐全，满足制胶及电泳所有环节，也使得手灌胶变得简便快捷。

该产品标配1.5mm梳子

结构信息

1. 凝胶版准备：

1)  正确放置保证灌胶框水平于操作台上，并打开灌胶框手柄；按所需凝胶厚度选择边条玻璃板，将短玻璃放置其上；带边条玻璃板的标记端向上，将两块玻璃板滑入灌胶框与水平定位结构（红圈）对齐，使短玻璃板一面朝向前方（图1，A）；【注】：确认标记方向正确；玻璃板方向错误或者未对齐会造成漏胶。

2) 玻璃板到位后关闭灌胶框手柄，将玻璃板夹紧在灌胶框中，并检查玻璃板底部是否平齐（图1，B）；

3) 保持灌胶框手柄关闭，将灌胶框放置于制胶底座的制胶密封垫上。同时将凸轮杠杆压在带边条的玻璃板上（图1，C）；

4) 重复上述步骤可制作另一块胶板。

A                                                                         B                                                                              C

 图1 凝胶板准备

2. 灌胶：

不连续聚丙烯酰胺凝胶

1) 预先可将梳子完全放入组合好的凝胶夹中，在梳齿下端1 cm处作标记。用来粗略估计分离胶添加高度；

2) 混合所有试剂来制作分离胶单体溶液。将溶液注入玻璃板之间至标记处。注入溶液时须平稳以防止其与空气混合；立即以水或者异丙醇覆盖溶液表面。注意：如果用水覆盖须小心缓慢平稳加入以防与溶液混合；

3) 放置45 min到 1 h使凝胶聚合（或者根据不同品牌的配胶试剂盒要求，进行判断凝胶情况）。可用双蒸水彻底清洗凝胶表面。不要让醇类物质在胶上超过1小时以防止上部凝胶脱水；

4) 准备浓缩胶单体溶液。注入浓缩胶溶液前用滤纸使分离胶表面干燥；将溶液注入玻璃板之间直至与短玻璃板平齐；在边条之间从上部插入所需的梳子，确认梳子两端突起在边条之间引导，完全插入直至梳子背脊与短玻璃板对齐；

5) 放置30-45 min使浓缩胶聚合（或者根据不同品牌的配胶试剂盒要求，进行判断凝胶情况）；

6) 轻轻取出梳子并以蒸馏水或缓冲液彻底清洗凝胶表面。以蒸馏水，去离子水清洗用过的灌胶架和制胶底座。

连续聚丙烯酰胺凝胶

1) 混合所有试剂来制作凝胶单体溶液，将溶液注入玻璃板之间直至与短玻璃板平齐；

2) 在边条之间从上部插入所需的梳子，确认梳子两端突起在边条之间引导。完全插入直至梳子背脊与短玻璃板对齐；

3) 放置45 min到 1 h使凝胶聚合（或者根据不同品牌的配胶试剂盒要求，进行判断凝胶情况）；

4) 轻轻取出梳子并以蒸馏水或缓冲液彻底清洗凝胶表面；

5) 以蒸馏水，去离子水清洗用过的夹胶框和制胶架。

3. 电泳模块组装与上样所需材料：

1) 准备洁净干燥的电泳缓冲液槽；电泳芯模块（1个电泳芯模块只能用于1或2块胶，做3或4块胶需要2个模块）；电泳缓冲液（1-2块胶700 mL；3-4块胶1,000 mL）；

【注】：只运行2块胶时只需使用电极插头的电泳芯。运行4块胶时，电极插头的电泳芯和蘑菇头电泳芯均要使用，每个组件2块胶。

2) 打开灌胶架并放置于干净平整操作台上（图2，A）；

3) 将第一块凝胶三明治以短玻璃板朝内侧放置于凝胶支撑架上，凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个。放置第一块胶时须小心确认夹胶框保持平衡状态不会翻倒。在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶，共有两块胶相对中心倾斜；如果运行奇数胶（1或3块胶），则须使用缓冲液挡板（图2，B）；

4) 同时将2块胶板向中心捏紧，使胶板紧贴密封条，并且需短玻璃板顶住密封条台阶；然后双手同时向内合拢两侧的边卡，使其锁定到位；边卡会推动胶板使短玻璃板紧贴U型密封条的凹槽，以防止漏液（请确认短玻璃板没有压住密封条台阶）（图2，C）；

5) 此时可以用缓冲液清洗样品孔和上样（图2，D），请不要尝试在胶板压住密封条台阶时合拢夹胶框夹。

【注】：只运行1-2块胶时请不要把蘑菇头电泳芯放入电泳仪中，那样做会产生额外的热，影响电泳分离效果。

  A                                                       B                                                          C                                                         D       

图 2 安装迷你垂直电泳槽的电泳模块

4. 蛋白上样：

1) 向电泳槽中注入电泳缓冲液，外槽至外玻璃板上沿之下，内槽加满；

2) 样本可在电泳芯被放入电泳仪之前或之后进行；

3) 使用注射器或加样枪将样品加入样品孔中（加样孔体积可参考附件1）。

【注】：加样时应缓慢使样品均匀沉降于样品孔底部。注意不要用针头或加样器头刺破胶孔底部；正极和负极均需注入缓冲液，建议正负极缓冲液的液面等高。

5. 在缓冲液槽中放置电泳模块：

【注】：所需缓冲液体积：2块胶700 mL；4块胶1,000 mL；缓冲液槽具有两个位置可放置两个模块：带插头电泳芯在后，蘑菇头电泳芯在前。

1) 首先把缓冲液槽放置于平整桌面上，使正面（具有2-Gels和4-Gels标记的那一面）朝前。如果方向正确，槽边缘的红色标记应该在右边，黑色标记在左边；

2) 如果只运行2块胶则只需用带插头电泳芯，将其放在后部位置上使得红色（+）极与槽右侧的红色标记相对应；

3) 如需做4块胶，除放入带插头电泳芯外，还要将蘑菇头电泳芯放入前部位置。确认两者的红色（+）极与槽右侧的红色标记相对应。注意，位置和方向的错误会使上盖无法盖合；

4) 在缓冲液槽中加入缓冲液至标记位置。

6. 缓冲液槽装配：

将上盖盖在缓冲液槽上。确认颜色标记的插头与插座相对应，插头、插座的匹配可以使定位准确，上盖上的障碍物可以防止定位错误。注意，缓冲液槽两侧的尖突出部分应该从上盖的狭缝中穿出，以保证上盖的正确闭合。此时用拇指持续用力按压上盖，直到压紧在缓冲液槽上。

7. 电源条件：

1) 将电源插头认准正负极插入电泳仪电源插孔内；

2) 给迷你垂直电泳槽通电开始电泳。恒压200 V是SDS-PAGE和多数native PAGE电泳的推荐条件，可以被用于2块胶和4块胶上，不同应用其优化的电压条件会不同。在200 V电压条件下运行SDS-PAGE 大约需要35 min。