产品描述

Hieff NGS^® DNA Selection Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理，配合精心优化过的缓冲体系，可用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选、纯化。本产品可适用于各品牌的DNA、RNA建库试剂盒，和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同，片段回收效率和文库大小分布均与AMPure XP Beads高度吻合。

 

运输与保存方法

冰袋运输。2-8℃保存，效期一年。避免冷冻！

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3）80%乙醇需现用现配，否则将影响回收效率。

4）进行长度分选时，初始样品体积需≥100μL，不足时请用超纯水补齐。样品体积太小，将导致移液误差增大，进而影响分选的准确性。

5) 本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 长度分选（双轮法）

长度分选操作流程如图1所示，具体操作如下。

图1双轮分选操作流程

1）请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2）根据要求，参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠，涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。

3）室温孵育5 min。

4）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心转移上清到干净的离心管中。

注意：转移上清时，请残留2 μL液体于管底，切勿全部吸出上清，避免吸到磁珠并影响分选效果。

举例：当初始体积为100 μL，第一轮使用0.8×比例，即加入80 μL磁珠，推荐吸出178 μL的上清。

5）参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠。

6）涡旋混匀或移液器吹打10次混匀，室温静置5 min。

7）将离心管短暂离心并置于磁力架中，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。

8）保持离心管始终处于磁力架中，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 s，小心移除上清。

9）重复步骤8。

10）保持离心管始终处于磁力架中，开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂（约5 min）。

注意：切记磁珠不要干燥时间太久，磁珠干燥过度将影响纯化效果。

11）将离心管从磁力架中取出，加入适量ddH₂O（≥20 μL），涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀，室温孵育5 min。

12）将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后（约5 min），小心吸取上清至干净的管中，即完成分选。

3. DNA片段分选参考条件

通过超声法将小牛胸腺DNA进行片段化，制备100-1000 bp的Smear片段，根据表1进行双轮分选。结果使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析（图2）。

表1磁珠文库分选推荐比例

DNA片段大小	250-350 bp	320-420 bp	450-550 bp	550-700 bp	700-900 bp	800-1000 bp
第一轮体积比（Beads:DNA）	0.80×	0.70×	0.60×	0.55×	0.50×	0.45×
第二轮体积比（Beads:DNA）	0.20×	0.20×	0.20×	0.15×	0.15×	0.15×

注：表中“×”表示样品DNA体积。如文库插入片段长度为250 bp，样品DNA体积为100mL，则第一轮分选磁珠使用体积为0.80×100 mL=80 mL；第二轮分选磁珠使用体积为0.20×100 mL=20 mL。

图2 Agilent 2100 high sensitivity DNA chip electopherogram

Smear fragments溶于ddH₂O，使用0.80×/0.20×至0.45×/0.15×磁珠进行片段分选

HB220528

Q：12601可以用来纯化DNA吗？

A：可以纯化150bp以上的DNA片段，如果纯化的DNA中含有较多的150bp以下的建议用货号12600的产品，可以纯化50bp以上的DNA。

Q：12601可以分选1Kb或以上的DNA片段吗？

A：需要自行摸索体系，目前筛选的片段范围确定的体系为说明中的体系，其它片段分选的可以参考说明书中的分选体系调整。

Q： 不小心将磁珠放到-20℃，但未结冰，是否可以继续使用？

A：不建议使用。因为低温会破坏磁珠的结构，使得磁珠的抓取效率降低，影响磁珠回收性能。

Q：磁珠未开封的时候 4℃保存，开封后一直室温保存使用，是否会影响磁珠的回收性能？

A：室温放置对磁珠的回收性能会有一定影响，不建议室温放置太久，使用完后建议 4℃ 保存。PEG 分离效果易受 pH、温度等影响。

Q：磁珠原理

A：1) DNA 分选磁珠：基于一种固相载体可逆化固定（SPRI）的分离纯化方法，磁珠体系一般包含：磁珠、DNA、PEG、盐离子（主要是 Na+）等。在一定浓度的 PEG 和盐离子环境中，DNA 可通过 Na+桥吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面（即固相载体），该过程是可逆的，在不同的 PEG 浓度条件下，结合的 DNA 分子可以被洗脱回收。

2）RNA 纯化磁珠：目前还没有报道明确的原理，一般来说也是静电吸附，但如何做到特异性吸附 RNA，目前我们也不清楚（因为磁珠不是我们生产的，这类产品商家都有各自的专利和机密）。

3）RNA 富集磁珠：磁珠上偶联了 Oligo（dT）的微米级顺磁性微球，在一定浓度的缓冲液中通过与带有poly（A）尾巴的mRNA 相结合，将mRNA 从总RNA 中进行分离纯化。

Q：磁珠回收率低可能的原因是什么？

A：1）磁珠与DNA 混匀不充分，未能充分吸附。建议反应体系充分混匀；

2）磁珠比例不对，建议按照说明书进行选择合适的比例；

3）孵育时间不足，保证孵育时间至少 5 min；

4）磁珠分选时，二轮磁珠吸附的时候吸到磁珠。可在 200 μL 枪头前串联 10μL 枪头用于移液，可防止吸到磁珠；

5）磁珠洗涤时的乙醇非现配，导致乙醇浓度过低，建议乙醇浓度不低于 70%；

6）干燥过度：磁珠长时间干燥导致表面龟裂，DNA 难以洗脱，得率降低；建议干燥时间不宜过长，表面刚出现龟裂即可；

7）洗脱液体积不足：最终洗脱液应完全覆盖管内磁珠。

Q：12601可以纯化或回收150bp以下的片段吗？

A：不建议使用12601，建议使用12600，最低可回收100bp左右的片段，50bp以上的回收率可能会有影响。

Q：是否可以纯化单链DNA，该使用多少磁珠？

A：磁珠可以吸附双链DNA和单链DNA，但不能区分单链或双链DNA。磁珠纯化单链DNA的倍数可以参考双链的说明书。

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