产品描述

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
41202-A	Exosome isolation solution（ Serum/Plasma）	41202JP30/30 mL

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41202-A）充分混匀。

2、产品只针对血清/血浆样本，不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，

请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、取1 mL血清/血液样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3、将转移的上清，4℃，10,000×g离心20 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，加入4倍体积的1×PBS充分混匀。

Serum/Plasma+PBS	41202-A试剂用量
200   μL+800 μL	200   μL
1.0   mL+4.0 mL	1.0   mL

2、在PBS稀释后的样品中，继续加入相应量的41202-A试剂；盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

注：加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=2.5:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

注：此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤4，重新进行洗涤和沉淀。

6、纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。

外泌体纯化（可选）：

鉴于血清/血浆中杂蛋白较多，如果后续需要进行细胞共培养或者高通量测序，建议进行进一步纯化。可以使用密理博100kD的孔径的超滤管于4℃以14,000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒；除此之外，还可以使用抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

效果展示

NTA粒径检测：结果显示通过Yeasen外泌体抽提获得的外泌体分散性好，大小均一，峰形单一。
	样品来源：血液 检测仪器：ZetaView 上清用量：200μL
表面标志物分析：通过Western Blot分析外泌体表面蛋白，可以很好的检测到TSG101，CD63和MHCC的存在。
	样品来源：血液 裂解方式：RIPA裂解液 样品用量：200 μL
核酸分析：通过Agilent 4200分析，可以检测到较为明显的外泌体小RNA条带，足以满足下游高通量测序的需求。
	样品来源：血液 检测仪器：Agilent 4200 抽提方法：Trizol 样品用量：0.6 mL

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	货号	名称	规格	价格
外泌体分离	41201JP25/50	Hieff® Quick exosome isolation kit（for Cell Culture Media）细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒	25 mL/50 mL	2155.00/3855.00
	41202JP30	Hieff® Quick exosome isolation kit（ for Serum/Plasma）血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒	30 mL	2155.00
外泌体定量	20118JP60	Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液	100 mL	228.00
	20201JP76	BCA Protein Quantification Kit BCA 蛋白浓度测定试剂盒（增强型）	500 T(100 mL)	288.00
外泌体鉴定 （Western Blot）	36231JP10	Precast Protein Improve Gels, 4%-20%, 15 wells 4%-20%高分辨率梯度预制胶,15孔	1盒（10块）	378.00
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	36234JP10	Precast Protein Improve Gels, 12%, 10 wells 12%高分辨率梯度预制胶,10孔	1盒（10块）	236.00
	36235JP10	Precast Protein Improve Gels, 15%, 10 wells 15%高分辨率梯度预制胶,10孔	1盒（10块）	378.00
	20351JP76	GoldBand 3-color Regular Range Protein Marker（10-180kDa）三色预染蛋白质分子量标准	2×250 μL	676.00
	20352JP76	GoldBand 3-color High Range Protein Marker（10-245kDa）三色预染蛋白质分子量标准	2×250 μL	786.00
外泌体标记	40726JP10	DiI (DiIC18(3)) 细胞膜橙红色荧光探针	10 mg	398.00
	40757JP25	DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针	25 mg	988.00

 HB180417

Q:41202 可以提取哪些样本的外泌体？

A:细胞上清液、尿液（可直接提取）、脑脊液（需处理后再提取）。其他的组织液包括体液、唾液、卵泡液、精液等提取效率较低，建议客户用专门的组织液提取试剂盒。

Q:外泌体血液样本提取需注意事项？

A:1.全血经过长时间放置，冷冻、离心、会发生溶血现象，无法提取外泌体，必须做好血清血浆的分离。2.去除血清外源的外泌体。

Q:如何去除血清外源的外泌体？

A:1.将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 10h，去除血清外泌体；

2. 选择无血清培养基进行细胞培养。

Q:无外泌体血清培养基/无血清培养基在什么时候使用？

A:细胞融合度达到 60%-70%时，换成新鲜的无外泌体血清培养基（或者无血清培养基），待细胞融合度达到 80%-95%左右时收取上清即可。

 

[1] Han J, Zhang L, Hu L, et al. Circular RNA-Expression Profiling Reveals a Potential Role of Hsa_circ_0097435 in Heart Failure via Sponging Multiple MicroRNAs. Front Genet. 2020;11:212. Published 2020 Mar 10. doi:10.3389/fgene.2020.00212(IF:3.260)