辉光型萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒|Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit
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萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61kDa的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化萤光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物萤光，该萤光可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示：
图1：萤火虫萤光素酶检测原理图
Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay kit是一种辉光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。
相对于闪光型Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit（Cat#.11401），本品具有以下优点：1）发光信号更稳定性，为实验设计提供了更大的灵活性。2）采用加样-混匀-检测的操作方法，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，大大的简化了实验流程。3）无明显刺激性气味。
本试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2h左右（22℃），满足绝大多数高通量实验需求。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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11404JP60 （100 T） |
11404JP80 （1000 T） |
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11404-A |
辉光型萤火虫萤光素酶缓冲液 |
10 ml |
100 ml |
|
11404-B |
辉光型萤火虫萤光素酶底物 |
1 vial |
1 vial |
运输与保存方式
干冰运输。未拆封试剂盒-20℃保存，有效期1年。
溶解分装后的辉光型萤火虫萤光素酶底物于-70℃避光保存1年，或-20℃短期保存不超过1个月。
使用说明
1.需自备的材料
单/多道移液器、不透光细胞培养白板、化学发光仪或带化学发光检测模块的酶标仪。
2.检测试剂准备
首次使用时将辉光型萤火虫萤光素酶缓冲液一次性全部倒入辉光型萤火虫萤光素酶底物瓶中，充分混匀后按使用需求分装，建议-70℃长期保存或-20℃保存不超过一个月。分装冻存后的检测试剂，后续每次实验前需平衡至室温。
注：辉光型萤火虫萤光素酶缓冲液可以室温或水浴融化，但温度不能超过25℃。
3.操作步骤
1）从细胞培养箱中取出含哺乳动物细胞的培养板，放置5-15 min，平衡至室温。
2）加检测试剂：加入与待测细胞培养液等体积并平衡至室温的检测试剂（例如，96孔板通常加入100 μl培养液，相应加入100 μl检测试剂；384孔板通常加入30 μl培养液，相应加入30 μl检测试剂）。
3）振荡混匀：为了使得细胞裂解充分，建议在水平摇床上室温混匀5-10 min（注：不要用移液器吹吸混匀，产生的气泡会影响发光检测读数。混匀时间可根据细胞量进行适当调整，以确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果）。
4）检测：在化学发光检测仪或带化学发光模块的多功能酶标仪上检测发光信号，加入检测试剂后2 h内完成检测。
注意事项
1）反应温度：酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养液平衡至室温（20-25℃）。
2）检测仪器：能检测化学发光的仪器都适用，但由于不同仪器的设置和灵敏度不同，测得的光信号值也会不同。
3）检测板：为防止孔间干扰，推荐使用不透光细胞培养白板。
4）检测设置：Luminescence，350-700 nm，建议读板时间设为0.5-1 sec。
5）发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，应确保同组内不同样本检测条件一致。
6）多个细胞培养板检测时，请尽量确保每板加入检测溶液后孵育时间一致，以获得最佳的检测结果。
7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 |
11401JP60/76/80 |
100/500/1000T |
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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双萤光素酶报告基因检测试剂盒HOT |
11402JP60/80 |
100/1000T |
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Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒HOT |
11405JP60/80 |
100/1000T |
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pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc萤光素酶报告基因质粒阳性对照 |
11556JP03 |
1μg |
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Luciferase Reporter Plasmid negative control （萤光素酶报告基因质粒阴性对照） |
11555JP03 |
1μg |
|
pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海肾萤光素酶报告基因质粒） |
11558JP03 |
1μg |
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Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒 |
10911JP20 |
20T |
|
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液 |
10149JP08 |
5ml |
|
DH5α Chemically Competent Cell DH5α化学感受态细胞 |
11802JP80 |
10×100μl |
|
Fetal Bovine Serum Origin South America Gold胎牛血清（南美特级） |
40130JP76 |
500ml |
HB220325
萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61kDa的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化萤光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物萤光，该萤光可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示：
图1：萤火虫萤光素酶检测原理图
Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay kit是一种辉光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。
相对于闪光型Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit（Cat#.11401），本品具有以下优点：1）发光信号更稳定性，为实验设计提供了更大的灵活性。2）采用加样-混匀-检测的操作方法，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，大大的简化了实验流程。3）无明显刺激性气味。
本试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2h左右（22℃），满足绝大多数高通量实验需求。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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11404JP60 （100 T） |
11404JP80 （1000 T） |
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11404-A |
辉光型萤火虫萤光素酶缓冲液 |
10 ml |
100 ml |
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11404-B |
辉光型萤火虫萤光素酶底物 |
1 vial |
1 vial |
运输与保存方式
干冰运输。未拆封试剂盒-20℃保存，有效期1年。
溶解分装后的辉光型萤火虫萤光素酶底物于-70℃避光保存1年，或-20℃短期保存不超过1个月。
使用说明
1.需自备的材料
单/多道移液器、不透光细胞培养白板、化学发光仪或带化学发光检测模块的酶标仪。
2.检测试剂准备
首次使用时将辉光型萤火虫萤光素酶缓冲液一次性全部倒入辉光型萤火虫萤光素酶底物瓶中，充分混匀后按使用需求分装，建议-70℃长期保存或-20℃保存不超过一个月。分装冻存后的检测试剂，后续每次实验前需平衡至室温。
注：辉光型萤火虫萤光素酶缓冲液可以室温或水浴融化，但温度不能超过25℃。
3.操作步骤
1）从细胞培养箱中取出含哺乳动物细胞的培养板，放置5-15 min，平衡至室温。
2）加检测试剂：加入与待测细胞培养液等体积并平衡至室温的检测试剂（例如，96孔板通常加入100 μl培养液，相应加入100 μl检测试剂；384孔板通常加入30 μl培养液，相应加入30 μl检测试剂）。
3）振荡混匀：为了使得细胞裂解充分，建议在水平摇床上室温混匀5-10 min（注：不要用移液器吹吸混匀，产生的气泡会影响发光检测读数。混匀时间可根据细胞量进行适当调整，以确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果）。
4）检测：在化学发光检测仪或带化学发光模块的多功能酶标仪上检测发光信号，加入检测试剂后2 h内完成检测。
注意事项
1）反应温度：酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养液平衡至室温（20-25℃）。
2）检测仪器：能检测化学发光的仪器都适用，但由于不同仪器的设置和灵敏度不同，测得的光信号值也会不同。
3）检测板：为防止孔间干扰，推荐使用不透光细胞培养白板。
4）检测设置：Luminescence，350-700 nm，建议读板时间设为0.5-1 sec。
5）发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，应确保同组内不同样本检测条件一致。
6）多个细胞培养板检测时，请尽量确保每板加入检测溶液后孵育时间一致，以获得最佳的检测结果。
7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。
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货号 |
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Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 |
11401JP60/76/80 |
100/500/1000T |
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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双萤光素酶报告基因检测试剂盒HOT |
11402JP60/80 |
100/1000T |
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Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒HOT |
11405JP60/80 |
100/1000T |
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pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc萤光素酶报告基因质粒阳性对照 |
11556JP03 |
1μg |
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Luciferase Reporter Plasmid negative control （萤光素酶报告基因质粒阴性对照） |
11555JP03 |
1μg |
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11558JP03 |
1μg |
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10149JP08 |
5ml |
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DH5α Chemically Competent Cell DH5α化学感受态细胞 |
11802JP80 |
10×100μl |
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Fetal Bovine Serum Origin South America Gold胎牛血清（南美特级） |
40130JP76 |
500ml |
HB220325
Q：萤光素酶检测能用荧光显微镜吗？
A：不能。 需要带生物化学发光模块的仪器， 全波长 350-700 nm 检测。 如GloMaxTM20/20（单管检测），Biotex HTX 多功能酶标仪（配备自动进样器）。
Q：细胞裂解之后的裂解液能否在-80℃保存？
A：可保存在-80℃，基本与蛋白的保存方法类似。裂解后的样本可在 -80 ℃保存半年， -20 ℃保存一个月。
Q：荧光信号值太高该如何进行调整？
A：将裂解的样品进行稀释，或在转染实验后，减少细胞的孵育时间。
Q：应该选择单报告基因检测还是双报告基因检测？
A：
[1] Zhou Z, Zheng X, Mei X, et al. Hsa_circ_0080229 upregulates the expression of murine double minute-2 (MDM2) and promotes glioma tumorigenesis and invasion via the miR-1827 sponging mechanism. Ann Transl Med. 2021;9(9):762. doi:10.21037/atm-20-7123(IF:3.932)