产品简介

凝血酶是由大小分别为31 KD和6 KD的两条肽链通过二硫键组成的一种丝氨酸蛋白水解酶，可从动物血浆中利用已激活凝血酶原水解制得，可催化纤维蛋白原（fibrinogen）水解释放A肽和B肽，由此形成纤维蛋白单体，单体进一步聚合，在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块，常用于诊断学中凝血化验、凝血因子检测、血液或血浆的脱纤维化等；另外，由于凝血酶切割序列专一，水解效率高，因此在分子生物学、生物化学或生物工程制药研究中也常作为工具酶用于重组融合蛋白（包含凝血酶识别位点）的特异性断裂。

本品是从牛的血浆纯化制得，具有纯度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、灭活病毒、生产稳定性好等特点。该酶最适切割位点：A-B-Pro-Arg-▼-X-Y （其中，A和B为疏水氨基酸，X和Y为非酸性氨基酸），常见的识别序列为：1. Leu-Val-Pro-Arg-▼-Gly-Ser。2. Gly-Arg-▼-Gly。

产品信息

产品性质

储存条件

2~8℃保存，有效期3年。

使用方法（切割体系）

本品有效切割质量比1:2000，通常在未做过预实验的情况下建议在1:1000质量比进行体系的优化，即1 mg的目的蛋白加入2 U的酶（2000 U/mg），使用时可用生理盐水将酶配成100 U/mL，有效消化缓冲液：20 mM Tris-HCl，含150 mM NaCl，pH 8.0。在20℃-37℃切割0.3-16 h。

注意：

① 具体反应温度可根据融合蛋白的性质而定，如需要低温保存的蛋白，可在4℃切割24 h。

② 因为凝血酶会吸附在玻璃上，建议用塑料管分装冻存（-20℃）凝血酶溶液。

注意事项

1. 此冻干产品稳定性好，2~8℃条件下保存3年，酶活力未有显著变化。室温条件下保存1年，酶活力未有显著变化。

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230908

Q：该产品的最适反应温度是多少？

A：具体反应温度可根据融合蛋白的性质而定。

Q：凝血酶常用于哪些实验？

A：常用于诊断学中凝血化验、凝血因子检测、血液或血浆的脱纤维化等；也常作为工具酶，用于重组融合蛋白（包含凝血酶识别位点）的特异性断裂。

Q：该产品有何特点？

A：本品是从牛的血浆纯化制得，具有纯度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、灭活病毒、生产稳定性好等特点。

Q：该产品在 SDS-PAGE 检测图谱中有条带吗？

A：没有。

Q：我们凝血酶的酶活指的是每mg干粉的活性吗？

A：我们的凝血酶没有每毫克干粉的活性指标，说明书的的比活度指的是产品中每毫克蛋白质含有的凝血酶活性。

Q：该产品需要用什么溶解？ 消化缓冲液加多少？

A：建议凝血酶母液用生理盐水配制，切割时的缓冲液最好加入0.9%的氯化钠，可以在4℃切割24小时。建议加入等量的消化缓冲液（推荐20mMTris-HCl缓冲液,含150mM氯化钠,pH8.0）

Q：牛凝血酶按照体系切不掉，蛋白还是挂柱的？

A：如果在4℃切割不明显，可以尝试在37℃进行切割实验，每2小时补加适量的凝血酶，看看是否能有效切割。

Q：你们有验证过的数据吗，这个酶在不同温度的切割效果？

A：用我们实验室的融合蛋白，每1mg融合蛋白加凝血酶5U，反应缓冲体系为20mM Tris-HCl 含0.15M 氯化钠，pH7.8，比较37℃和4℃的切割效果，反应时间4小时，两种温度条件下均可实现基本完全切割，在1小时和2小时，37℃切割效果明显较4℃好。4小时后两者差别不明显。

Q：牛凝血酶1kU是相当于多少g？干粉是多少g？

A：我们的凝血酶每1KU中约含有凝血酶蛋白质0.5mg，凝血酶1KU每支中干粉质量约30mg，大部分为辅料。

Q：这个牛凝血酶配成母液后在什么条件下储存比较好，可以储存多久？？

A：一般建议一次用完。凝血酶产品为冻干粉末，溶解时，建议每支凝血酶加0.9%氯化钠溶液1~2ml复溶，制成浓溶液，该浓溶液在-20℃以下保存，6个月内活性变化不显著，但应避免反复冻融。临用前，再用工作液稀释至终浓度。

一般应避免使用纯水溶解和稀释，在纯水中凝血酶容易发生变性失活。

Q：牛凝血酶酶切体系是否可以用磷酸盐缓冲代替呢？

A：一般磷酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液都是可以的。

Q：产品在常温下放了几天，有影响吗？

A：产品在常温下放置一周以内影响不大。

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