Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix

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FAQ

COA

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Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预溶液,具有荧光强度高,灵敏度高和特异性强,扩增产量高等特点,颜色为蓝色,具有加样示踪的作用。核心组分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动,可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。同时配方添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因扩增的促进因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

 

储存条件

-25~-15℃避光保存,有效期18个月。

 

使用说明

  1. 推荐qPCR反应体系

组分

体积 μL***

体积 μL***

终浓度

Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix

25

10

Forward Primer (10 μM)*

1

0.4

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)*

1

0.4

0.2 μM

模板DNA/cDNA**

x

x

无菌超纯水

Up to 50

Up to 20

1 qPCR反应体系

*通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

**如模板为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10,最佳模板加入量以保证扩增得到的Ct值在20-30个循环为宜

***推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性;上机前需充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

 

  1. 反应程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95℃

2 min

1

变性

95

10 sec

40

退火/延伸*

60

30 sec**

熔解曲线阶段*

仪器默认设置

1

2 qPCR反应程序

*退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。

**荧光信号采集:请勿忘记打开荧光信号采集,按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec:Applied Biosystems 7300

32 sec:Applied Biosystems 7500

***熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

 

适用机型

ABI:7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR

 

引物设计指南

  1. 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳,可以在100 bp-300 bp内选择。
  2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
  3. 引物碱基分布均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
  4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
  5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物 3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
  6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀,手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。
  3. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11141ES),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
  4. 若需要电泳,为了获得清晰的条带,建议将qPCR产物稀释20-30倍后进行电泳。
  5. 本产品仅作科研用途!
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix

暂无内容

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Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预溶液,具有荧光强度高,灵敏度高和特异性强,扩增产量高等特点,颜色为蓝色,具有加样示踪的作用。核心组分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动,可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。同时配方添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因扩增的促进因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

 

储存条件

-25~-15℃避光保存,有效期18个月。

 

使用说明

  1. 推荐qPCR反应体系

组分

体积 μL***

体积 μL***

终浓度

Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix

25

10

Forward Primer (10 μM)*

1

0.4

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)*

1

0.4

0.2 μM

模板DNA/cDNA**

x

x

无菌超纯水

Up to 50

Up to 20

1 qPCR反应体系

*通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

**如模板为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10,最佳模板加入量以保证扩增得到的Ct值在20-30个循环为宜

***推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性;上机前需充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

 

  1. 反应程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95℃

2 min

1

变性

95

10 sec

40

退火/延伸*

60

30 sec**

熔解曲线阶段*

仪器默认设置

1

2 qPCR反应程序

*退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。

**荧光信号采集:请勿忘记打开荧光信号采集,按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec:Applied Biosystems 7300

32 sec:Applied Biosystems 7500

***熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

 

适用机型

ABI:7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR

 

引物设计指南

  1. 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳,可以在100 bp-300 bp内选择。
  2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
  3. 引物碱基分布均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
  4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
  5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物 3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
  6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀,手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。
  3. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11141ES),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
  4. 若需要电泳,为了获得清晰的条带,建议将qPCR产物稀释20-30倍后进行电泳。
  5. 本产品仅作科研用途!
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暂无内容

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