Q 6FF强阴离子交换预装柱5mL
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COA
已发表文献
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。Q强阴离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-N+(CH3)3。本品Q强阴离子交换预装柱是Q强阴离子交换层析填料FF的中压预装柱，规格为5 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品性质
|
基质 |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
|
粒径 |
45-165 µm |
|
离子交换类型 |
强阴离子 |
|
载量 |
～0.18-0.25 mmol Cl–/mL 基质 |
|
耐压 |
0.3 MPa |
|
建议流速 |
400-700 cm/h |
|
pH范围 |
2-12（长期）/ 2-14（短期） |
|
储存缓冲液 |
20%乙醇 |
|
柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm（5 mL） |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存，有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH（通常低于目的物等电点1个 pH 单位）缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐（如1M NaCl）的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1：阴离子交换缓冲液
|
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度（mM） |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
|
4.3-5.3 |
N-Methylpiperazine |
20 |
Cl– |
4.75 |
|
4.8-5.8 |
Piperazine |
20 |
Cl–或HCOO– |
5.33 |
|
5.5-6.5 |
L-Histidine |
20 |
Cl– |
6.04 |
|
6.0-7.0 |
bis-Tris |
20 |
Cl– |
6.48 |
|
6.2-7.2 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl– |
6.65 |
|
7.3-8.3 |
Triethanolamine |
20 |
Cl–或CH3COO– |
7.76 |
|
7.6-8.6 |
Tris |
20 |
Cl– |
8.07 |
|
8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
20 |
SO42- |
8.52 |
|
8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
50 |
Cl–或CH3COO– |
8.52 |
|
8.4-9.4 |
Diethanolamine |
50 |
Cl– |
8.88 |
|
8.4-9.4 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl– |
8.88 |
|
8.6-9.6 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl– |
9.10 |
|
9.0-10.0 |
Ethanolamine |
20 |
Cl– |
9.50 |
|
9.2-10.2 |
Piperazine |
20 |
Cl– |
9.73 |
|
10.0-11.0 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl– |
10.55 |
|
10.6-11.6 |
Piperidine |
20 |
Cl– |
11.12 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4）利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3）层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
|
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。 |
|
样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
||
|
洗脱样品较杂 |
填料重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。 |
|
平衡不充分 |
增加平衡液体积，确保填料充分平衡/洗杂。 |
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。Q强阴离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-N+(CH3)3。本品Q强阴离子交换预装柱是Q强阴离子交换层析填料FF的中压预装柱，规格为5 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品性质
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基质 |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
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粒径 |
45-165 µm |
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离子交换类型 |
强阴离子 |
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载量 |
～0.18-0.25 mmol Cl–/mL 基质 |
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耐压 |
0.3 MPa |
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建议流速 |
400-700 cm/h |
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pH范围 |
2-12（长期）/ 2-14（短期） |
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储存缓冲液 |
20%乙醇 |
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柱子尺寸 |
1.6×2.5 cm（5 mL） |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存，有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH（通常低于目的物等电点1个 pH 单位）缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐（如1M NaCl）的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1：阴离子交换缓冲液
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pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度（mM） |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
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4.3-5.3 |
N-Methylpiperazine |
20 |
Cl– |
4.75 |
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4.8-5.8 |
Piperazine |
20 |
Cl–或HCOO– |
5.33 |
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5.5-6.5 |
L-Histidine |
20 |
Cl– |
6.04 |
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6.0-7.0 |
bis-Tris |
20 |
Cl– |
6.48 |
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6.2-7.2 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl– |
6.65 |
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7.3-8.3 |
Triethanolamine |
20 |
Cl–或CH3COO– |
7.76 |
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7.6-8.6 |
Tris |
20 |
Cl– |
8.07 |
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8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
20 |
SO42- |
8.52 |
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8.0-9.0 |
N-Methyl-diethanolamine |
50 |
Cl–或CH3COO– |
8.52 |
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8.4-9.4 |
Diethanolamine |
50 |
Cl– |
8.88 |
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8.4-9.4 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl– |
8.88 |
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8.6-9.6 |
bis-Tris propane |
20 |
Cl– |
9.10 |
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9.0-10.0 |
Ethanolamine |
20 |
Cl– |
9.50 |
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9.2-10.2 |
Piperazine |
20 |
Cl– |
9.73 |
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10.0-11.0 |
Propane 1,3-Diamino |
20 |
Cl– |
10.55 |
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10.6-11.6 |
Piperidine |
20 |
Cl– |
11.12 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4）利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3）层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。 |
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样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。 |
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洗脱样品较杂 |
填料重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。 |
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平衡不充分 |
增加平衡液体积，确保填料充分平衡/洗杂。 |
暂无内容
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