SP HP强阳离子交换预装柱5mL
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
SP强阳离子交换层析填料HP以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-SO3–。
本品SP强阳离子交换预装柱是SP强阳离子交换层析填料HP的中压预装柱，规格为5 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品性质
|
基质 |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
|
粒径 |
24-45 µm |
|
离子交换类型 |
强阳离子 |
|
载量 |
～0.15-0.20 mmol H+/mL 基质 |
|
耐压 |
0.3 MPa |
|
推荐使用流速 |
60~150cm/h |
|
pH范围 |
4-13（长期）/ 3-14（短期） |
|
储存缓冲液 |
20%乙醇，0.2M NaAc |
|
柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm（5 mL） |
运输和保存方法
冰袋运输。4-30℃保存，有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH（通常低于目的物等电点1个 pH 单位）缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐（如 1M NaCl）的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1：阳离子交换缓冲液
|
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度（mM） |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
|
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
|
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
|
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
|
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
|
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
|
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
|
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
|
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
|
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
|
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
|
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
|
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
|
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl– |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4）利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3）层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
|
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。 |
|
样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
||
|
洗脱样品较杂 |
填料重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。 |
|
平衡不充分 |
增加平衡液体积，确保填料充分平衡/洗杂。 |
HB220708
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
SP强阳离子交换层析填料HP以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-SO3–。
本品SP强阳离子交换预装柱是SP强阳离子交换层析填料HP的中压预装柱，规格为5 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品性质
|
基质 |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
|
粒径 |
24-45 µm |
|
离子交换类型 |
强阳离子 |
|
载量 |
～0.15-0.20 mmol H+/mL 基质 |
|
耐压 |
0.3 MPa |
|
推荐使用流速 |
60~150cm/h |
|
pH范围 |
4-13（长期）/ 3-14（短期） |
|
储存缓冲液 |
20%乙醇，0.2M NaAc |
|
柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm（5 mL） |
运输和保存方法
冰袋运输。4-30℃保存，有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH（通常低于目的物等电点1个 pH 单位）缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐（如 1M NaCl）的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1：阳离子交换缓冲液
|
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度（mM） |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
|
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
|
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
|
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
|
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
|
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
|
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
|
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
|
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
|
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
|
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
|
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
|
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
|
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl– |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4）利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3）层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
|
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。 |
|
样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
||
|
洗脱样品较杂 |
填料重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。 |
|
平衡不充分 |
增加平衡液体积，确保填料充分平衡/洗杂。 |
HB220708
暂无内容
暂无内容