Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预溶液,具有荧光强度高,灵敏度高和特异性强,扩增产量高等特点,颜色为蓝色,具有加样示踪的作用。核心组分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动,可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。同时配方添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因扩增的促进因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
储存条件
-25~-15℃避光保存,有效期18个月。
使用说明
- 推荐qPCR反应体系
组分 |
体积 (μL)*** |
体积 (μL)*** |
终浓度 |
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix |
25 |
10 |
1× |
Forward Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
模板DNA/cDNA** |
x |
x |
– |
无菌超纯水 |
Up to 50 |
Up to 20 |
– |
表1 qPCR反应体系
*通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
**如模板为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10,最佳模板加入量以保证扩增得到的Ct值在20-30个循环为宜。
***推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性;上机前需充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
- 反应程序
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
2 min |
1 |
变性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
退火/延伸* |
60℃ |
30 sec** |
|
熔解曲线阶段* |
仪器默认设置 |
1 |
表2 qPCR反应程序
*退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。
**荧光信号采集:请勿忘记打开荧光信号采集,按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:
20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec:Applied Biosystems 7300
32 sec:Applied Biosystems 7500
***熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。
适用机型
ABI:7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
引物设计指南
- 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳,可以在100 bp-300 bp内选择。
- 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
- 引物碱基分布均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
- 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
- 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物 3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
- 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
注意事项
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀,手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。
- 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11141ES),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
- 若需要电泳,为了获得清晰的条带,建议将qPCR产物稀释20-30倍后进行电泳。
- 本产品仅作科研用途!
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预溶液,具有荧光强度高,灵敏度高和特异性强,扩增产量高等特点,颜色为蓝色,具有加样示踪的作用。核心组分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动,可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。同时配方添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因扩增的促进因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
储存条件
-25~-15℃避光保存,有效期18个月。
使用说明
- 推荐qPCR反应体系
组分 |
体积 (μL)*** |
体积 (μL)*** |
终浓度 |
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix |
25 |
10 |
1× |
Forward Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
模板DNA/cDNA** |
x |
x |
– |
无菌超纯水 |
Up to 50 |
Up to 20 |
– |
表1 qPCR反应体系
*通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。
**如模板为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10,最佳模板加入量以保证扩增得到的Ct值在20-30个循环为宜。
***推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性;上机前需充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
- 反应程序
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
95℃ |
2 min |
1 |
变性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
退火/延伸* |
60℃ |
30 sec** |
|
熔解曲线阶段* |
仪器默认设置 |
1 |
表2 qPCR反应程序
*退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。
**荧光信号采集:请勿忘记打开荧光信号采集,按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:
20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec:Applied Biosystems 7300
32 sec:Applied Biosystems 7500
***熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。
适用机型
ABI:7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
引物设计指南
- 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳,可以在100 bp-300 bp内选择。
- 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
- 引物碱基分布均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
- 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
- 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物 3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
- 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
注意事项
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀,手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。
- 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11141ES),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
- 若需要电泳,为了获得清晰的条带,建议将qPCR产物稀释20-30倍后进行电泳。
- 本产品仅作科研用途!
暂无内容
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